一种牛樟芝总三萜和多糖的同步提取方法技术

本发明专利技术公开了一种牛樟芝总三萜和多糖的同步提取方法，所述方法为：取牛樟芝子实体粉末，加入碱性助磨剂进行球磨处理，获得球磨后的粉末；将球磨后的粉末加入蒸馏水中，在30‑70℃恒温下，于5000‑10000rmp高速剪切反应5‑20min，离心，获得上清液；将上清液调节pH至酸性，搅拌均匀后置4℃冰箱中静置至沉淀完全，过滤，获得滤液和沉淀，滤液浓缩干燥后即为总多糖提取物，沉淀自然晾干后即为总三萜提取物。本发明专利技术樟芝总三萜的提取率高达13.72％，提取率提高近2倍，多糖提取率高达12.94％，提取率提高近1倍。

A method for simultaneous extraction of total three terpenes and polysaccharides from C.

The present invention discloses a synchronous extraction method of total three terpenes and polysaccharides of Niu. The method is as follows: taking Niu Zhangzhi seed solid powder, adding alkaline grinding agent to ball milling, obtaining the powder after ball milling, adding the powder after ball milling into distilled water, at a constant temperature of 30 and 70 degrees C, at the high speed shear reaction of 5000 10000rmp, 5 20min, centrifuge, obtain the supernatant; adjust the supernatant to pH to acidity, and stir even after mixing 4 degrees centigrade refrigerators to settle completely, filtrate, obtain filtrate and precipitate. After the filtrate is concentrated and dried, it is the total polysaccharide extract, and after natural drying, it is the total three terpenoid extract. The extraction rate of total three terpenes of the ganoderma is as high as 13.72%, the extraction rate is increased by nearly 2 times, the extraction rate of polysaccharides is as high as 12.94%, and the extraction rate is increased by nearly 1 times.

