一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒，涉及病毒核酸检测的体外诊断技术领域。本发明专利技术公开的检测人乳头瘤病毒的核酸组合包括：SEQ ID NO.1‑6所示的引物和SEQ ID NO.7‑9所示的探针。该核酸组合可同时检测HPV 16和HPV 18且可对HPV16和HPV18特异性分型，同时还可通过内对照β‑globin基因检测结果对检测过程进行质量控制，降低假阴性，具有灵敏度高、特异性强的特点。

Nucleic acid combination for detecting human papillomavirus and its application and kit

The invention discloses a nucleic acid combination for detecting human papillomavirus and its application and kit, and relates to the field of in vitro diagnostic technology for virus nucleic acid detection. The nucleic acid combination for detection of human papillomavirus disclosed in the present invention includes primers shown in SEQ ID ID NO.1 6 and probes shown in SEQ ID ID NO.7 NO.7. The nucleic acid combination can simultaneously detect HPV 16 and HPV 18 and can classify the HPV16 and HPV18 specificity, and also can control the detection process by internal control beta globin gene detection results, and reduce false negative, with high sensitivity and specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒
本专利技术涉及病毒核酸检测的体外诊断
，具体而言，涉及一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合及其应用和试剂盒。
技术介绍
长期以来，细胞学筛查是宫颈癌筛查的唯一或主要方式，自1941年传统巴氏细胞学检测引入临床以来，宫颈癌的发病率和死亡率大大降低，尤其死亡率至少降低了70％，但巴氏细胞学涂片的准确性受诸多因素的影响，假阴性率较高，为5％-40％。近30多年来，细胞学筛查先后经历了检测技术与诊断方式的革命，即液基细胞学制片技术和计算机辅助细胞检测系统的应用完善，前者明显提高了细胞涂片质量，降低假阴性率至10％左右，提高了宫颈上皮高级病变及侵润癌的阳性检出率。后者减少了主观评判错误，为大规范筛查迈出了重要一步，但仍离不开细胞病理学专家的判断鉴别，且需特殊设备，开展受限。随着人们对人乳头瘤病毒(HPV)和宫颈病变关系认识的逐渐加深以及医学实验技术发展，HPV感染的检查方法也由组织细胞水平发展到分子水平，HPV是一种嗜上皮性病毒。根据HPV致癌风险性大小，可将引起高度宫颈上皮内瘤变从而导致宫颈癌发生的HPV称为高危型HPV。2004年出版的《TheHealthProfessional'sHPVhandbook》指出高危型HPV有18种，分别为HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82。高危型HPV感染被视为几乎所有宫颈癌发生的必要条件，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型HPVDNA的存在，其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80％。目前国内临床主要的HPV检测的常见方法包括测序法、杂交捕获法、基因芯片法及荧光PCR法。测序法的结果相对准确，但操作繁琐，且对操作者的要求较高，不适于临床应用；杂交捕获法如Digene公司的HybridCaptureII已被美国FDA批准并已在临床上应用，检测时间长(DNA分离45min、DNA-RNA杂交60min、抗体捕获60min、化学发光30min、计算机判读15min一次实验一般要5～6小时)、灵敏度过低(3.5×105copies/mL)、操作复杂、检测基因型少无法具体分型(仅13种高危型)且需要特定昂贵的仪器，成本高，和其检测外的高危型和低危型如HPV6、11等存在交叉反应，该法假阳性的问题仍然十分严重，且成本高。不宜在经济较不发达的发展中国家推广；基因芯片法类产品(如PCR-反向点杂交法、液态芯片法)虽然能对HPV具体分型，且检测基因型相对多，但其缺点是不能实现实时检测，需要扩增后产物分析操作，耗时长(4h以上)、易存在PCR产物污染、操作复杂、不能满足临床宫颈癌大量筛查的需求。而上世纪90年代中期在传统的PCR基础上发展起来的实时荧光PCR技术不但灵敏度高特异性强，自动化程度高，成本适中，几乎不会造成污染，这些优点无疑给人乳头瘤病毒的早期诊断带来了福音。现有荧光PCR法HPV检测产品有以下缺点：1、现有荧光PCR产品不能在单管中实现18种高危型HPV分型，致使检测通量低且操作繁琐难以满足对大规模筛查要求。2、在单管中多数试剂盒检测少于18种高危型HPV，且不对HPV16、HPV18分型。综上亟需能够实现快速、有效且准确检测HPV病毒型别的产品，以用于HPV病毒高低危型的全面的检测，HPV病毒相关性疾病的预测及治疗监测。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合，该核酸组合可同时检测HPV16和HPV18且可对HPV16和HPV18特异性分型，同时还可通过内对照β-globin基因检测结果对检测过程进行质量控制，降低假阴性，具有灵敏度高、特异性强的特点。本专利技术的另一目的在于提供一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒，该试剂盒可同时检测HPV16和HPV18且可对HPV16和HPV18特异性分型，同时还可通过内对照β-globin基因检测结果对检测过程进行质量控制，降低假阴性，具有操作简单、灵敏度高、特异性强的特点。检测结果可用于高危型人乳头瘤病毒感染的辅助诊断及宫颈癌的早期筛查。本专利技术是这样实现的：一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合，其包括：SEQIDNO.1-6所示的引物和SEQIDNO.7-9所示的探针。其中，SEQIDNO.1、SEQIDNO.4以及SEQIDNO.7可针对HPV16检测，SEQIDNO.2、SEQIDNO.5以及SEQIDNO.8可针对HPV18检测，SEQIDNO.3、SEQIDNO.6以及SEQIDNO.9针对β-globin基因检测，作为内参对照。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述核酸组合还包括以下核酸分子组合方式中的一种或多种：(1)SEQIDNO.10和SEQIDNO.24所示的引物以及SEQIDNO.34所示的探针；用于检测HPV31。(2)SEQIDNO.11和SEQIDNO.26所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；用于检测HPV33。(3)SEQIDNO.10和SEQIDNO.25所示的引物以及SEQIDNO.34所示的探针；用于检测HPV35。(4)SEQIDNO.13和SEQIDNO.35所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；用于检测HPV52。(5)SEQIDNO.12和SEQIDNO.35所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；用于检测HPV58。(6)SEQIDNO.14和SEQIDNO.27所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；用于检测HPV39。(7)SEQIDNO.15和SEQIDNO.28所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；用于检测HPV45。(8)SEQIDNO.16和SEQIDNO.30所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；用于检测HPV59。(9)SEQIDNO.17和SEQIDNO.29所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；用于检测HPV68。(10)SEQIDNO.18和SEQIDNO.30所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；用于检测HPV73。(11)SEQIDNO.21和SEQIDNO.33所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；用于检测HPV51。(12)SEQIDNO.20和SEQIDNO.32所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；用于检测HPV53。(13)SEQIDNO.19和SEQIDNO.31所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；用于检测HPV56和HPV66。(14)SEQIDNO.22和SEQIDNO.33所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；用于检测HPV82。(15)SEQIDNO.23和SEQIDNO.33所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；用于检测HPV26。同时采用上述的引物和探针进行PCR，可在同一体系进行超多重PCR，避免非特异性扩增，提高检测结果的准确性，不仅实现对HPV16、HPV18的检测，还可以实现对其他高危型HPV即HPV31、HPV33、HPV35、HPV52、HPV58、HPV39、HPV45、HPV59、HPV68、HPV73、HPV51、HPV53、HPV56、HPV本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合，其特征在于，其包括：SEQ ID NO.1‑6所示的引物和SEQ ID NO.7‑9所示的探针。

