用于癌症治疗的AXL特异性抗体-药物缀合物制造技术

本发明专利技术涉及结合至人AXL的抗体‑药物缀合物(ADCs)，其用于治疗用途，特别是用于治疗抗性或难治性癌症。

AXL specific antibody drug conjugates for cancer therapy

The present invention relates to antibody-drug conjugates (ADCs) bound to human AXL, which are used for therapeutic purposes, especially for the treatment of resistant or refractory cancers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的AXL特异性抗体-药物缀合物专利
本专利技术涉及结合至人AXL的抗体-药物缀合物(ADCs)，其用于治疗用途，特别是用于治疗抗性或难治性癌症。专利技术背景AXL是一种104-140kDa跨膜蛋白，其属于哺乳动物受体酪氨酸激酶(RTKs)的TAM亚家族，且具有转化能力(Paccez等人,2014)。AXL细胞外结构域由两个膜-远端N-末端免疫球蛋白(Ig)样结构域(Ig1和Ig2结构域)和两个膜-近侧纤连蛋白III型(FNIII)重复(FN1-和FN2-结构域)的组合构成(Paccez等人,2014)。在各种癌症(包括胃癌、前列腺癌、卵巢癌和肺癌)中已报道了AXL的增强或从头表达(Paccez等人,2014)。值得注意的是，已发现对酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和/或化学疗法具有抗性的几种癌症显示出增强或从头的AXL蛋白。具体地，对表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗具有抗性的肿瘤细胞(Wilson等人,2014；Brand等人,2015；Zhang等人,2012；Blakely等人,2012)或B-raf(BRAF)途径的抑制剂(Müller等人,2014)显示出增强或从头的AXL表达。另外，在对PI3K抑制剂BYL719具有抗性的头颈癌(SCCHN)细胞中(Elkabets等人,2015)、在对HER2靶向剂拉帕替尼具有抗性的乳腺癌中(Liu等人,2009)、在对伊马替尼具有抗性的胃肠间质肿瘤(GIST)中(Mahadevan等人,2015)、对舒尼替尼具有抗性的肾癌中(Zhou等人,2015)、在对ALK抑制剂克里唑替尼具有抗性的神经母细胞瘤细胞和非小细胞肺癌(NSCLC)中(Debruyne等人,2015；Kim等人,2013)、在顺铂具有抗性的食管癌(Hong等人,2013)中、对IGF-IR抗体MAB391具有抗性的横纹肌肉瘤中(Huang等人,2010)、在对FLT3抑制剂米哚妥林(PKC412)或喹扎替尼(AC220)具有抗性的急性骨髓性白血病(AML)中(Park等人,2015)、在耐药性AML中(Hong等人,2008)以及在对伊马替尼具有抗性的慢性粒细胞白血病中(Dufies等人,2011)报道了AXL的增强或从头表达。在获得对二甲双胍的抗性的前列腺癌细胞中也诱导了AXL表达(Bansal等人,2015)。AXL可以在结合其配体、维生素K依赖性生长停滞特异性因子6(Gas6)后被活化。Gas6结合至AXL导致AXL二聚化、自磷酸化以及后续的细胞内信号通路的活化，如PI3K/AKT、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、STAT和NF-κB级联(Leconet等人,2013)。在癌细胞中，AXL表达已经与肿瘤细胞运动性、侵袭、迁移相关，并且参与上皮至间质转化(EMT)(Linger等人,2010)。AXL和/或其配体Gas6的靶向抑制可以作为使用例如小分子或抗AXL抗体的抗肿瘤疗法是有效的(Linger等人,2010)。已经描述了抗AXL抗体，其通过下调受体表达、降低肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡来减弱NSCLC和乳腺癌异种移植物的体内生长(Li等人等人,2009；Ye等人,2010；WO2011/159980,Genentech)。也已报道了各种其他抗AXL抗体(Leconet等人,2013；Iida等人,2014；WO2012/175691,INSERM；WO2012/175692,INSERM；WO2013/064685,PierreFabréMedicaments；WO2013/090776,INSERM；WO2009/063965,ChugaiPharmaceuticals和WO2010/131733)，包括基于抗AXL抗体和吡咯并苯并-二氮杂䓬(PBD)二聚体的ADC(WO2014/174111,PierreFabréMedicament和SpirogenSarl)。然而，存在治疗对酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和/或化学疗法具有抗性或具有产生抗性的高度倾向的癌症(特别是使用AXL-ADC)的改进的方法的需要。