检测猕猴桃溃疡病原菌的引物及其检测方法和应用技术

本发明专利技术提供一种高灵敏性检测猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonas syringae pv.actinidae的一组特异性引物，其正向引物和反向引物组成，所述正向引物为：5＇‑AAAACCGCTGTGATACAATTCG‑3＇，如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物为：5＇‑GATAGCCCTGAATGGTTTCCGAA‑3＇，如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还提供了基于该特异性引物的检测方法和应用。

Primers for detecting kiwifruit ulcer pathogens and their detection methods and Applications

The present invention provides a group of specific primers for detecting the pathogenic bacteria Pseudomonas syringae pv.actinidae of Actinidia ulcers, which are composed of positive primers and reverse primers. The positive primers are 5 'pv.actinidae AAAACCGCTGTGATACAATTCG 3', as shown in SEQ ID NO.1, and the reverse primers are 5 'GATAGCCCTGAATGGT. TTCCGAA 3 ', as shown by SEQ ID NO.2. The invention also provides a detection method and application based on the specific primer.

【技术实现步骤摘要】
检测猕猴桃溃疡病原菌的引物及其检测方法和应用
本专利技术属于农业及植物检疫
，具体涉及用于检测猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonassyringaepv.actinidae的高灵敏度特异性引物及检测方法和应用。
技术介绍
猕猴桃被称为水果之王和维生素C之冠，具有较高的经济效益，国内的主要种植区有四川、陕西和贵州等地。对于猕猴桃病害的检测、防控，是提高其经济价值，促进地区猕猴桃行业经济发展的必要手段。溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的致命性细菌性病害，被列为全国森林植物检疫对象。丁香假单胞菌是猕猴桃病害的主要病原菌，目前认定主要病原菌之一是猕猴桃致病变种(Pseudomonassyringaepv.Actinidiae，Psa)。该病原菌在6月中旬至9月底有很高的产孢能力，当猕猴桃幼果感染该菌时，会严重影响果实的生长，在6月感染时，容易发生采前落果。该病原菌对于果底部和果中部均有较强的侵染能力。利用特异性引物检测病原菌仅通过PCR扩増结果便可以实现病原苗的鉴定，其具有简便快捷的优点，在病害早期诊断和及时防治领域中得到了广泛的应用。目前，对于猕猴桃溃疡病菌的PCR检测方面，现有技术也本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高灵敏性检测猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonas syringae pv.actinidae的一组特异性引物，其特征在于，所述一组特异性引物由正向引物和反向引物组成，所述正向引物为：5＇‑AAAACCGCTGTGATACAATTCG‑3＇，如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物为：5＇‑GATAGCCCTGAATGGTTTCCGAA‑3＇，如SEQ ID NO.2所示；所述一组特异性引物的检测灵敏度为1pg菌体DNA。

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏性检测猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonassyringaepv.actinidae的一组特异性引物，其特征在于，所述一组特异性引物由正向引物和反向引物组成，所述正向引物为：5＇-AAAACCGCTGTGATACAATTCG-3＇，如SEQIDNO.1所示，所述反向引物为：5＇-GATAGCCCTGAATGGTTTCCGAA-3＇，如SEQIDNO.2所示；所述一组特异性引物的检测灵敏度为1pg菌体DNA。2.一种猕猴桃溃疡病原菌Pseudomonassyringaepv.actinidae的高灵敏度检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)从待检测猕猴桃果品中提取DNA；(2)以步骤(1)所得DNA为PCR模板DNA，进行PCR扩增；(3)用琼脂糖凝胶电泳检测步骤(2)所得扩增产物，如产生目标大小条带，则证明猕猴桃果品感染溃疡病；步骤(2)中，进行所述PCR扩增时，所用的引物由正向引物和反向引物组成，所述正向引物为：5＇-AAAACCGCTGTGATACAATTCG-3＇，如SEQIDNO.1所示，所述反向引物为：5＇-GATAGCCCTGAATGGTTTCCGAA-3＇，如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，提取DNA的方法为CTAB法。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述CTAB法的步骤为：1)取适量的猕猴桃果品放入1.5mlEP管中，加入液氮后，用研磨棒快速研磨成粉末；2)加入550μL65℃预热的CTAB提取液，剧烈振荡后，放于65℃恒温箱中1h，其间每间隔10min振荡混匀一次；3)加入550μL氯仿-异戊醇(24:1v/v)，剧烈震荡并充分混匀，静置10min，于13000r/min转速下离心5min；4)取上清，加入600μL冰乙醇，于130...

【专利技术属性】
技术研发人员：石军，胡容平，黄廷友，刘定友，项祖芬，侍守佩，彭涛，李春财，杨伟，张杰，
申请(专利权)人：绵阳市农业科学研究院，四川省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51