【技术特征摘要】
1.一种检测人乳头瘤病毒的核酸组合，其特征在于，其包括：SEQIDNO.1-6所示的引物和SEQIDNO.7-9所示的探针。2.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合还包括以下核酸分子组合方式中的一种或多种：(1)SEQIDNO.10和SEQIDNO.24所示的引物以及SEQIDNO.34所示的探针；(2)SEQIDNO.11和SEQIDNO.26所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；(3)SEQIDNO.10和SEQIDNO.25所示的引物以及SEQIDNO.34所示的探针；(4)SEQIDNO.13和SEQIDNO.35所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；(5)SEQIDNO.12和SEQIDNO.35所示的引物以及SEQIDNO.35所示的探针；(6)SEQIDNO.14和SEQIDNO.27所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；(7)SEQIDNO.15和SEQIDNO.28所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；(8)SEQIDNO.16和SEQIDNO.30所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；(9)SEQIDNO.17和SEQIDNO.29所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；(10)SEQIDNO.18和SEQIDNO.30所示的引物以及SEQIDNO.36所示的探针；(11)SEQIDNO.21和SEQIDNO.33所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；(12)SEQIDNO.20和SEQIDNO.32所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；(13)SEQIDNO.19和SEQIDNO.31所示的引物以及SEQIDNO.37所示的探针；(14)SEQIDNO.22和SEQIDNO.33所示的引物以及SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：王河清，张琳，李秀林，张蓉，严浩荣，涂小宝，徐加发，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32