一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种保健食品中违禁药物的全扫描高通量快速筛查检测方法。首次将数据依存获取(IDA‑MS)和数据独立获取(SWATH‑MS)高分辨质谱技术与Chemspider和ACS化合物结构数据库结合一起，依据一级质谱和二级质谱的准确母离子和碎片分子量，以及同位素峰等高分辨质谱数据信息，在没有标准品条件下，快速筛查分析保健食品中非法添加西药成分，以及未知目标物条件下，定性鉴定出保健食品中违禁风险药物成分，克服保健食品中非目标物检测难题。本发明专利技术具有高通量分析目标物、基质效应小、准确度高、前处理方法简单，快速，准确、假阴性小、假阳性小等有益效果。

A non target rapid detection method for illicit drugs in health food

The invention discloses a full scan high throughput rapid screening detection method for illicit drugs in health food. For the first time, the data dependency acquisition (IDA MS) and data independent acquisition (SWATH MS) high resolution mass spectrometry is combined with the Chemspider and ACS compound structure database. The data information of high resolution mass spectrometry, such as the exact mother ion and fragment molecular weight, and the isotope peak of the first class mass spectrum and the two level mass spectrum, and the isotope peak, are under the condition of no standard condition. In order to overcome the problem of non target detection in health food, the composition of illegal drugs added to the health food and the unknown target were quickly screened and analyzed. The invention has the advantages of high throughput analysis of target, small matrix effect, high accuracy, simple preprocessing method, fast, accurate, small false negative, small false positive and so on.

【技术实现步骤摘要】
一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法
本专利技术涉及保健食品中未知风险物质检测
，具体涉及一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法。
技术介绍
上世纪80年代日本首先提出保健食品的概念，目前世界各国认同欧盟对保健食品的如下定义：如果能较好地确证一种食品除提供通常的营养效果之外，还能以一种促进机体健康或降低疾病风险的方式有益地影响机体中的一种或一种以上的靶功能，那么这种食品可以被认为是一种功能性食品。随着现代医学卫生技术发展，人类的寿命越来越长寿，促使人们对健康和饮食的重视，保健功能食品逐渐走入人们视线，在欧洲、北美、日本和新型发达国家与地区保健食品具有广阔的市场。在美国，消费者越来越对天然食品、有机食品和功能食品感兴趣，截止2012年，有机食品达到315亿美元市场价值。目前文献报道保健食品中违禁药物检测技术有HPLC、GC-MS、LC-MS、NMR、LC-FI-ICR-MS、UPLC-TOF-MS、IMS和酶联免疫法，涉及到保健食品中违禁西药检测标准目前主要是国家食品药品监督管理局颁布食药监办许[2010]114号检测标准方法，该检测标准分别是针对14种改善睡眠类、9种辅助降血糖类、3种辅助降血脂类、3种缓解体力疲劳类和5种减肥类等34种违禁西药检测。然而已有文献研究发现保健食品中非法添加违禁药物多达几百种，常规的检测分析方法不能全部有效检测保健食品中非法添加违禁药物成分。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术不能全面检测保健食品中可能含有的违禁药物成分，在没有标准品条件下，提供一种保健食品中违禁药物的全扫描高通量快速筛查检测方法。