【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种神经肽cchamide的基因序列及制备方法和应用，属于基因工程。
技术介绍
1、番茄褪绿病毒（ tomato chlorosis virus，tocv）是一类隶属于长线形病毒科closteroviridae 、毛形病毒属 crinivirus的入侵性植物rna病毒。其寄主范围广，自2012年侵入我国内陆地区后给番茄、辣椒等蔬菜生产带来了严重的经济损失。tocv在自然界仅能依靠媒介昆虫（粉虱）进行传播，已有研究表明tocv在我国的快速蔓延同烟粉虱（ bemisia tabaci）med隐种密切相关。植物病毒又称为植物的“癌症”，一旦发生，很难进行有效防控，常规化学防治又会带来诸如“3r”等一系列问题。因此，从病毒传播“路径”入手，寻找其传播“桥梁”——媒介昆虫体内传毒相关基因尤为重要，基于媒介昆虫的新型病毒阻截技术亟待开发。
2、目前媒介昆虫传毒特性和机制研究较为广泛，但大多集中于免疫调节通路方面，从神经调控角度挖掘媒介昆虫传毒新靶标相关报道相对较少。神经肽是昆虫体内最多样化的信号分子，全面调控昆虫的各种生理和行为过程。神经肽cchamide是一个在昆虫基因组中保守的脑、肠神经肽前体家族，有研究表明其能够调控昆虫的取食，而取食是媒介昆虫获毒和传毒的“核心”环节。因此，调控虫媒植物病毒传播“核心”环节的上游神经肽是开发病毒阻截防控技术的潜在靶标。但是目前，尚未有针对烟粉
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种神经肽cchamide的基因序列及制备方法和应用，具体涉及一种昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因（ btcch2）序列，基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna，以及包含昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的重组瞬时表达载体与重组菌。本专利技术的技术方案如下：
2、一种神经肽cchamide的基因序列如seq id no.1所示；基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna正义链的核苷酸序列如seq id no.2所示。针对基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna的引物序列如seq id no.3和seq id no.4所示。
3、进一步的，所述昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因的制备方法，步骤如下：
4、提取烟粉虱总rna，反转录为cdna，以cdna为模板进行扩增，扩增引物为 btcch2-f和 btcch2-r，引物序列如seq id no.5和seq id no.6所示。
5、进一步的，所述基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna的制备方法，步骤如下：
6、以烟粉虱med隐种cdna为模板，上下游引物为 dsbtcch2-f和 dsbtcch2-r，引物序列如seq id no.3和seq id no.4所示，上下游引物中带有t7启动子；pcr扩增得到转录模板；再将转录模板体外转录合成烟粉虱cchamide基因 btcch2的特异性dsrna。
7、本专利技术还提供了一种提高烟粉虱med隐种获取和传播番茄褪绿病毒能力的方法，将上述dsrna导入烟粉虱med隐种体内，从基因沉默的角度反向验证了神经肽cchamide基因 btcch2可以抑制烟粉虱med隐种获取和传播番茄褪绿病毒。
8、本专利技术还提供了一种重组瞬时表达载体，所述重组瞬时表达载体包含核苷酸序列如seq id no.1所示的目的基因片段。
9、优选的是，所述重组瞬时表达载体为pchf3-egfp- btcch2。
10、本专利技术还提供了一种重组菌，所述重组菌包含上述的重组瞬时表达载体。
11、进一步的，所述重组菌为转化农杆菌。
12、本专利技术还提供了一种神经肽cchamide，所述神经肽cchamide是序列如seq idno.1所示的基因片段表达而获得。
13、本专利技术还提供了上述所得基因片段、重组瞬时表达载体、重组菌或神经肽cchamide在制备抑制烟粉虱获取和传播番茄褪绿病毒的植物中的用途。
14、优选的，所述植物为烟草。
15、进一步的，本专利技术还包括所述神经肽cchamide的基因序列在防控番茄褪绿病毒中的应用，抑制烟粉虱med隐种获取和传播番茄褪绿病毒的方法为：利用前述的神经肽cchamide（btcch2）瞬时表达植物饲喂或处理烟粉虱，调控其取食获毒及传毒。
16、相较于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
17、本专利技术得到了烟粉虱med隐种一种神经肽cchamide基因（ btcch2）的cdna全长序列，采用饲喂法开展目的基因rnai，优选出最佳干扰时间段，沉默烟粉虱 btcch2基因，增强了烟粉虱获取和传播番茄褪绿病毒的能力，从基因沉默角度反向验证了神经肽cchamide基因（ btcch2）在烟粉虱获毒和传毒过程中的抑制作用；提供了一种重组cchamide基因（ btcch2）的瞬时表达载体以及重组菌，其在烟草中过表达后能够显著抑制烟粉虱对于番茄褪绿病毒的获取和传播。本专利技术的结果明确了神经肽cchamide基因（ btcch2）在烟粉虱med隐种获取和传播番茄褪绿病毒中的重要作用，表明该基因在虫媒植物病毒的防控领域有着重要的应用价值，也暗示其可作为虫媒植物病毒防控阻截技术开发的潜在靶标。
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1. 一种神经肽CCHamide的基因序列，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.1所示。
2. 基于昆虫烟粉虱MED隐种CCHamide基因序列的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3. 针对基于昆虫烟粉虱MED隐种CCHamide基因序列的dsRNA的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
4.如权利要求1所述神经肽CCHamide的基因序列的制备方法，步骤如下：
5.如权利要求2所述基于昆虫烟粉虱MED隐种CCHamide基因序列的dsRNA的制备方法，步骤如下：
6.一种提高烟粉虱MED隐种获取和传播番茄褪绿病毒能力的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：
7. 一种重组瞬时表达载体，其特征在于，所述重组瞬时表达载体包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的目的基因片段。
8.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌包含如权利要求7所述的重组瞬时表达载体。
9.根据权
10. 一种神经肽CCHamide，其特征在于，所述神经肽CCHamide是序列如SEQ ID NO.1所示的基因片段表达而获得。
11.如权利要求1所述的基因序列、如权利要求2所述的dsRNA、如权利要求7所述的重组瞬时表达载体、如权利要求8所述的重组菌或如权利要求10所述的神经肽CCHamide在制备抑制烟粉虱获取和传播番茄褪绿病毒的植物中的应用。
12.如权利要求10所述神经肽CCHamide在防控番茄褪绿病毒中的应用。
...【技术特征摘要】
1. 一种神经肽cchamide的基因序列，其特征在于，所述基因序列如seq id no.1所示。
2. 基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna，其特征在于，所述dsrna正义链的核苷酸序列如seq id no.2所示。
3. 针对基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物的序列如seq id no.3和seq id no.4所示。
4.如权利要求1所述神经肽cchamide的基因序列的制备方法，步骤如下：
5.如权利要求2所述基于昆虫烟粉虱med隐种cchamide基因序列的dsrna的制备方法，步骤如下：
6.一种提高烟粉虱med隐种获取和传播番茄褪绿病毒能力的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：
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【专利技术属性】
技术研发人员：丁天波，褚栋，张敏，夏国旭，王佳乐，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：
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