一种花生高油品种的培育方法技术

本发明专利技术提供了一种花生高油品种的培育方法，主要步骤是将苗龄5～7天的花生幼叶培养在添加NAA、BAP和平阳霉素的诱导和诱变培养基上进行离体诱变培养；将存活的外植体转移到添加BAP和羟脯氨酸的不定芽分化和高油体定向筛选培养基上进行培养；获得的高油苗经无菌嫁接后移栽塑料大棚或高温棚，获得正常种子；高油体后代采用系普法选育，结合海南加代和高温棚加代，每年可以种植3代。本发明专利技术利用离体诱变和离体定向筛选高油体，可以解决常规诱变育种中诱变频率低、无法定向育种的难题；培养基中定向筛选高油体，非高油体被淘汰，可以解决突变体后代鉴定耗费大量人力物力和财力的问题。

A breeding method for high oil variety of peanut

The present invention provides a breeding method for high oil varieties of peanut. The main step is to culture the young leaves of peanut 5~7 days in the induction and mutagenesis medium with NAA, BAP and Yang mycin, and transfer the surviving explants to the adventitious bud differentiation adding BAP and hydroxyprolysine and the directional screening of high oil body. The high oil seedlings were transplanted into plastic sheds or high temperature shed after grafting, and the normal seeds were obtained. The offspring of high oil body were selected by the method of system selection, combined with the Hainan plus and high temperature shed, 3 generations could be planted each year. This invention can solve the problem of low mutation frequency and undirected breeding in conventional mutation breeding by screening high oil body in vitro and in vitro, which can solve the problem that high oil body and non high oil body are eliminated in the culture medium, which can solve the problem that a large amount of manpower and material resources and financial resources can be used for the identification of the mutant offspring.