【技术实现步骤摘要】
一种牛樟芝总三萜和多糖的同步提取方法(一)
本专利技术涉及一种真菌有效成分的提取方法，具体涉及一种牛樟芝总三萜和多糖的组合提取方法。(二)
技术介绍
牛樟芝，是台湾特有的腐木真菌，研究发现，牛樟芝含有多种生理活性成分，最主要的两种是三萜和多糖。已发现的牛樟芝总三萜有200多种，其具有抗癌，抗炎，抗病毒和保肝等功效，牛樟芝多糖具有抗癌、增强免疫力、抗氧化等功效。牛樟芝总三萜易溶于有机溶剂，多糖易溶于水。目前，制备三萜和多糖的传统方法大都使用溶剂热回流提取法和水煮法。(1)中国专利CN104352533，乙醇热回流法提取牛樟芝有效成分，其提取工艺为40-75％的乙醇，60-75℃条件下回流3-4次，每次2-3h，得提取液。该方法提取时间在6-12h，提取时间过长。(2)陆震鸣(陆震鸣，樟芝深层液态发酵及其三萜类化合物的研究，江南大学博士学位论文)比较了不同有机溶剂提取三萜的得率，最终确定樟芝三萜提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度86％，提取温度75℃，液固比37∶1，提取2次，在此条件下樟芝三萜得率理论最大值3.23％，提取时间长、使用有机溶剂且提取率低。(3)中国专利CN104479044，从牛樟芝中提取多糖，乙醇热回流提取3次，热水60℃浸提料渣1h，樟芝多糖的提取率为3.93％，该方法需要大量消耗乙醇，操作复杂，提取时间长，多糖提取率低。(4)张仲欣(张仲欣，张宏海，马海乐。樟芝菌丝体胞内多糖提取条件的研究，食品研究与开发，2008，10，29(10)：17-19)，采用二次通用旋转组合设计方法，研究樟芝菌丝体多糖提取工艺条件中最优组合，当提取时间为4.7h、液固比46倍、提取温度76.8℃时，樟芝菌丝体胞内多糖提取率的理论值为8.8％，该方法提取时间长，提取率低。(5)CN104193843，樟芝菌丝体胞内多糖提取的最佳参数，提取时间为4.7h、提取温度为75℃左右时，提取率理论值为8.8％，同样存在提取时间长，提取率低的问题。(6)刘华等(刘华，周堃等，药用真菌樟芝菌丝体多糖提取工艺及活性的研究，食品科学，2007,28(06)：243-245)优化了樟芝菌丝体粗多糖的提取工艺，最佳条件为料液比1:30，温度90℃，时间2h，多糖提取率为10％，该方法提取温度高，多糖提取率相对提高，但高温易破坏多糖活性。(7)中国专利CN103655641，依次对樟芝进行热水浸提和乙醇浸提，樟芝多糖和三萜均被一定程度的提取出来，但分步浸提所需时间长，且未给出提取率。由以上文献专利可以看出，牛樟芝总三萜传统提取法均需要消耗大量的有机溶剂，提取时间长，效率低，同时造成环境污染。多糖水煮法提多糖，提取温度高，时间长，但高温易破坏多糖结构，使其活性降低。除传统的提取方法，超声提取法能有效缩短提取时间，多用于牛樟芝总三萜和多糖的提取中，但随着超声处理时间延长会使多糖长链降解。(1)郭丹钊等(郭丹钊,郑威等.超声波辅助提取樟芝菌丝体活性物质的工艺研究,食品与机械,2016,1(32):158-161)以牛樟芝菌丝体为原料，超声法提取牛樟芝总三萜和多糖，提取率分别为3.8％和2.63％，该方法相比较于传统提取方法，提取时间短，但在提取率上并没有显著的提高。(2)王宫等(王宫，王瑾，徐蔚.牛樟芝总三萜提取工艺研究，现代中药研究与实践，2011，25(6):67-68)以牛樟芝子实体为原料，摸索超声提取法最佳工艺条件，三萜提取率最佳条件下为10.2％，该方法超声溶剂为乙醇，不够环保。(3)中国专利CN105998091，超声条件下，利用乙醇提取-水沉淀对牛樟芝中三萜类物质进行提取，该方法操作简单，但仍使用乙醇等有机溶剂，不够环保，且未给出提取率。(4)中国专利CN104189021，提取牛樟芝总三萜，将牛樟芝粉碎后，直接加水制得待测样品溶液，后加入活性炭，微孔过滤膜过滤得滤液，然后加入乙醚超声提取，正丁醇超声提取，得三萜粗提液。该方法，加入活性炭可除去部分杂质，但也同时降低了三萜得率，有机溶剂的大量使用，污染环境。(5)中国专利CN104127407，牛樟芝粉末与硅藻土混合，加入5％-10％的NaHCO3，超声提取3-5次，每次5-10min，加入甲醇或氯仿定容挥干溶剂，得三萜粗提取浸膏。该方法，加入硅藻土可除去部分杂质，但也同时降低了三萜得率，该方法未给出提取率，提取时间长。超声提取法，提取时间相对较短，但提取率较传统提取法未有显著提高，且超声提取对设备要求高，也不适用于工业化生产。为了寻找相对高效的牛樟芝总三萜和多糖的提取方法，国内学者也对牛樟芝总三萜和多糖的几种单一提取方法进行了比较研究。王光磊等人(1、王光磊，洪华炜，王宫.几种提取技术在樟芝总三萜提取中的应用和比较，海峡药学，2014,26(8):31-32；2、王光磊，王瑾，王宫.樟芝总多糖提取方法的研究和筛选，海峡药学，2014,26(11):105-107)分别比较了超声提取法、索氏提取法、闪式提取法和酶解提取法在牛樟芝多糖和三萜中的提取效果，酶解法最高，索氏提取次之，超声和闪式提取提取率低，但酶解法成本高，索氏提取时间达4h，提取时间长。单一的提取方法各有利弊，随着牛樟芝提取技术的发展，超声提取法，超临界流体萃取、酶解法间的相互结合的方法，被运用到牛樟芝有效成分的提取中。(1)中国专利CN104435005，牛樟芝前处理后对三萜类化合物超临界CO2萃取、结合超声提取、减压蒸馏得到三萜类化合物粗提物浸膏。超临界CO2萃取虽然减少了有机溶剂的污染，但萃取时间长达4h，超声提取的次数为3次，每次15min，总提取所需时间长，且未给出提取率，操作复杂，成本高。(2)中国专利CN104987429，采用酶解、超临界萃取、离子交换色谱、膜分离超滤和层析法纯化相结合的技术实现牛樟芝化合物组分的分离提取，酶解法破除细胞壁，相对增加了三萜和多糖的溶出率，但该方法未给出提取率，且三萜多糖分离精制过程操作复杂，酶解法运营成本更高，需要进一步论证其应用的价值。樟芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，直接将其简单粉碎处理，进行提取，樟芝中有效成分很难被完全充分的提取出来。近年来，机械力化学技术在天然物质改性及植物有效成分提取领域中得到实际应用。将机械力化学的原理和方法引入到天然生物活性成分的提取，形成了机械化学提取技术。实验结果表明机械力作用可以破坏细胞壁，达到超微粉碎，使有效物质更加容易释放，提高提取率。(1)中国专利CN1290554，采用机械力化学结合超临界CO2提取灵芝中有效活性成分，提取的有效活性成分占灵芝孢子粉的37％-37.6％，但该方法旨在机械力破坏细胞壁或结合酶解法破除细胞壁，增大有效成分的溶出率，对三萜和多糖的提取没有针对性，也未提到有效成分的组成和提取率，提取物成分复杂，超临界CO2萃取中仍用到有机溶剂乙醇为夹带剂，不够环保。(2)中国专利CN104231105，采用恒温高速剪切法结合酶解法提取海葵多糖，恒温高速剪切法破碎原料，海葵多糖的得率提高，但该方法，酶解成本较高，恒温高速剪切后，水浸提2-4h，提取时间长，效率低。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是克服上述现有技术的不足，提供一种工艺简单、操作方便、环境友好、易于实现工业化生产的牛樟芝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛樟芝总三萜和总多糖的同步提取方法，其特征在于所述方法为：(1)取牛樟芝子实体粉末，加入碱性助磨剂进行球磨处理，获得球磨后的粉末；所述碱性助磨剂为无机碱化合物；(2)将步骤(1)球磨后的粉末加入蒸馏水中，在30‑70℃恒温下，于5000‑10000rmp高速剪切反应5‑20min，离心，获得上清液；(3)将步骤(2)上清液调节pH至酸性，搅拌均匀后，置4℃冰箱中静置至沉淀完全，过滤，获得滤液和滤渣，滤液浓缩冷冻干燥后即为总多糖提取物，滤渣自然晾干后即为总三萜提取物。

