一种副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种副流感病毒一步法荧光分型RT‑PCR检测试剂盒，试剂盒包括RT‑PCR反应液、RT‑PCR酶混合物、副流感病毒分型引物探针、内参、阴性对照、临界阳性对照、强阳性对照。本发明专利技术可对提取好的副流感病毒RNA直接进行一步法RT‑PCR反应，对样本中的副流感病毒RNA进行荧光分型检测，并依靠内参基因序列作为内对照、利用UNG酶预防污染。本发明专利技术的试剂盒一步法扩增方法简单、程序简短、操作简便、预防污染，检测结果特异性强、敏感度高、结果明晰、可信度高，可用于人鼻咽拭子样本中1型、2型和3型副流感病毒荧光分型检测。

A one-step fluorescence typing RT-PCR kit for detection of parainfluenza virus

The present invention provides a parainfluenza virus one step fluorescent typing RT PCR detection kit. The kit includes RT PCR reaction liquid, RT PCR enzyme mixture, parainfluenza virus type primer probe, internal reference, negative control, critical positive control, strong positive control. The invention can directly carry out one step RT PCR reaction to the extracted parainfluenza virus RNA, detect the parainfluenza virus RNA in the sample, and use the internal reference gene sequence as the internal control, and use the UNG enzyme to prevent the pollution. The first step method of the kit is simple, simple, easy to operate, to prevent pollution, and has strong specificity, high sensitivity, clear results and high reliability. It can be used in the detection of 1, 2 and 3 parainfluenza viruses in the sample of human nasopharynx swab.

【技术实现步骤摘要】
一种副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒
本专利技术属生物
，涉及一种生物检测技术，尤其涉及一种用于副流感病毒荧光分型检测试剂盒。
技术介绍
副流感病毒（HumanParainfluenzaviruses,HPIV）为单股负链RNA病毒，病毒表面含有融合酶和红血球凝聚素—神经氨酸苷酶的糖蛋白刺。副流感病毒是引发成年及儿童下呼吸道感染的主要病原体。感染症状为感冒发烧、喉炎及支气管炎等。HPIV病毒可对人体重复感染，尤其是老年及免疫功能低下的患者。副流感病毒感染人的潜伏期是3~7天，与流感一样属于自限性疾病，一般6～7天自行痊愈。但它对人体危害主要是会引起严重的肺部并发症，所以在治疗上一般可以进行对症治疗，即有支气管炎就治支气管炎，有肺炎就治肺炎。而在预防上，除了上述一些措施外，普通居家中还可以用醋酸、八四消毒液等消毒剂消毒。人类副流感病毒有四种血清型（1~4型），每种血清型有不同的临床及流行病学特征：1型和2型副流感病毒为导致儿童肺炎的主要病原体，3型副流感病毒与毛细支气管炎和肺炎表现出更多的相关性；根据文献报道，4型副流感病毒较难获得较高的细胞培养回收率，可导致轻度呼本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副流感病毒一步法荧光分型RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：本专利技术通过考察已知副流感病毒（Human Parainfluenza viruses, HPIV）基因组全序列，并根据检索所得HPIV不同基因型一致性保守序列设计出一对1型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对2型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对3型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对外源性内参系列特异性引物、一条1型副流感病毒特异性探针、一条2型副流感病毒特异性探针、一条3型副流感病毒特异性探针和一条外源性内参特异性探针，采用实时荧光RT‑PCR方法扩增目的基因。

【技术特征摘要】
1.一种副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：本发明通过考察已知副流感病毒（HumanParainfluenzaviruses,HPIV）基因组全序列，并根据检索所得HPIV不同基因型一致性保守序列设计出一对1型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对2型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对3型副流感病毒核酸序列特异性引物、一对外源性内参系列特异性引物、一条1型副流感病毒特异性探针、一条2型副流感病毒特异性探针、一条3型副流感病毒特异性探针和一条外源性内参特异性探针，采用实时荧光RT-PCR方法扩增目的基因。2.权利要求1所述的副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：1型、2型和3型副流感病毒RNA特异性PCR扩增的基因序列和内参基因序列分别为：〈SEQIDNo.1〉5’-CCTGAAGCCGAAGGAGAGGCACCACGAAAACAAGAATCACTCTCAGGTGTCATCGGACTCCTTGACGTCGTCCTATCCTACAAGCCCACCGAAATTGGAG-3’，〈SEQIDNo.2〉5’-TTCCTAAAAGGACATGTAGAATCATTTTCCGAACTGCCACAATTCTTGGCATATGCACATTAATTGTGCTATGTTCAAGTATTCTTCATG-3’，〈SEQIDNo.3〉5’-GCTGGTAATGAGCTGGAAACATCCATGGCTACTCATGGCAACAAGATCACCAACAAGATAACATATATATTATGGACAATAATCCTGGTGTTATTATC-3’，〈SEQIDNo.4〉5’-CATTGCTTCCATTGATGGCTTAAAGGACACCACCAATTGGTTCCTCTCTGTGCACAGGCTAATTTTTTAGGGAAAATCTGGCCTTCCCACAAGGGGAGGCCAGGGAATTTTCTTCACGTGCGCTGCYGAAGATCAAA-3’，副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒中1型、2型和3型副流感病毒扩增基因序列全长分别为100bp、90bp和98bp，均属血细胞凝集素神经氨酸酶基因，且均为单拷贝序列；内参基因序列全长137bp，均与三种副流感病毒扩增基因中的探针序列有所不同。3.如权利要求1所述的副流感病毒一步法荧光分型RT-PCR检测试剂盒，一对1型副流感病毒特异性引物序列中的一条序列与SEQIDNo.1中所示的序列相同，另一条序列与SEQIDNo.1中所示的序列互补；一对2型副流感病毒特异性引物序列中的一条序列与SEQIDNo.2中所示的序列相同，另一条序列与SEQIDNo.2中所示的序列互补；一对3型副流感病毒特异性引物序列中的一条序列与SEQIDNo.3中所示的序列相同，另一条序列与SEQIDNo.3中所示的序列互补；内参特异性引物序列中的一条序列与SEQIDNo.4中所示的序列相同，另一条序列与SEQIDNo.4中所示的序列互补；其中，所述的一对1型副流感病毒特异性引物，其序列可以选自SEQIDNo.5和SEQIDNo.6，〈SEQIDNo.5〉为：5’-CCTGAAGCCGAAGGAGAGG-3’，〈SEQIDNo.6〉为：5’-CTCCAATTTCGGTGGGCTTGTA-3’；一对1型副流感病毒特异性引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85%以上；所述的一对2型副流感病毒特异性引物，其序列可选自SEQIDNo.7和SEQIDNo.8，〈SEQIDNo.7〉为：5’-TTCCTAAAAGGACATGTAGAATC-3’，〈SEQIDNo.8〉为：5’-CATGAAGAATACTTGAACATAG-3’；一对2型副流感病毒特异性引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85%以上；所述的一对3型副流感病毒特异性引物，其序列可选自SEQIDNo.9和SEQIDNo.10，〈SEQIDNo.9〉为：5’-GCTGGTAATGAGCTGGAAACAT-3’，〈SEQIDNo.10〉为：5’-GATAATAACACCAGGATTATTGT-3’；一对3型副流感病毒特异性引物序列也...

【专利技术属性】
技术研发人员：迟大利，吴大治，夏懿，
申请(专利权)人：上海星耀医学科技发展有限公司，上海复星医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31