专利技术概述本专利技术人已经发现，基于抗AXL抗体的ADC可以用于有效地治疗对某些治疗剂具有抗性或具有产生抗性的高度倾向的癌症。因此，在一个方面，本专利技术涉及包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于治疗对至少一种治疗剂具有抗性的癌症，所述治疗剂选自酪氨酸激酶抑制剂、PI3K抑制剂、结合至受体酪氨酸激酶的拮抗性抗体、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和化疗剂。在一个方面，本专利技术涉及包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于与治疗剂组合治疗癌症，所述治疗剂选自化疗剂、酪氨酸激酶抑制剂、PI3K抑制剂、结合至受体酪氨酸激酶的拮抗性抗体或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。ADC和治疗剂可以例如同时、分开或依次施用。这些和其他方面和实施方案，包括使用基于特征在于其抗原结合特性或序列的抗AXL抗体的AXL-ADC，适用于此类ADC的治疗性部分，此类ADC与某些治疗剂的组合，和治疗抗性肿瘤的方法，在下面进一步详细描述。附图说明图1.抗AXL抗体与用以下转染的HEK293细胞的结合曲线：(A)人AXL-ECD，(B)食蟹猴AXL-ECD，或(C)小鼠AXL-ECD。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)，如实施例2中所述。图2.抗AXL抗体与小鼠-人AXL嵌合体的结合如实施例3中所述进行。测试了以下智人AXL(hsAXL)和小家鼠AXL(mmAXL)嵌合蛋白：(A)hsAXL和模拟物，(B)hsAXL-mmECD，(C)hsAXL-mmIg1，(D)hsAXL-mmIg2，(E)hsAXL-mmFN1，(F)hsAXL-mmFN2。图3.在A431细胞中，抗AXL抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。如实施例4中所述测定了在A431细胞中由抗AXL抗体引起的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。图4.AXL抗体-药物缀合物(AXL-ADC)的结合特性。如实施例5中所述测定了AXL-ADC与用人AXL瞬时转染的HEK293T细胞的结合。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)。图5.由AXL抗体-药物缀合物诱导的体外细胞毒性。如实施例6中解释的，测定了由AXL抗体-药物缀合物诱导的细胞毒性。图6.允许结合至AXL的抗体VH和VL变体。比对了具有相同VL或VH区的抗体，并且分别鉴定了VH(图A-D)或VL(图E)序列中的差异并在图中用方框标明。CDR区用下划线标明。图7.如实施例8中所述测定了LCLC-103H细胞中由ADC诱导的细胞毒性。图8.如实施例9中所述，在治疗性LCLC-103H异种移植模型中MMAE缀合的AXL抗体的抗肿瘤活性。图9.如实施例10中所述，使用AXL单克隆抗体的集合进行冷冻PAXF1657肿瘤切片(胰腺癌PDX模型)的免疫组织化学染色。图10.(A)用AXL-ADC治疗性处理后的平均肿瘤尺寸(PAXF1657模型)。未缀合的AXLHumab(C)和未靶向的ADC(D)未显示出抗肿瘤活性，表明AXL-ADC的治疗能力依赖于MMAE的细胞毒性活性并且依赖于靶向结合，误差线表示S.E.M.。图11.抗AXL抗体与小鼠-人AXL嵌合体的结合如实施例1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含结合至人AXL的抗体的抗体‑药物缀合物(ADC)，其用于治疗对至少一种治疗剂具有抗性的癌症，所述治疗剂选自酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和化疗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.10 EP PCT/EP2015/065900;2016.01.13 US 62/21.包含结合至人AXL的抗体的抗体-药物缀合物(ADC)，其用于治疗对至少一种治疗剂具有抗性的癌症，所述治疗剂选自酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和化疗剂。2.权利要求1所用的ADC，其中所述酪氨酸激酶抑制剂选自埃罗替尼、阿法替尼、吉非替尼、拉帕替尼、奥西莫替尼、罗西替尼、伊马替尼、舒尼替尼、克里唑替尼、米哚妥林(PKC412)和喹扎替尼(AC220)。3.权利要求2所用的ADC，其中所述酪氨酸激酶抑制剂是埃罗替尼或其治疗有效的类似物或衍生物，如拉帕替尼、阿法替尼或吉非替尼。4.权利要求3所用的ADC，其中所述酪氨酸激酶抑制剂是埃罗替尼。5.权利要求1所用的ADC，其中所述丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂是BRAF-抑制剂或MEK-抑制剂。6.