【技术特征摘要】
1.一种牛樟芝总三萜和总多糖的同步提取方法，其特征在于所述方法为：(1)取牛樟芝子实体粉末，加入碱性助磨剂进行球磨处理，获得球磨后的粉末；所述碱性助磨剂为无机碱化合物；(2)将步骤(1)球磨后的粉末加入蒸馏水中，在30-70℃恒温下，于5000-10000rmp高速剪切反应5-20min，离心，获得上清液；(3)将步骤(2)上清液调节pH至酸性，搅拌均匀后，置4℃冰箱中静置至沉淀完全，过滤，获得滤液和滤渣，滤液浓缩冷冻干燥后即为总多糖提取物，滤渣自然晾干后即为总三萜提取物。2.如权利要求1所述的牛樟芝总三萜和总多糖的同步提取方法，其特征在于步骤(1)所述牛樟芝子实体粉末是将牛樟芝子实体在为35-60℃烘干至恒重，过60-80目筛获得的。3.如权利要求1所述的牛樟芝总三萜和总多糖的同步提取方法，其特征在于步骤(1)碱性助磨剂为下列一种或几种的任意组合：氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、...

【专利技术属性】
技术研发人员：何荣军，董要，苏为科，许鹏，汪菊娟，谢樟富，金彪，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33