低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分F1及其用途制造技术

低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分F1及其用途，它涉及低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分及其用途。本发明专利技术解决了现有补铁剂会引起腹泻、便秘，肠道菌群失调、对胃肠健康造成危害，过敏性休克等副作用，或者价格昂贵，且改善贫血的效果有限，易复发的问题。黑木耳黑色素活性成分F1制备方法：一、将黑木耳黑色素溶于NaOH溶液中，然后上样葡聚糖凝胶柱；二、PBS缓冲液进行洗脱、收集第34～50min洗脱液，并调节pH值，然后静置、离心，真空冷冻干燥。本发明专利技术黑木耳黑色素活性成分F1可以明显提高IDA小鼠模型的血红蛋白和血红细胞数，改善造血因子，增加铁吸收，有效改善缺铁性贫血；而且不会引起恶心、腹痛、腹泻、便秘等不良症状。

Low iron enriching agent, black fungus active ingredient F1 and its uses

Low iron enriching agent, black fungus active ingredient F1 and its uses, which relate to low iron enriching agents, black fungus active ingredients and their uses. The present invention solves the problem that the existing iron supplement can cause diarrhea, constipation, maladjustment of intestinal flora, harm to gastrointestinal health, anaphylactic shock and other side effects, or expensive, and the effect of anemia is limited and easy to relapse. The preparation methods of black wood black pigment active ingredient F1: 1. Soluble black fungus melanin in NaOH solution, and then sample dextran gel column; two, PBS buffer solution is eluted, thirty-fourth ~ 50min eluant is collected, pH value is adjusted, and then statically, centrifuged, vacuum freeze-drying. The active ingredient F1 of Auricularia auricula melanin can obviously improve the hemoglobin and blood red cell number of the IDA mouse model, improve the hematopoiesis factor, increase the iron absorption, improve the iron deficiency anemia effectively, and do not cause nausea, abdominal pain, diarrhea, constipation and other adverse symptoms.

