The invention discloses a mutant of beta-glucuronidase with improved thermal stability, belonging to the field of bioengineering. Site-directed mutagenesis of a beta-glucuronidase from basidiomycete Talaromyces pinophilum Li_93 (Preservation No. CGMCC No. 11765) resulted in the mutation of its coding site 212 valine, 220 threonine, 238 cysteine and 348 valine to arginine, and the deletion of 23 amino acids at the N-terminal of the enzyme. The recombinant plasmid of the mutant gene was transfected into Pichia pastoris GS115 for expression, and a mutant of beta glucuronidase with improved thermal stability was obtained. The half-life of the mutant of beta-glucuronidase described in the present invention is 81 minutes and 25 minutes longer than that of the wild type at 55 C and 70 C, 3 times and 2.3 times longer than that of the wild type. The process of high temperature conversion of GL was established by using the mutant. The beta glucuronidase mutant obtained by the invention has broad industrial application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种热稳定性提高的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体
本专利技术涉及一种热稳定性提高的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体，属于生物工程
技术介绍
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase，EC：3.2.1.31)能够识别并催化各种类型的β-葡萄糖醛酸糖苷键，同时释放出β-葡萄糖醛酸和相应的配基或苷元。该酶多属于糖苷酶家族1(GH1)和糖苷酶家族2(GH2)，近年来研究发现在糖苷酶家族79(GH79)也有该酶的分布。目前发现哺乳动物、真菌和细菌均能分泌β-葡萄糖醛酸苷酶。β-葡萄糖醛酸苷酶在很多领域具有广泛引用，如人体药物分析、前体药酶导向治疗、肿瘤病理研究等。除此之外，由于β-葡萄糖醛酸苷酶与底物反应后能发生显色反应，因此多作为标记基因，以定位其他目的基因的表达。最近，β-葡萄糖醛酸苷酶被广泛应用于天然糖苷类化合物的改性从而生产高附加值衍生物，市场对该酶的需求快速增长。然而，目前市场上的大部分β-葡萄糖醛酸苷酶为中温酶，在实际应用中，酶的耐热性差、容易失活从而导致反应效率下降，已经成为其工业化应用的瓶颈之一。因此，市场上迫切需要热稳定性高的β-葡萄糖醛酸苷酶。专利...
【技术保护点】
1.一种热稳定性提高的β‑葡萄糖醛酸苷酶突变体，其特征在于，是对基因序列如GenBank登录号为KY609919所编码的β‑葡萄糖醛酸苷酶进行基因突变得到。
【技术特征摘要】
1.一种热稳定性提高的β-葡萄糖醛酸苷酶突变体，其特征在于，是对基因序列如GenBank登录号为KY609919所编码的β-葡萄糖醛酸苷酶进行基因突变得到。2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，是对β-葡萄糖醛酸苷酶第195位、212位、220位、238位和348位的氨基酸进行突变，并对β-葡萄糖醛酸苷酶的N端进行截除。3.如权利要求2所述的突变体，其特征在于，将β-葡萄糖醛酸苷酶第195为丝氨酸突变为异亮氨酸、212位...
【专利技术属性】
技术研发人员：李春，贾锦彤，冯旭东，吕波，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京,11
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