为了实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法，在已知可能添加违禁目标物西药成分，且没有标准品的条件下，按如下步骤进行：(1)样品前处理：采用QuEChERS技术结合超声辅助萃取技术对待测保健食品进行前处理萃取，得到待机测试样液；(2)数据采集：将所述步骤(1)中的待机测试样液进行数据依存获取IDA-MS或数据独立获取SWATH-MS高分辨质谱信息的采集；(3)对照已经建立的77种违禁药物的高分辨质谱信息数据库和通过整理常见违禁药物的MasterView软件中得到的XIClist筛查列表；(4)数据分析：通过在PeakView数据分析软件上处理的准确分子量、同位素分子量、分子式、色谱保留时间，以及精确二级碎片分子量，初步判断MasterView违禁药物XIClist列表中可疑化合物；(5)确证：在PeakView软件中输入所述步骤(4)中可疑化合物的结构式，进行高分辨质谱数据与化合物结构吻合度分析，最终鉴定保健食品中违禁药物成分。在未知添加违禁西药成分，对非目标物快速筛查的情况下：所述步骤(2)为：进行数据依存获取IDA-MS和数据独立获取SWATH-MS高分辨质谱信息的采集模式；数据独立获取高分辨质谱信息的采集模式适合样品信息稀少以及怀疑遗漏采集数据情况下获取样品的高分辨质谱数据。所述步骤(4)为：整理可能添加违禁药物的MasterView筛查列表，在PeakView软件分析未知违禁药物是否在MasterView筛查列表之中；若在列表之中，则进行结构式与二级精准碎片吻合度分析；若不在MasterView筛查列表之中，则链接互联网查找chemspider和ACS化合物结构数据库。所述步骤(5)为：将可疑化合物的一级和二级精准高分辨质谱数据，以及同位素丰度信息与chemspider和ACS化合物结构数据库中化合物结构式进行匹配度分析，匹配度高的化合物即为可疑化合物；在高匹配度的条件下，还要结合化合物结构数据库的化合物基本生理医药活性判断可能添加到保健食品样品之中。优选的，所述步骤(1)中萃取条件为：向1mL或1g保健食品中加入15mL体积比为7∶3的乙腈与水的溶液、1.0g硫酸镁和0.25g氯化钠分散剂、50mg吸附剂C18和50mgPSA净化剂，涡旋1min，超声15min，离心分层后取上清液，将上清液定容至25mL，取1mL溶液过有机系滤膜后作为待机测试样液。优选的，所述步骤(2)中数据采集包括如下步骤：液相分离条件为流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈，流速0.5mL/min，梯度洗脱：B相由初始体积比5％，10min增至90％，3min增至100％，保留3min，1min降至5％，保留3min，柱温40℃，C18色谱柱。优选的，所述步骤(2)中IDA-MS数据采集的筛查分析条件为：ESI和APCI复合源；正离子扫描方式；APCI源连接自动校正系统，样品为ESI离子化方式，气帘气压力：30psi，雾化气压力：40psi，加热辅助气压力：50psi，离子源温度450℃，离子源电压5500V；一级TOF-MS扫描准确质量范围：100～1000Da，数据采集时间100ms，去簇电压：100eV，碰撞电压：10eV；二级IDA-MS扫描准确质量范围：50～1000Da，去簇电压：100eV，碰撞电压：35±15eV；高灵敏模式，数据采集时间50ms，信号阈值100cps，IDA实验每循环采集6次数据，动态背景减法扣除。优选的，所述步骤(2)中SWATH-MS数据采集的筛查分析条件为：ESI和APCI复合源；正离子扫描方式；APCI源连接自动校正系统，样品为ESI离子化方式，气帘气压力：30psi，雾化气压力：40psi，加热辅助气压力：50psi，离子源温度450℃，离子源电压5500V；一级TOF-MS扫描准确质量范围：100～1000Da，数据采集时间100ms，去簇电压：100eV，碰撞电压：10eV；二级扫描每个质量窗口为20Da，从100至800Da，每个窗口交替重叠1Da，碰撞电压：35eV，数据采集时间40ms，碰撞区间电压：15eV，高分辨模式。优选的，所述步骤(3)中MasterView筛查列表中违禁药物含PDE-5抑制剂类、减肥类、降血糖类、降血压类、降血脂类、风湿镇痛类和肠胃类违禁药物。本专利技术选择PDE-5抑制剂类、减肥类、降血糖类、降血压类、降血脂类、风湿镇痛类和肠胃类等77种违禁药物成分，利用ABSciex5600+高分辨质谱仪，获得77种违禁药物的IDA-MS和SWATH-MS高分辨质谱信息，建立了相应的高分辨质谱数据库，为今后保健食品非法添加违禁药物的检测分析奠定数据库支持。本专利技术选择减肥类、增强免疫力类、缓解疲劳类、辅助改善血糖血脂血压类等CFDA审批获得市场销售各类保健食品为研究对象，整理国内外文献报告保健食品中可能非法添加违禁药物信息，具体是85种PDE-5抑制剂、66种减肥类(已发表论文)、28种降血糖类、36种降血压类、17种降血脂类、54种免疫力类和46种睡眠类等违禁西药成分，以此快速筛查分析保健食品中非法添加违禁药物成分。