【技术实现步骤摘要】
一种花生高油品种的培育方法
本专利技术属于花生育种领域，尤其涉及一种花生高油品种的培育方法。
技术介绍
花生是我国第二大油料作物，作为油用品种，含油率每提高1个百分点，可增加纯利润7％，因此广大花生育种家们把培育高油花生新品种作为主要的育种目标之一。然而由于花生遗传多样性差，缺乏高油种质资源，杂交育种难以获得高油后代，因此高产高油品种的选育一直是一个难以解决的问题。诱变技术的利用能够引起基因突变或染色体变异，从而获得自然界不存在或极为罕见的新性状、新类型。然而突变体后代的鉴定需要耗费大量的人力物力和财力。离体诱变结合离体定向筛选高油体，可在培养基上进行诱变和筛选，淘汰非高油体，解决突变体后代鉴定需要耗费大量人力物力财力的问题，并且诱变和筛选不受时间和空间限制。因此，离体诱变定向筛选高油体是培育高油新品种的有效手段。李冠等(农业生物技术，May25,2017,33(5):766-774)利用离体诱变培育花生新品种宇花4号，公开了一种培育花生新品种的方法，该方法中使用含平阳霉素培养基进行诱变，之后使用HYP定向筛选，但是该方法在筛选时需要在筛选培养基与恢复培养基上交替进行，同时移栽至大田前需要在驯化室培养3个周后再移栽田间，驯化室培养3周期间，小苗生长缓慢、且容易染菌、耗费人力物力，占用实验室空间，同时，驯化室培养过程影响生长。
技术实现思路
本专利技术目的是克服上述现有技术的不足，提供一种花生高油品种的培育方法，可以解决常规育种中难以培育高产高油花生品种的问题。为达到解决上述问题的目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：一种花生高油品种的培育方法，具体步骤如下：(1)选取成熟饱满的花生种子在液体培养基中催芽，所述液体培养基为MS基本培养基；(2)取苗龄5～7天的未展开的幼叶作为外植体，接种到诱导及诱变培养基中，进行培养3个周，部分外植体形成芽点；所述诱导培养基以MSB5(MS无机盐+B5有机成分)培养基为基本培养基，添加1～3mg/LNAA、5～7mg/LBAP和5～6mg/L平阳霉素；(3)存活的外植体转移至不定芽分化及筛选培养基上培养，进行高油定向筛选，得到抗性苗(高油苗)；所述不定芽分化及筛选培养基以MSB5培养基为基本培养基，并添加2～4mmol/L羟脯氨酸和3～5mg/LBAP；(4)抗性小苗生长至1～1.5cm时，便可进行无菌嫁接，以高油苗为接穗，灭菌的沙子中催芽萌发的花生实生苗为砧木，嫁接苗再栽植于灭菌的沙子中无菌培养3～5天；(5)嫁接苗炼苗1-2天，直接移栽塑料大棚或高温棚后，用地膜覆盖其上，1个周后撤掉地膜，获得成熟种子；(6)高油苗后代采用系谱育种法选育，结合海南加代和高温棚加代，每年可以种植3代，缩短育种年限3～4年；与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是：1、本专利技术利用苗龄5～7天的未展开的幼叶作为外植体，在添加1～3mg/LNAA、5～7mg/LBAP和5～6mg/L平阳霉素的培养基上进行诱变处理，存活的外植体转移到添加2～4mmol/L羟脯氨酸和3～5mg/LBAP的培养基上诱导不定芽分化，同时进行高油定向筛选，筛选过程无需更换培养基，减少了更换培养基的操作次数，减少了材料被污染的可能，同时节省了人力物力。获得的高油苗经嫁接移栽塑料大棚，高油苗后代采用系普法结合海南和高温棚加代，育成了3个高油花生新品种，其中1个是目前我国含油率最高的品种。2、本专利技术以无菌萌发的花生幼叶作为诱变材料可不受季节限制，常年可以进行诱变处理和定向筛选，操作方便。可以创造和筛选花生高油新种质，直接培育高产高油花生新品种，克服因花生栽培种中缺乏高油种质资源而使得高产高油新品种选育难以突破的困难。利用幼叶做为外植体，不但幼叶分化程度低再生能力强，并且幼叶容易切割，操作简单。3、本专利技术利用离体诱变结合组织培养定向筛选高油苗，筛选过程于培养基中进行，大量不具有抗性的培养材料被淘汰，可节省因突变体后代鉴定需要耗费大量人力、物力、财力的问题；高油苗的再生是通过器官发生途径，首先形成芽点，然后由芽点形成不定芽，每个外植体可形成20～40个不定芽，再生频率高，经筛选获得高油苗的几率提高。4、本专利技术中嫁接苗移栽塑料大棚后，平种(不起垄)，用地膜直接覆盖其上，可以充分保持湿度，因为嫁接苗在空气湿度不足时容易失水而不能成活。并且直接覆盖地膜可以缩短缓苗期，小苗生长快且健壮。5、本专利技术获得的高油苗后代，采用系谱法选育，结合海南加代和高温棚加代，每年可种植3代，缩短育种年限3-4年，大大提高育种效率。附图说明图1是本专利技术离体诱变及离体定向筛选；a：形成芽点的石蜡切片(似线状的深色部分为微管组织结节，顶部细胞非常致密的部分是形成的芽点)；b：形成的芽点；c:羟脯氨酸筛选培养基上形成的不定芽及褐化的外植体；d：定向筛选获得的高油苗；图2是本专利技术培育的高产高油花生品种图，其中左侧图为宇花9号、中间图为宇花14号、右侧图为宇花16号。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步描述，但是本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。此外相关领域的普通技术人员对本专利技术做的任何改动，凡是不背离本专利技术构思的改变或等同替代均包括在本专利技术的保护范围之内。实施例1本专利技术所述一种花生高油品种的培育方法，包括如下步骤：1、催芽培养基的配制选用MS培养基，培养瓶中加脱脂棉作为支撑，做成液体培养基，即MS+30g/L蔗糖。将所述体催芽培养基的pH调至5.8，在培养室温度为25～27℃、光照强度为2000～3000Lx、每日光照为12～14h的条件下进行培养，促使种子萌发。2、诱变及诱导培养基的制备选用MSB5(MS无机成分+B5有机成分)培养基为基本培养基，在此MSB5培养基中添加萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(BAP)和平阳霉素形成诱变及诱导培养基。平阳霉素的添加量为5～6mg/L，NAA添加量为1～3mg/L，BAP添加量为5～7mg/L。本实施例中诱变及诱导培养基为MSB5+1mg/LNAA+6mg/LBAP+5.5mg/L平阳霉素+30g/L蔗糖+8g/L琼脂；将所述诱变及诱导培养基的pH调至5.8，在培养室温度为25～27℃、光照强度为2000～3000Lx、每日光照为12～14h的条件下进行培养，诱导愈伤组织和芽点的形成，同时诱导基因突变或染色体变异。3、不定芽分化及高油苗定向筛选培养基的制备选用MSB5培养基为基本培养基，在此MSB5培养基中添加羟脯氨酸和BAP形成不定芽分化及高油定向筛选培养基，羟脯氨酸的添加量为2～4mmol/L，BAP的添加量为3～5mg/L。本实施例中不定芽分化及高油定向筛选培养基为MS+3mmol/L羟脯氨酸+4mg/LBAP+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，将所述不定芽分化及高油苗定向筛选培养基的pH调至5.8，在培养室温度为25～27℃、光照强度为2000～3000Lx、每日光照为12～14h的条件下进行培养，促使芽点分化形成不定芽，同时进行高油定向筛选。NAA是一种人工合成的广谱植物生长调节剂，具有调节生长、促进生根、抽芽、开花、防止落花落果等作用，本专利技术中用来与BAP共同作用诱导芽点形成。BAP是一种人工合成的嘌呤类植物生长调节剂，可促进细胞分裂、组织分化、种子发芽、侧芽生长等，本专利技术中也用来诱导芽点形成和不定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种花生高油品种的培育方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)选取成熟饱满的花生种子在液体培养基中催芽，所述液体培养基为MS基本培养基；(2)取苗龄5～7天的未展开的幼叶作为外植体，接种到诱导及诱变培养基中培养3个周，部分外植体形成芽点；所述诱导及诱变培养基以MSB5(MS无机盐+B5有机成分)培养基为基本培养基，添加1～3mg/L NAA、5～7mg/L BAP和5～6mg/L平阳霉素；(3)存活的外植体转移至不定芽分化及筛选培养基上培养，进行高油定向筛选，得到抗性苗(高油苗)；所述不定芽分化及筛选培养基以MSB5培养基为基本培养基，并添加2～4mmol/L羟脯氨酸和3～5mg/L BAP；(4)体胚萌发长成的抗性小苗生长至1～1.5cm时，便可进行无菌嫁接，以高油苗为接穗，灭菌的沙子中催芽萌发的花生实生苗为砧木，嫁接苗再栽植于灭菌的沙子中无菌培养4～6天；(5)嫁接苗炼苗1‑2天后，直接移栽塑料大棚或高温棚，获得成熟种子；(6)高油苗后代采用系谱育种法选育，结合海南加代和高温棚加代，每年可以种植3代。