【技术实现步骤摘要】
低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分F1及其用途
本专利技术涉及低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分及其用途。
技术介绍
缺铁性贫血(IronDeficiencyAnemia，IDA)是人体内铁储备耗竭导致血红蛋白合成减少而引起的贫血。这类贫血的特点是骨髓、肝、脾等组织中缺乏可染色铁，血清铁、转铁蛋白饱和度和铁蛋白降低。导致缺铁性贫血的发病原因较多，一般归纳为：(1)铁需要增加，多发生于婴幼儿和妊娠期妇女；(2)铁摄入不足及吸收不良，造成铁摄入不足的常见原因是食物中铁的含量不足、偏食，食物中蔬菜、谷类、茶叶中的磷酸盐、植酸、单宁酸均会减少铁在胃肠道的吸收；(3)慢性出血，导致慢性失血的原因很多，男性患者一般为胃肠道的急性和慢性出血，女性患者的患病原因多为月经过多。缺铁性贫血最终结果均是由于体内的铁不足以维系机体代谢对铁的需求，影响血细胞内血红素的合成从而导致缺铁性贫血的发生。作为全世界发病率居高不下的营养缺乏类型疾病之一，缺铁性贫血不同程度的影响着全世界约22亿人口，该病在发展中国家的发病率明显高于发达国家，在我国各阶层及年龄段人群中缺铁性贫血发病率约为20％，情况严重地区儿童缺铁性贫血的发病率高达70％。根据调查显示：在6个月～2岁婴幼儿中铁缺乏症的年发病率为75.0％～82.5％、妊娠3个月以上妇女患有铁缺乏症的比例为66.7％、育龄妇女此比例为43.3％，10岁～17岁青少年此比例为13.2％；以上人群中缺铁性贫血(IDA)患病率分别是33.8％～45.7％，19.3％，11.4％，9.8％。当缺铁性贫血发生时，机体最开始的改变是多个组织或器官缺铁，表现为铁缺乏症，组织中与铁相关的酶活性和酶活力显著下降，患有缺铁性贫血的人表现出体力、免疫力、肌肉耐力等下降，由于血红蛋白和红细胞数量的减少，血液的运氧能力下降，这可导致组织缺氧，患者出现神疲乏力、精神状态下降、胸闷气短、头晕目眩等症状。世界上大多数人口的饮食中是缺乏铁元素，尤其是在以植物性食物为主的国家。在预防和治疗缺铁性贫血过程中，口服铁剂显然是最为理想的，使用铁补充剂或营养强化剂是目前用于治疗或防治缺铁性贫血的主要方法，由于其简单方便易于临床应用，膳食补铁和口服补铁药物来预防和治疗缺铁性贫血被广泛应用。截至目前，世界卫生组织允许使用的用于治疗缺铁性贫血的补血剂大概有30余种，这些铁补充剂按照铁的存在状态主要分为无机铁和有机铁两大类，按照其在人体中的存形式分为血红素铁和非血红素铁两大类。然而，虽然这些补铁剂经过了长期的应用和发展，但仍存在一些不足和其他副作用。亚铁盐类化合物是补铁效果最好的补铁剂，但可以引起多种副作用。研究发现口服补铁剂可能会使结肠中产生的自由基增加导致粘膜细胞损伤，还可以增加大鼠结肠中的脂质过氧化，从而影响肠上皮细胞完整性；另有研究发现，铁缺乏和铁超载都与免疫应答受损有关，原因在于服用补铁剂后会有大量不能被人体吸收的铁进入肠道所导致。长期服用补铁剂的副作用包括上腹疼痛、恶心、腹泻、便秘，以至于患者不得不停止治疗。为了能够治疗缺铁性贫血，患者在忍受高剂量水平铁剂补充带来痛苦的同时，大量未被吸收的铁会随着食物和胃肠的蠕动到达大肠而被肠道菌群利用，打破肠道菌群的平衡，对肠道健康造成不利的影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有补铁剂会引起恶心、腹痛、腹泻、便秘，肠道菌群失调、对胃肠健康造成危害等副作用，在保持至少相等补血效果的同时大量降低药剂中的铁含量，避免铁超载影响人体免疫应答，而提供的低铁补血剂、黑木耳黑色素活性成分F1及其用途。黑木耳黑色素活性成分F1按以下步骤制备获得：一、将黑木耳黑色素以5mg/mL的浓度溶于NaOH溶液中，然后上样葡聚糖凝胶SephadexG-200柱；二、用浓度为50mmol/L、pH为7.5的PBS缓冲液进行洗脱，流速为1.2mL/min，收集第34～50min洗脱液，并调节pH值至2，然后静置、再4000r/min离心15min后用蒸馏水洗涤沉淀，之后真空冷冻干燥，即得到黑木耳黑色素活性成分F1；其中，步骤一中NaOH溶液的浓度为0.2mol/L。本专利技术中黑木耳黑色素的制备方法：黑木耳经烘干后粉碎，过60目筛。