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.高通量分析目标物：本专利技术建立了保健食品中常见77种违禁药物IDA-MS高分辨质谱数据库，获得66种减肥类、28种降血糖类、36种降血压类、17种降血脂类、86种缓解疲劳类、54种免疫力类和46种睡眠类等违禁西药成分XIClist列表，以此为基础快速筛查鉴定保健食品中非法添加违禁药物成分。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法，其特征在于，在已知可能添加违禁目标物西药成分，但没有标准品的条件下，按如下步骤进行：(1)样品前处理：采用QuEChERS技术结合超声辅助萃取技术对待测保健食品进行前处理萃取，得到待机测试样液；(2)数据采集：将所述步骤(1)中的待机测试样液进行数据依存获取IDA‑MS或数据独立获取SWATH‑MS高分辨质谱信息的采集；(3)对照已建立的77种违禁药物的高分辨质谱信息数据库和通过整理常见违禁药物的MasterView软件中得到的XIClist筛查列表；(4)数据分析：通过在PeakView数据分析软件上处理的准确分子量、同位素分子量、分子式、色谱保留时间，以及精确二级碎片分子量，初步判断MasterView违禁药物XIClist列表中可疑化合物；(5)确证：在PeakView软件中输入所述步骤(4)中可疑化合物的结构式，进行高分辨质谱数据与化合物结构吻合度分析，最终鉴定保健食品中违禁药物成分；在未知添加违禁西药成分，对非目标物快速筛查的情况下：所述步骤(2)为：进行数据依存获取IDA‑MS和数据独立获取SWATH‑MS高分辨质谱数据采集模式；所述步骤(4)为：整理可能添加违禁药物的MasterView筛查列表，在PeakView软件分析未知违禁药物是否在MasterView筛查列表之中；若在列表之中，则进行结构式与二级精准碎片吻合度分析；若不在MasterView筛查列表之中，则链接互联网查找chemspider和ACS化合物结构数据库；所述步骤(5)为：将可疑化合物的一级和二级精准高分辨质谱数据，以及同位素丰度信息与chemspider和ACS化合物结构数据库中化合物结构式进行匹配度分析，匹配度高的化合物即为可疑化合物；在高匹配度的条件下，还要结合化合物结构数据库的化合物基本生理医药活性判断可能添加到保健食品样品之中。...

【技术特征摘要】
1.一种保健食品中违禁药物的非目标物快速检测方法，其特征在于，在已知可能添加违禁目标物西药成分，但没有标准品的条件下，按如下步骤进行：(1)样品前处理：采用QuEChERS技术结合超声辅助萃取技术对待测保健食品进行前处理萃取，得到待机测试样液；(2)数据采集：将所述步骤(1)中的待机测试样液进行数据依存获取IDA-MS或数据独立获取SWATH-MS高分辨质谱信息的采集；(3)对照已建立的77种违禁药物的高分辨质谱信息数据库和通过整理常见违禁药物的MasterView软件中得到的XIClist筛查列表；(4)数据分析：通过在PeakView数据分析软件上处理的准确分子量、同位素分子量、分子式、色谱保留时间，以及精确二级碎片分子量，初步判断MasterView违禁药物XIClist列表中可疑化合物；(5)确证：在PeakView软件中输入所述步骤(4)中可疑化合物的结构式，进行高分辨质谱数据与化合物结构吻合度分析，最终鉴定保健食品中违禁药物成分；在未知添加违禁西药成分，对非目标物快速筛查的情况下：所述步骤(2)为：进行数据依存获取IDA-MS和数据独立获取SWATH-MS高分辨质谱数据采集模式；所述步骤(4)为：整理可能添加违禁药物的MasterView筛查列表，在PeakView软件分析未知违禁药物是否在MasterView筛查列表之中；若在列表之中，则进行结构式与二级精准碎片吻合度分析；若不在MasterView筛查列表之中，则链接互联网查找chemspider和ACS化合物结构数据库；所述步骤(5)为：将可疑化合物的一级和二级精准高分辨质谱数据，以及同位素丰度信息与chemspider和ACS化合物结构数据库中化合物结构式进行匹配度分析，匹配度高的化合物即为可疑化合物；在高匹配度的条件下，还要结合化合物结构数据库的化合物基本生理医药活性判断可能添加到保健食品样品之中。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中萃取条件为：向1mL或1g保健食品中加入15mL体积比为7：3的乙腈与水的溶液、1.0g硫酸镁和0.25g氯化钠分散剂、50mg吸附剂C18和50mgPSA净化剂，涡旋1min，...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁博，陈文锐，王志元，谢建军，曾广丰，王璐，
申请(专利权)人：广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44