权利要求5所用的ADC，其中(a)所述BRAF抑制剂选自威罗菲尼(PLX4032)、达拉菲尼及其任何治疗有效的类似物或衍生物，如PLX4720；(b)所述MEK-抑制剂选自曲美替尼和司美替尼(AZD6244)及其任何治疗有效的类似物或衍生物。7.权利要求6所用的ADC，其中所述BRAF抑制剂是威罗菲尼。8.权利要求6所用的ADC，其中所述BRAF抑制剂是达拉菲尼。9.权利要求5所用的ADC，其中所述MEK-抑制剂是曲美替尼。10.权利要求1所用的ADC，其中所述化疗剂选自紫杉醇、多西他赛、顺铂、二甲双胍、多柔比星、依托泊苷、卡铂或其组合。11.权利要求10所用的ADC，其中所述化疗剂是紫杉醇或其治疗有效的类似物或衍生物，如多西他赛。12.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中(a)所述酪氨酸激酶抑制剂选自EGFR拮抗剂、HER2拮抗剂、ALK抑制剂和FLT3抑制剂或其任何组合；(b)所述丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂选自BRAF抑制剂和MEK抑制剂或其组合；(c)所述化疗剂选自紫杉醇、多西他赛、顺铂、二甲双胍、多柔比星、依托泊苷、卡铂或其组合。13.权利要求12所用的ADC，其中(a)所述酪氨酸激酶抑制剂是EGFR抑制剂；(b)所述丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂是BRAF抑制剂；且(c)所述化疗剂是紫杉烷。14.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述癌症在用所述治疗剂治疗期间获得抗性。15.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述癌症从开始用治疗剂治疗起具有抗性。16.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述癌症是表达AXL的癌症。17.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述癌症选自黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、宫颈癌、头颈部的鳞状细胞癌(SCCHN)、乳腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)、肾癌、前列腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、食道癌、横纹肌肉瘤、急性髓性白血病(AML)或慢性粒细胞白血病(CML)。18.前述权利要求中任一项所用的ADC，其用于与所述治疗剂组合使用，其中所述ADC和所述治疗剂同时、分开或依次施用。19.包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于治疗对埃罗替尼具有抗性的表达AXL的NSCLC。20.权利要求19所用的ADC，其中所述ADC与埃罗替尼组合使用，且所述ADC和埃罗替尼同时、分开或依次施用。21.包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于治疗对威罗菲尼或其治疗有效的类似物或衍生物具有抗性的表达AXL的黑色素瘤，其中所述黑色素瘤在BRAF中表现出突变，所述突变提供对突变BRAF的激酶活性的威罗菲尼抑制。22.权利要求21所用的ADC，其用于与威罗菲尼组合使用，其中所述ADC和威罗菲尼同时、分开或依次施用。23.包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于治疗对达拉菲尼或其治疗有效的类似物或衍生物具有抗性的表达AXL的黑色素瘤，其中所述黑色素瘤在BRAF中表现出突变，所述突变提供对突变BRAF的激酶活性的达拉菲尼抑制。24.权利要求23所用的ADC，其用于与达拉菲尼组合使用，其中所述ADC和达拉菲尼同时、分别或依次施用，其任选地与MEK抑制剂如例如曲美替尼进一步组合施用。25.权利要求21至24中任一项所用的ADC，其中所述突变位于选自V600、L597和K601的BRAF残基中，如选自V600E、V600K、V600D、L597R和K601E的突变。26.包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于治疗对紫杉醇或其治疗有效的类似物或衍生物、如多西他赛具有抗性的表达AXL的宫颈癌。27.权利要求26所用的ADC，其中所述ADC与紫杉醇组合使用，且所述ADC和紫杉醇同时、分开或依次施用。28.包含结合至人AXL的抗体的ADC，其用于与选自化疗剂、酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的治疗剂组合使用以治疗癌症，其中所述ADC和治疗剂同时、分开或依次施用。29.权利要求28所用的ADC，其用于与埃罗替尼组合使用以治疗NSCLC。30.权利要求28所用的ADC，其用于与威罗菲尼组合使用以治疗黑色素瘤，其中所述黑色素瘤在BRAF中表现出突变，所述突变提供对突变BRAF的激酶活性的威罗菲尼抑制。31.