重组多肽、核酸分子及其组合物以及制造、使用其的方法技术

本发明专利技术提供一种重组多肽、包含该重组多肽的同型二聚体和异型二聚体蛋白、编码该重组多肽的核酸分子，以及包含该核酸分子的载体及宿主细胞。本发明专利技术也提供包含该重组多肽的组合物，以及制备该重组多肽的方法。

Recombinant polypeptide, nucleic acid molecule and its composition, and method of making and using the same

The present invention provides a recombinant polypeptide, a homotypic two polymer containing the recombinant polypeptide and a heterotype two polymer protein, a nucleic acid molecule encoding the recombinant polypeptide, and a carrier and host cell containing the nucleic acid molecule. The invention also provides a composition comprising the recombinant polypeptide and a method for preparing the recombinant polypeptide.

【技术实现步骤摘要】
重组多肽、核酸分子及其组合物以及制造、使用其的方法
本专利技术关于一种重组多肽、核酸分子及其组合物以及制造、使用其的方法，尤其是指一种具有诱发碱性磷酸酶活性能力的重组多肽、核酸分子及其组合物以及制造、使用其的方法。
技术介绍
骨是一种高度刚性的组织，具有独特机械性质构成脊椎骨骼的一部分，该独特机械性质是衍生自其广泛的基质结构。动物终其一生中，骨组织会不断地更新。骨生成及更新的过程由个别特化的细胞进行。成骨作用(osteogenesis，骨生成或骨成长)是由成骨细胞(osteoblasts，骨生成细胞)进行。骨再成型作用(Boneremodeling)是由称为破骨细胞(osteoclasts)的骨吸收细胞与骨生成的成骨细胞间相互作用所完成。由于这些过程是由特定的活细胞进行，所以化学(例如：药物和/或激素)、物理及物理化学的变化可影响骨组织的质量、数量及形状。各种生长因子(例如：PDGF)及细胞介质会参与骨生成的过程。因此，辨识出可在预定位点诱发骨生成的生理可接受的化学介质(例如：激素、药物、生长因子及细胞介质)是相当有价值的。然而，为了成功地将化学介质作为治疗工具，需克服几个障碍。障碍之一包括开发具有骨诱发(osteoinductive)活性的重组多肽。例如：重组人类血小板衍生的生长因子-BB中的骨诱发活性尚未得到证实。另一障碍是在化学介质中骨诱发的变异性。例如：去矿物质骨基质(demineralizedbonematrix，DBM)是一种化学介质，是一种衍生自加工骨的骨诱发同种异体移植物。市场上以DBM为基础的产品越来越多，但是在不同产品及同一产品不同批号之间已发现骨诱发的变异性。因此，需要一种化学介质展现一致的骨诱发活性，例如：重组多肽及相关组合物。
技术实现思路
本专利技术揭示一种重组多肽，其包含：一第一域(domain)，其是选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组；一第二域，其是选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组；及一第三域，其是选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组；其中该第二域包含一个分子内双硫键(intramoleculardisulfidebond)。于一实施方式中，该第二域包含在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间的一个分子内双硫键。于一实施方式中，该重组多肽具有诱发碱性磷酸酶活性的能力。于一实施方式中，该第三域包含：一第一氨基酸序列PKACCVPTE(SEQIDNO：356)和一第二氨基酸序列GCGCR(SEQIDNO：357)，且其中该第三域包含在该第一和该第二氨基酸序列之间的二个分子内双硫键。于一实施方式中，该重组多肽包含：(1)在该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子内双硫键，且在该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子内双硫键；或(2)在该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子内双硫键，且在该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子内双硫键。本专利技术也揭示一种重组多肽，其包含：一第一域(domain)，其是选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组；一第二域，其是选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组；及一第三域，其是选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组；其中该重组多肽包含一氨基酸序列，该氨基酸序列是选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340及SEQIDNO：348组成的群组。本专利技术也揭示一种同型二聚体蛋白，其包含如上所述的二个相同的重组多肽。于一实施方式中，其包含在该两个之其一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸和该另一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸之间的一个分子间双硫键。于一实施方式中，每一该重组多肽的该第三域包含：一第一氨基酸序列PKACCVPTE(SEQIDNO：356)和一第二氨基酸序列GCGCR(SEQIDNO：357)，且其中该同型二聚体蛋白包含：在该两个之其一重组多肽的该第三域中的该第一氨基酸序列和该另一重组多肽的该第三域中的该第二氨基酸序列之间的二个分子间双硫键。于一实施方式中，其包含：(a)在该两个之其一重组多肽的该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子间双硫键，及在该两个之其一重组多肽的该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子间双硫键；或(b)在该两个之其一重组多肽的该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子间双硫键，及在该两个之其一重组多肽的该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子间双硫键。本专利技术也揭示一种异型二聚体蛋白，其包含如上所述的二个相异的重组多肽，其中该异型二聚体蛋白包含：在该二个相异重组多肽的该些第一域之间的一个分子间双硫键。于一实施方式中，其包含在该两个之其一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸和该另一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸之间的一个分子间双硫键。本专利技术也揭示一种经分离的核酸分子，其包含一编码如上的重组多肽的多核苷酸序列。本专利技术也揭示一种重组核酸分子，其包含一表达控制区，可操作地连结至如上所述的经分离的核酸分子。本专利技术也揭示一种经分离的宿主细胞，其包含如上所述的经分离的核酸分子或如上所述的重组核酸分子。本专利技术也揭示一种制备一重组载体的方法，其包含将如上所述的经分离的核酸分子插入一载体内。本专利技术也揭示一种制备一重组宿主细胞的方法，其包含将如上所述的经分离的核酸分子或如上所述的重组核酸分子导入至一宿主细胞内。本专利技术也揭示一种制造一重组多肽的方法，其包含：培养如上所述的经分离的宿主细胞，以及分离该重组多肽。本专利技术也揭示一种组合物，其包含如上所述的重组多肽、如上所述的同型二聚体蛋白或如上所述的异型二聚体蛋白。附图说明图1A和1B所示为实验组A至实验组G的母兔(NZW品系)尺骨的代表性X光影像。每个实验组中的尺骨包含一外科手术创造的20mm大的圆周缺陷(即缺损部位)。对于A组至F组，在该缺损部位中置入移植物。A组至E组每个尺骨接受一200mg的β-TCP植入物，A、B、C和D中的该β-TCP是分别作为重组多肽(即SEQIDNO：260)的2、6、20和60μg载体。E组中该β-TCP不携带任何重组多肽。F组接受一髂骨碎片自体移植物。G组在该缺损部位未接受任何移植物。对A组至G组各组于0周(即手术后立即摄影，以“0W”表示)时，以及在手术后2、4、6及8周(即分别以“2W”、“4W”、“6W”及“8W”表示)时拍摄X光影像。该尺骨上的植入部位(A组至F组)或缺损部位(G组)位于每个影像中白色星号的正上方。图2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组多肽，其特征在于，包含：一第一域，其是选自由SEQ ID NO：35及SEQ ID NO：39所组成的群组；一第二域，其是选自由SEQ ID NO：47及SEQ ID NO：49所组成的群组；及一第三域，其是选自由SEQ ID NO：57及SEQ ID NO：61所组成的群组；其中该第二域包含一个分子内双硫键。