【技术特征摘要】
1.一种花生高油品种的培育方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)选取成熟饱满的花生种子在液体培养基中催芽，所述液体培养基为MS基本培养基；(2)取苗龄5～7天的未展开的幼叶作为外植体，接种到诱导及诱变培养基中培养3个周，部分外植体形成芽点；所述诱导及诱变培养基以MSB5(MS无机盐+B5有机成分)培养基为基本培养基，添加1～3mg/LNAA、5～7mg/LBAP和5～6mg/L平阳霉素；(3)存活的外植体转移至不定芽分化及筛选培养基上培养，进行高油定向筛选，得到抗性苗(高油苗)；所述不定芽分化及筛选培养基以MSB5培养基为基本培养基，并添加2～4mmol/L羟脯氨酸和3～5mg/LBAP；(4)体胚萌发长成的抗性小苗生长至1～1.5cm时，便可进行无菌嫁接，以高油苗为接穗，灭菌的沙子中催芽萌发的花生实生苗为砧木，嫁接苗再栽植于灭菌的沙子中无菌培养4～6天；(5)嫁接苗炼苗1-2天后，直接移栽塑料大棚或高温棚，获得成熟种子；(6)高油苗后代采用系谱育种法选育，结合海南加代和高温棚加代，每年可以种植3代。2.根据权利要求1所述的一种花生高油品种的培育方法，其特征在于：所述步骤(1)中液体培养基中加脱脂棉作为支撑，成分为MS+30g/L蔗糖。3.根据权利要求1所述的一种花生高油品种的培育方法，其特征在于：诱导及诱变培养基为MSB5+1～3mg/LNAA+5～7mg/LBAP+5～6mg/L平阳霉素+30g/L蔗糖+8g/L琼脂；不定芽分化及高油苗定向筛选培养基为MS+2～4mmol/L羟脯氨酸+3～5mg/LBAP+30g/L蔗糖+8g/L琼脂。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：禹山林，王晶珊，乔利仙，杨庆利，衣艳君，隋炯明，郭宝太，贺红，迟照芳，张芳，汤松，王晓杰，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37