准确称取黑木耳粉末样品10g，加入250mL浓度为3mol/L的盐酸，70℃下搅拌浸提1h，混合物经4000r/min离心15min，分离上清和沉淀，收集沉淀用氢氧化钠调节pH值至12，充分溶解搅拌后，再经4000r/min离心15min，取上清，上清液用浓度为3mol/L的盐酸调节pH至2，静置，4000r/min离心15min后得到黑色素粗品，黑色素粗品用浓度为7mol/L的HCl在100℃下水解2h，10000r/min离心20min，沉淀依次用氯仿、乙酸乙酯和乙醇洗涤，之后沉淀再用蒸馏水洗涤3～5次，再一次离心，取沉淀，经冷冻干燥即得黑色固体粉末状的黑木耳黑色素。本专利技术黑木耳黑色素活性成分F1的红外扫描图谱如图1所示，其结构特点与复杂的生物大分子的结构特点十分相似，黑木耳黑色素活性成分F1具有多种官能团才得以使其红外光谱扫描图中具有多个宽而强的吸收峰。在黑木耳黑色素活性成分F1的红外光谱扫描图谱中，在3200cm-1附近出现的宽峰，是由OH和NH2基团伸缩振动引起的；在2950～2850cm-1处的吸收峰说明有脂肪族C-H的存在；1650～1500cm-1处的强烈吸收，与芳香族C＝C和COO的振动有关；1400～1200cm-1位置的吸收峰显示酚类COH和吲哚以及NH的存在；800～600cm-1范围的相对小的吸收峰代表着芳香环的存在。在黑木耳黑色素活性成分F1的1HNMR光谱中，0.8～1.0ppm范围为脂肪族区，出现的信号认定为烷基片段的CH3基团，例如CH2CH3，CH(CH3)2，可能来自残留的蛋白质；在2.0ppm附近的信号是属于亚甲基或酯基(-OCOCH3)，表明羧酸结构的存在；在4ppm周围的峰被认定为结合于吲哚或吡咯环的甲基(N-CH3)和结合到环上的第一个位置的-OCH3；6.5和7.3ppm的信号是吲哚或吡咯环的芳香族氢原子；8.5ppm附近的信号是吲哚或吡咯环上的羧基质子。其中，位置在5ppm出现的强信号是溶剂中NaOH中H的峰。黑木耳黑色素的1HNMR光谱中，2.0ppm附近的信号强于黑木耳黑色素活性成分F1，说明黑木耳黑色素的羧酸结构比例更高；4ppm周围的峰面积小于黑木耳黑色素活性成分F1，代表吲哚或吡咯环的比例较小。表明黑木耳黑色素含有更多的蛋白质，而黑木耳黑色素活性成分F1含有更多的用来构成骨架的吲哚或吡咯环。将黑木耳黑色素活性成分F1和黑木耳黑色素喷涂Au后用环境扫描电子显微镜直接成像，观察黑木耳黑色素活性成分F1和黑木耳黑色素的微观结构。黑木耳黑色素是由表面不规则的球形单体组成，并且呈层层堆叠结构，通过软件测量黑木耳黑色素单体平均粒径约为1μm(如图4所示)。大量黑木耳黑色素单体聚合如图5所示，呈较大体积的不规则块状形态，表面的气孔表示黑木耳黑色素的结合并不紧密。本专利技术黑木耳黑色素活性成分F1有更明显的片层结构，且表面比黑木耳黑色素光滑，单体间结合的更加紧密(如图6所示)。黑木耳黑色素活性成分F1大量聚合如图7所示，形成较大体积的不规则块状形态，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黑木耳黑色素活性成分F1，其特征在于黑木耳黑色素活性成分F1按以下步骤制备获得：一、将黑木耳黑色素以5mg/mL的浓度溶于NaOH溶液中，然后上样葡聚糖凝胶Sephadex G‑200柱；二、用浓度为50mmol/L、pH为7.5的PBS缓冲液进行洗脱，流速为1.2mL/min，收集第34～50min洗脱液，并调节pH值至2，然后静置、再4000r/min离心15min后用蒸馏水洗涤沉淀，之后真空冷冻干燥，即得到黑木耳黑色素活性成分F1；其中，步骤一中NaOH溶液的浓度为0.2mol/L。

【技术特征摘要】
1.黑木耳黑色素活性成分F1，其特征在于黑木耳黑色素活性成分F1按以下步骤制备获得：一、将黑木耳黑色素以5mg/mL的浓度溶于NaOH溶液中，然后上样葡聚糖凝胶SephadexG-200柱；二、用浓度为50mmol/L、pH为7.5的PBS缓冲液进行洗脱，流速为1.2mL/min，收集第34～50min洗脱液，并调节pH值至2，然后静置、再4000r/min离心15min后用蒸馏水洗涤沉淀，之后真空冷冻干燥，即得到黑木耳黑色素活性成分F1；其中，步骤一中NaOH溶液的浓度为0.2mol/L。2.根据权利要求1所述的黑木耳黑色素活性成分F1，其特征在于步骤二中葡聚糖凝胶SephadexG-200均先用浓度为50mmol/L、pH为7.5的PBS缓冲液冲洗稳定后再上样。3.根据权利要求1所述的黑木耳黑色素活性成分F1，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷虹，曾伟民，万鹏，江伟，冯磊，程文，诸琳，王淼，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23