【技术特征摘要】
2016.12.30 US 62/440,6631.一种重组多肽，其特征在于，包含：一第一域，其是选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组；一第二域，其是选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组；及一第三域，其是选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组；其中该第二域包含一个分子内双硫键。2.根据权利要求1所述的重组多肽，其特征在于，该第二域包含在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间的一个分子内双硫键。3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其特征在于，该重组多肽具有诱发碱性磷酸酶活性的能力。4.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其特征在于，该第三域包含：一第一氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO：356和一第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO：357，且其中该第三域包含在该第一和该第二氨基酸序列之间的二个分子内双硫键。5.根据权利要求4所述的重组多肽，其特征在于，该重组多肽包含：在该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子内双硫键，且在该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子内双硫键；或在该第一氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间的一第一分子内双硫键，且在该第一氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间的一第二分子内双硫键。6.一种重组多肽，其特征在于，包含：一第一域，其是选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组；一第二域，其是选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组；及一第三域，其是选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组；其中该重组多肽包含一氨基酸序列，该氨基酸序列是选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340及SEQIDNO：348组成的群组。7.一种同型二聚体蛋白，其特征在于，包含权利要求1、2或6所述的二个相同的重组多肽。8.根据权利要求7所述的同型二聚体蛋白，其特征在于，包含在该两个之其一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸和该另一重组多肽的该第一域...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙大伟，
申请(专利权)人：博晟生医股份有限公司，奥斯堤欧制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71