权利要求28所用的ADC，其用于与达拉菲尼组合使用以治疗黑色素瘤，其中所述黑色素瘤在BRAF中表现出突变，所述突变提供对突变BRAF的激酶活性的达拉菲尼抑制。32.权利要求30和31中任一项所用的ADC，其中所述突变位于选自V600、L597和K601的BRAF残基中，如选自V600E、V600K、V600D、L597R和K601E的突变。33.权利要求28所用的ADC，其用于与曲美替尼组合使用以治疗黑色素瘤。34.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述ADC包含与所述抗体连接的细胞毒性剂、化疗药物或放射性同位素。35.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述治疗性部分是细胞毒性剂，其任选地用接头连接到所述ADC。36.权利要求35所用的ADC，其中所述细胞毒性剂用可裂解接头连接至所述抗体，所述接头如4-(2-吡啶二硫代)-戊酸N-琥珀酰亚胺酯(SSP)、马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-p-氨基苄氧基羰基(mc-vc-PAB)或AV-1K-lock缬氨酸-瓜氨酸。37.权利要求35至36中任一项所用的ADC，其中所述细胞毒性剂用不可裂解的接头连接至所述抗体，所述不可裂解的接头如4(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸琥珀酸亚胺酯(MCC)或马来酰亚胺基己酰基(MC)。38.权利要求35至37中任一项所用的ADC，其中所述细胞毒性剂选自：DNA靶向剂，例如，DNA烷化剂和交联剂，如卡奇霉素、多卡霉素、rachelmycin(CC-1065)、吡咯并[2,1-c][1,4]苯二氮杂䓬(PBD)和吲哚并苯二氮杂䓬(IGN)；微管靶向剂，如duostatin如duostatin-3、澳瑞他汀如单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、多拉司他汀、美登素、N(2’)-脱乙酰基-N(2’)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)和tubulysin；以及核苷类似物；或其类似物、衍生物或前药。39.权利要求35至38中任一项所用的ADC，其中(a)所述接头是可裂解的且所述细胞毒性剂具有旁观者杀伤能力；(b)所述接头是可裂解的且所述细胞毒性剂不具有旁观者杀伤能力；(c)所述接头是不可裂解的且所述细胞毒性剂具有旁观者杀伤能力；或(d)所述接头是不可裂解的且所述细胞毒性剂不具有旁观者杀伤能力。40.权利要求35至39中任一项所用的ADC，其中所述接头是mc-vc-PAB且所述细胞毒性剂是MMAE。41.权利要求35至39中任一项所用的ADC，其中所述接头是SSP且所述细胞毒性剂是DM1。42.权利要求35至39中任一项所用的ADC，其中所述药物是duostatin3。43.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述抗体不与生长停滞特异性6(Gas6)竞争结合至人AXL。44.权利要求43所用的ADC，其中在Gas6存在的情况下抗体与人AXL的最大结合为在Gas6不存在的情况下的结合的至少90％、如至少95％、如至少97％、如至少99％、如100％，如通过竞争测定法所测定，其中所述结合至人AXL的抗体和所述Gas6之间的竞争在与Gas6和不与Gas6预孵育的A431细胞上确定。45.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述抗体对人AXL的结合亲和力(KD)在0.3x10-9至63x10-9M的范围内，任选地其中所述结合亲和力使用生物膜层干涉测量法使用可溶性AXL细胞外结构域进行测量。46.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述抗体对AXL的解离速率为9.7x10-5至4.4x10-3s-1，任选地其中所述解离速率通过生物膜层干涉测量法使用可溶性重组AXL细胞外结构域进行测量。47.前述权利要求中任一项所用的ADC，其中所述人AXL的氨基酸序列如SEQIDNO:130中所指定。48.前述权利要求中任一项所用的ADC，其结合至如SEQIDNO:147中所指定的食蟹猴AXL。49.前述权利要求中任一项所用的ADC，其包含至少一个结合区，所述结合区包含选自以下的VH区和VL区：(a)VH区，其包含分别为SEQIDNo：36、37和38的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：39、GAS和40的CDR1、CDR2和CDR3序列，[107]；(b)VH区，其包含分别为SEQIDNo：46、47和48的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列，[148]；(c)VH区，其包含分别为SEQIDNo：114、115和116的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：117、DAS和118的CDR