一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法技术

本发明专利技术属于扩增程序技术领域，公开了一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；预变性：94℃，2分钟，1次循环；变性：94℃，10秒，40次循环；退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环；仪器冷却：35℃，10秒，1次循环。从2009年至今，本发明专利技术一直采取此方式进行扩增人乳头瘤病毒(HPV16/18型)，该项目每年均参加了卫生部的室间质评(每年2次)，比对通过率为100％；节约了成本并提高了效率。

An amplification method for qualitative amplification of human papillomavirus

The invention belongs to the field of amplification program technology, and discloses a method for amplification of a human papillomavirus qualitative amplification program. The UNG enzyme reaction: 50 C, 2 minutes, 1 cycles; predegeneration: 94, 2 minutes, 1 cycles; degeneration: 94, 10, 40 cycles; annealing, extending and detecting fluorescence: 60, 30 seconds, 40 cycle Instrument cooling: 35 centigrade, 10 seconds, and 1 cycles. Since 2009, the invention has been adopted to expand the human papillomavirus (type HPV16/18). The project has participated in the Ministry of health interventricular assessment (2 times a year), with a comparison rate of 100%, saving the cost and improving the efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法
本专利技术属于扩增程序
，尤其涉及一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：人乳头瘤病毒(HPV16/18型)定性和HBVDNA定量为科室每天必扩增的项目。扩增时，在罗氏扩增仪(LightCycler480)需要各自加样于一块96孔板并且按照其本身的说明书程序进行扩增。但是仪器数量有限，两个板分别扩增也比较耗时，影响了科室的出单效率。HPV的检测在宫颈癌的早期筛查中扮演着重要的角色，很大程度上提升了宫颈癌和癌前病变的检出率。HPV的检测方法最初是基于细胞学检查所见，随着人们对HPV和宫颈病变关系的深入了解，HPV-DNA/RNA检测在宫颈病变预防、筛查、诊治及随访中的作用日益显现，优于传统的细胞学检查。目前科学家已证明了感染HPV病毒是引起宫颈癌的主要病因，高危-HPV检测捕获早期宫颈癌是近几年医学界刚刚专利技术并开展起来的一种快速、有效的检测方法，可一次检测所有引致宫颈癌的13个高危型HPV病毒，使宫颈癌检出率达99％以上。这种方法都简便易行、无创伤、无痛苦。定期接受高危-HPV病毒检测，可以及早发现有无HPV病毒感染，及早治疗。HPV的检查还可以取病变组织和局部组织粘液、分泌物进行HPV-DNA检测。PCR技术具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时，对待检原始材料质量要求低等特点。目前认为PCR技术是检测HPVDNA及分型的最好方法，是当今用于HPV感染诊断最常用的方法。在PCR扩增过程中，特异性引物和探针分别与靶系列结合，Taq酶在引物的引导下复制靶系列当遇到结合在两条引物之间的探针时，发挥5′端外切酶功能，将探针水解，水解下来的FAM荧光基团受激发发射荧光，每合成一条DNA链发射一次荧光信号。因此只要标本中含相应类型的HPV病毒就会有荧光信号的积累，从而达到检测HPVDNA的目的。综上所述，现有技术存在的问题是：现有人乳头瘤病毒定性扩增程序成本高，扩增比较耗时，影响了科室的出单效率。解决上述技术问题的难度和意义：本专利技术更改了人乳头瘤病毒(HPV16/18型)的扩增程序并进行验证，可以将人乳头瘤病毒(HPV16/18型)和HBVDNA同时加于一块板，用该程序扩增。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法。本专利技术是这样实现的，一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，所述人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法包括：UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；预变性：94℃，2分钟，1次循环；变性：94℃，10秒，40次循环；退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环。进一步，退火、延伸及检测荧光后，还需进行：仪器冷却：35℃，10秒，1次循环。进一步，仪器冷却后单独将人乳头瘤病毒于LightCycler480上用变更后的程序扩增，验证分析准确度和符合性。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：从2009年至今，本专利技术一直采取此方式进行扩增人乳头瘤病毒(HPV16/18型)，每年均参加卫生部的室间质评(每年2次)，比对通过率为100％；本专利技术节约了成本并提高了效率。附图说明图1是本专利技术实施例提供的人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。现有人乳头瘤病毒定性扩增程序成本高，扩增比较耗时，影响了科室的出单效率。如图1所述，本专利技术实施例提供的人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，包括：S101：UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；S102：预变性：94℃，2分钟，1次循环；S103：变性：94℃，10秒，40次循环；S104：退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环；S105：仪器冷却：35℃，10秒，1次循环。从2009年至今，本专利技术一直采取此方式进行扩增人乳头瘤病毒(HPV16/18型)，该项目每年均参加了卫生部的室间质评(每年2次)，比对通过率为100％；此种做法给科室节约了成本并提高了效率下面结合本专利技术的方案与现有技术进行进一步对比分析。1、变更人乳头瘤病毒(HPV16/18型)定性扩增程序，变更情况如下：2、单独将人乳头瘤病毒(HPV16/18型)于LightCycler480上用变更后的程序扩增，验证分析其准确度和符合性。本专利技术提升了工作效率，减少了人员消耗。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，其特征在于，所述人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法包括：UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；预变性：94℃，2分钟，1次循环；变性：94℃，10秒，40次循环；退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环。

【技术特征摘要】
1.一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，其特征在于，所述人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法包括：UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；预变性：94℃，2分钟，1次循环；变性：94℃，10秒，40次循环；退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环。2.如权利要求1所述的人乳头...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘儒霖，魏彩霞，佟芳，王丽媛，
申请(专利权)人：昆明金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53