盐酸阿替美唑作为非特异性P450酶抑制剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及盐酸阿替美唑的新应用，具体为盐酸阿替美唑作为非特异性P450酶抑制剂的应用。盐酸阿替美唑对各同工酶的抑制能力没有明显差别，特别是对CYP2C9的抑制作用明显强于1‑ABT，种属差异小。本发明专利技术将兽药盐酸阿替美唑作为新一代P450酶非特异性抑制剂，既可用于动物体外、体内研究，也可用于人体体外系统研究，而且由于盐酸阿替美唑的抑制作用是药物原型不是代谢产物，作为工具药进行体外研究时不必进行预孵育，体内研究时不必提前给药，具有替代现有的经典工具药1‑ABT的明显优势。

【技术实现步骤摘要】
盐酸阿替美唑作为非特异性P450酶抑制剂的应用
本专利技术涉及兽药盐酸阿替美唑的新应用，具体为盐酸阿替美唑作为第二代非特异性P450酶抑制剂的应用。
技术介绍
药物在体内的清除方式主要包括代谢和排泄两种途径，其中代谢转化主要依靠药物代谢酶催化。药物代谢酶包括I相和II相代谢酶，其中I相代谢酶是主要的代谢酶，而P450酶(CYP酶)是主要的I相代谢酶，P450酶是一个超家族，其中又包含多个负责药物代谢的同工酶。药物是否经P450酶代谢清除是非常关键的ADME性质之一，决定其能否成药以及潜在的临床应用前景。因此在药物发现早期阶段，应用非特异性的P450酶抑制剂作为工具药物可确定P450酶介导的代谢清除化合物在体内总清除率中的贡献，根据结果可判断化合物是否会发生基于P450酶的相互作用、是否容易出现人群代谢变异以及是否需要进一步评价和开发。作为工具药的非特异性P450酶抑制剂的先决条件是其能够非特异性地抑制所有的P450同工酶，起到化学方法敲除P450基因的作用。1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole，1-ABT)是经典的非特异性基于机制的P450酶抑制剂。1-ABT本身被P450酶代谢激活后，产物能够与P450酶的血红素辅基共价结合，导致P450酶活性非特异性降低。大量的研究表明，1-ABT可应用于体外和体内研究中，对人以及常用实验动物(大鼠、家兔、豚鼠等)的P450酶都具有非特异的抑制作用。常规的体外实验方法为在肝微粒体或肝细胞体系中，先加入高浓度(1mM)的1-ABT及NADPH预孵育15-30min后，再加入各P450同工酶的探针底物。大量体外实验证明，1-ABT(1mM)预孵育后对CYP酶中多个同工酶都有较明显的抑制作用，特别是对CYP2A6和3A4，几乎能够完全抑制其作用；但对其他几个同工酶的抑制能力强弱不等(19-58％)，除了对CYP2C19和CYP2E1的抑制作用明显强于其特异性抑制剂以外，对其他几个同工酶包括CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9和CYP2D6的抑制作用都低于各自的特异性抑制剂，特别是对CYP2C9的抑制作用很弱，例如在大鼠肝微粒体体系中，50μM的1-ABT仅能60％抑制CYP2C依赖的cyclophosphamide的4-羟基化反应，在人肝微粒体中1mM的1-ABT仅能抑制40％左右的双氯芬酸羟基化反应。由于CYP2C9的底物大都含有羧酸基团，而1-ABT缺乏羧酸阴电荷解释了部分原因，因此1-ABT对CYP2C9介导的S-华法令羟基化反应的抑制能力明显高于双氯芬酸。由于很多临床药物都是CYP2C9的底物，1-ABT的这种缺陷可能会明显低估CYP2C9的作用，从而造成结果的偏差。1-ABT作为经典的P450酶非特异抑制剂，存在对各同工酶的抑制作用强度明显不等，特别是对CYP2C9的抑制能力较弱的问题，在实际应用时常常需要慎重考虑实验结果，必要时与其他抑制剂联合应用，为药物代谢机制研究及化合物代谢清除性质的早期评价带来极大的不确定性。为解决这个关键问题，如能发现作用更强的非特异性P450酶抑制剂替代1-ABT将是非常有意义的。盐酸阿替美唑是具有咪唑结构的a2-肾上腺素受体拮抗剂，能迅速而有效地恢复动物的麻醉和镇静，减轻异氟烷或氯胺酮麻醉引起的不良反应。临床上常用盐酸阿替美唑拮抗美托咪定麻醉猫、犬、猪等动物引起的镇静或心动过缓，同时盐酸阿替美唑能有效地缓解右美托咪定-咪达唑仑-氯胺酮联合麻醉引起的不良反应。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是通过筛查，寻找对P450各同工酶抑制作用均较好的P450酶非特异抑制剂作为第二代工具药，为药物筛选及药物代谢机制研究提供更好的工具药。本专利技术在筛查药物相互作用潜能中发现，盐酸阿替美唑对P450酶各主要同工酶都具有明显的抑制作用，且抑制强度较高，其效果明显优于经典同类工具药1-ABT，可以作为新一代P450酶非特异性抑制剂。本专利技术通过在体外对三个种属(大鼠、犬和人)的肝微粒体孵育体系中，研究盐酸阿替美唑对P450主要同工酶的抑制作用，发现盐酸阿替美唑作为P450酶非特异性抑制剂明显优于经典同类工具药1-ABT，表现在：1、盐酸阿替美唑对P450酶各主要同工酶的抑制作用无明显差异，非特异性好；所述P450同工酶包括CYP1A2，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6及CYP3A4；2、盐酸阿替美唑对P450酶的抑制作用无明显种属差异，可进行种属外推；3、盐酸阿替美唑对P450酶抑制作用的IC50值明显低于1-ABT，抑制能力强，应用剂量(浓度)小；4、盐酸阿替美唑的理化性质好、溶解度好，稳定性好，无明显毒副作用，体外体内应用安全可靠；5、盐酸阿替美唑对代谢酶的抑制作用是非时间依赖的，在预孵育过程中加入和不加入NADPH启动反应后，盐酸阿替美唑对各CYP同工酶的抑制作用没有明显改变，提示主要是药物原型盐酸阿替美唑发挥抑制作用。体外研究时不必进行预孵育，大大简化实验操作流程。本专利技术将兽药盐酸阿替美唑作为新一代P450酶非特异性抑制剂，既可用于动物体外、体内研究，也可用于人体体外系统研究，其抑制作用明显优于现有的经典工具药1-ABT。本专利技术还提供了一种利用盐酸阿替美唑筛选研究P450酶对药物化合物体外清除作用的方法，在肝微粒体孵育体系中加入待测药物化合物及盐酸阿替美唑，以不加盐酸阿替美唑作为阴性对照，比较待测药物化合物体外清除率(CLint)的比值，根据公式贡献度(fm)＝[1-CLint+阿替美唑/CLint-阿替美唑]×100％判断P450酶对药物化合物体外代谢清除的贡献。其中，盐酸阿替美唑在肝微粒体孵育体系中的浓度优选为10～50μM，更优选为20～30μM。一种利用盐酸阿替美唑筛选研究P450酶对药物化合物体内清除作用的方法，同时口服待测药物化合物与盐酸阿替美唑，以不服用盐酸阿替美唑作为阴性对照，比较待测药物化合物体内药物原型暴露量(AUC)变化比值，根据公式贡献度(fm)＝[1-AUC-阿替美唑/AUC+阿替美唑]×100％判断P450酶对药物化合物体内代谢清除的贡献。其中，盐酸阿替美唑给大鼠的口服剂量优选为2～4mg/kg，更优选为3mg/kg。上述技术方案中，盐酸阿替美唑作为非特异性的P450酶抑制剂的工具药物确定P450酶介导的代谢清除在药物化合物总清除率中的贡献，为药物筛选及药物代谢机制提供方法和依据。附图说明图1为盐酸阿替美唑对CYP1A2时间依赖的抑制作用；图2为盐酸阿替美唑对CYP2B6时间依赖的抑制作用；图3为盐酸阿替美唑对CYP2C8时间依赖的抑制作用；图4为盐酸阿替美唑对CYP2C9时间依赖的抑制作用；图5为盐酸阿替美唑对CYP2C19时间依赖的抑制作用；图6为盐酸阿替美唑对CYP2D6时间依赖的抑制作用；图7为盐酸阿替美唑对CYP3A4时间依赖的抑制作用。具体实施方式本专利技术通过在体外对三个种属(大鼠、犬和人)的肝微粒体孵育体系中，应用P450同工酶探针底物法研究盐酸阿替美唑对P450主要同工酶的抑制作用，发现盐酸阿替美唑对三个种属P450主要同工酶介导的底物代谢反应均有明显的抑制作用。结果显示，盐酸阿替美唑对CYP1A2、CYP2B6、CYP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.盐酸阿替美唑作为非特异性P450酶抑制剂的应用。

【技术特征摘要】
1.盐酸阿替美唑作为非特异性P450酶抑制剂的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述P450酶包括CYP1A2，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6和CYP3A4。3.一种利用盐酸阿替美唑筛选研究P450酶对药物化合物体外清除作用的方法，其特征在于，在肝微粒体孵育体系中加入待测药物化合物及盐酸阿替美唑，以不加盐酸阿替美唑作为阴性对照，比较待测药物化合物体外清除率CLint的比值，根据公式贡献度(fm)＝[1-CLint+阿替美唑/CLint-阿替美唑]×100％判断P450酶对药物化合物体外代谢清除的贡献。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄笑梅，张文鹏，李正，张天宏，王娟，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11