1、CDR2和CDR3序列，[733]；(d)VH区，其包含分别为SEQIDNo：51、52和53的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列，[154]；(e)VH区，其包含分别为SEQIDNo：51、52和54的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列，[154-M103L]；(f)VH区，其包含分别为SEQIDNo：57、58和59的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列，[171]；(g)VH区，其包含分别为SEQIDNo：62、63和64的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：65、GAS和66的CDR1、CDR2和CDR3序列，[172]；(h)VH区，其包含分别为SEQIDNo：67、68和69的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：70、GAS和71的CDR1、CDR2和CDR3序列，[181]；(i)VH区，其包含分别为SEQIDNo：72、73和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列，[183]；(j)VH区，其包含分别为SEQIDNo：72、74和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列，[183-N52Q]；(k)VH区，其包含分别为SEQIDNo：78、79和80的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：81、AAS和82的CDR1、CDR2和CDR3序列，[187]；(l)VH区，其包含分别为SEQIDNo：83、84和85的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：86、GAS和87的CDR1、CDR2和CDR3序列，[608-01]；(m)VH区，其包含分别为SEQIDNo：88、89和90的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：91、GAS和92的CDR1、CDR2和CDR3序列，[610-01]；(n)VH区，其包含分别为SEQIDNo：93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613]；(o)VH区，其包含分别为SEQIDNo：98、99和100的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：101、DAS和102的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613-08]；(p)VH区，其包含分别为SEQIDNo：103、104和105的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：106、GAS和107的CDR1、CDR2和CDR3序列，[620-06]；(q)VH区，其包含分别为SEQIDNo：108、109和110的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列，[726]；(r)VH区，其包含分别为SEQIDNo：108、109和111的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列，[726-M101L]；(s)VH区，其包含分别为SEQIDNo：41、42和43的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：44、AAS和45的CDR1、CDR2和CDR3序列，[140]；(t)VH区，其包含分别为SEQIDNo：93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：128、XAS(其中X是D或G)和129的CDR1、CDR2和CDR3序列，[613/613-08]；(u)VH区，其包含分别为SEQIDNo：46、119和120的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为SEQIDNo：49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列，[148/140]；(v)VH区，其包含分别为SEQIDNo：123、124和125的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别为S...

【专利技术属性】
技术研发人员：J博舒伊泽恩，K贾科布森，E布雷，L科普曼，D萨蒂恩，E范登布林克，D维兹，R德荣格，R范迪克胡伊泽恩拉德斯马，D皮珀，HJ迪特泽尔，P帕伦，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK