PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用制造技术

本发明专利技术提供了PR‑957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。该技术方案以MCAO动物模型为实验对象，利用PR‑957考察了免疫蛋白酶体在缺血性脑卒中中的作用。实验结果表明，PR‑957治疗可以通过降低STAT3的磷酸化水平，进而导致RORγt和IL‑17的转录水平降低，从而抑制Th17分化，减轻脑内炎症反应，减小脑梗死体积，减轻神经功能缺陷。因此，PR‑957在调节小鼠缺血性脑卒中后辅助性T细胞的炎症状态中起关键作用，可以作为缓解缺血性脑卒中后脑损伤的治疗手段。 1

Application of PR-957 in the preparation of drugs for cerebral ischemia reperfusion injury

The invention provides an application of PR 957 for preparing medicine for treating cerebral ischemia reperfusion injury. The animal model of MCAO was used as the experimental object. The role of proteasome in ischemic stroke was investigated by PR 957. The experimental results show that PR 957 therapy can reduce the level of phosphorylation of STAT3 and lead to the decrease of the transcription level of ROR gamma T and IL 17, thus inhibiting the differentiation of Th17, reducing the inflammatory reaction in the brain, reducing the volume of cerebral infarction and alleviating the defects of nerve function. Therefore, PR 957 plays a key role in regulating the inflammatory state of auxiliary T cells after ischemic stroke in mice, and can be used as a therapeutic method to alleviate cerebral injury after ischemic stroke. One

【技术实现步骤摘要】
PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用
本专利技术涉及医药
，进一步涉及物质的新的医药用途，具体涉及PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。
技术介绍
缺血性脑卒中是指由脑供血动脉狭窄或闭塞引起脑供血不足、进而导致脑组织坏死的总称。在缺血性脑卒中发病过程中，所造成的损伤呈多环节级联效应，由多种损伤机制共同参与，除了由缺血本身所造成的组织梗死、炎症反应之外，缺血后再灌注对组织细胞的进一步损害也是缺血性脑卒中发病的必然阶段。缺血后的再灌注对脑部组织具有严重损失，脑缺血时脑细胞生物电发生改变，出现病理性慢波，缺血一定时间后再灌注，慢波持续并加重。颞叶组织内神经递质性氨基酸代谢发生明显变化，即兴奋性氨基酸随缺血再灌注时间延长而逐渐降低，抑制性氨基酸在缺血再灌注早期明显升高。缺血再灌注损伤时间越长，兴奋性递质含量越低，脑组织超微结构改变越明显：线粒体肿胀，有钙盐沉积，并可见线粒体嵴断裂、核染色质凝集、内质网高度肿胀，结构明显破坏、星型细胞肿胀，Nissl体完整性破坏、胶质细胞、血管内皮细胞肿胀，周围间隙增大并有淡红色水肿液、白质纤维间隙疏松，血管内由微血栓、髓鞘分层变性，呈现不可逆损伤。PR-957(又称为ONX0914)，是免疫蛋白酶体亚基低分子量多肽7(LMP7)的特异性抑制剂，已被证明在调节中枢神经系统多种疾病的病理生理和炎症反应中起关键作用，目前主要用于实验性类风湿性关节炎、炎症性肠病的治疗。目前，现有技术中未见其用于治疗的脑缺血再灌注损失的报道。有研究者报道，在心肌缺血/再灌注过程中，抑制免疫蛋白酶体亚基β5i(LMP7)活性可加重缺血/再灌注引起的心肌损伤(徐多娇等，2017)。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用，以拓展脑缺血再灌注损伤治疗药物的可选范围。本专利技术要解决的另一技术问题是现有技术中PR-957的适应症范围较为局限。本专利技术要解决的再一技术问题是如何实现对脑缺血再灌注患者神经功能损伤、炎症性损伤等具体病理症状的治疗。本专利技术要解决的又一技术问题是揭示PR-957对脑缺血再灌注损伤的治疗机理。本专利技术提供了PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。作为优选，所述治疗是通过减小脑组织梗死体积实现的。作为优选，所述治疗是通过抑制CD4+T细胞向Th17分化实现的。作为优选，所述治疗是通过降低脑组织中pSTAT3蛋白水平和RORγtmRNA水平实现的。作为优选，所述治疗是通过抑制脑组织内促炎性细胞因子的表达实现的。作为优选，所述促炎性细胞因子包括IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17A、IFN-γ或TNF-α。作为优选，所述脑缺血再灌注损伤是由缺血性脑卒中导致的。作为优选，所述脑缺血再灌注损伤是由脑缺血再灌注所导致的神经功能损伤。作为优选，所述缺血再灌注损伤是由脑缺血再灌注所导致的炎症性损伤。作为优选，所述药物的剂型为注射剂；所述注射剂是含有10％(w/v)磺丁基醚-β-环糊精、10mM柠檬酸钠、PR-957的水溶液。作为优选，所述水溶液的pH值为3.5。作为优选，所述药物的有效剂量为20mg/kg。本专利技术提供了免疫蛋白酶体亚基低分子量多肽7(LMP7)的特异性抑制剂PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。该技术方案以MCAO动物模型为实验对象，利用PR-957考察了免疫蛋白酶体在缺血性脑卒中中的作用。实验结果表明，PR-957治疗可以通过降低STAT3的磷酸化水平，进而导致RORγt和IL-17的转录水平降低，从而抑制Th17分化，减轻脑内炎症反应，减小脑梗死体积，减轻神经功能缺陷。因此，PR-957在调节小鼠缺血性脑卒中后辅助性T细胞的炎症状态中起关键作用，可以作为缓解缺血性脑卒中后脑损伤的治疗手段。具体来看，本专利技术分析了PR-957在大脑中动脉阻塞(MCAO)引起的小鼠实验性卒中模型中的神经保护作用。首先，通过神经行为学评分评估了PR-957对小鼠神经功能的改善情况，并对小鼠脑梗死体积进行了测量。同时，利用免疫荧光染色对梗死灶周围Th17细胞的分布进行了检测。然后，本专利技术通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析和流式细胞术对梗死侧脑组织中免疫细胞及细胞因子进行了分析。此外，本专利技术利用蛋白印迹法追踪磷酸化信号转导和转录激活因子p-STAT3的表达。实验结果显示，PR-957能够减小小鼠脑组织梗死体积，改善神经功能缺陷。本专利技术的结果还表明，PR-957能够减少MCAO小鼠中的T淋巴细胞浸润，抑制Th17细胞分化。与对照组相比，PR-957治疗组中表达的p-STAT3水平也显着降低，而STAT3磷酸化水平下降可以直接抑制Th17细胞分化。因此，PR-957具有抗炎作用，对缺血性脑卒中具有神经保护作用，对该疾病的治疗具有潜在应用价值。附图说明图1是本专利技术具体实施方式中，MCAO小鼠单次腹腔注射5、10、20、30mg/kg剂量的PR-957后，神经功能及梗死灶体积变化情况。图2是本专利技术具体实施方式中，PR-957对MCAO小鼠脑组织淋巴细胞亚群的影响。图3是本专利技术具体实施方式中，PR-957对MCAO小鼠脑组织Th17细胞水平的影响。图4是本专利技术具体实施方式中，PR-957对MCAO小鼠脑组织pSTAT3蛋白水平和RORγtmRNA水平的影响。图5是本专利技术具体实施方式中，PR-957对MCAO小鼠脑组织促炎性细胞因子水平的影响。图6是PR-957的抗炎作用原理图。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。1材料与方法1.1实验动物C57BL/6成年雄性小鼠(6-8周，18-20g)购自北京维通利华实验动物技术有限公司(中国北京)。所有小鼠在12小时光照-12小时黑暗循环条件下，置于温度和湿度可控的房间中饲养。在实验期间，给小鼠提供适量的水和食物，并使其适应上述实验条件一周。所有动物实验操作均符合国家规定，并经天津医科大学动物实验伦理委员会批准。实验中，将278只雄性小鼠随机分为3组：假手术组(Sham)，PR-957治疗组(MCAO+PR-957)和溶剂对照组(MCAO+溶剂)。MCAO小鼠死亡率约为4％，假手术组无死亡。1.2MCAO造模在本实验中，本专利技术根据Longa等报道的实验方法，通过大脑中动脉闭塞的方法诱导短暂性脑缺血(Longa等，1989)，制作缺血性脑卒中小鼠模型。手术前，使用10％水合氯醛(30mg/kg)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PR‑957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。

【技术特征摘要】
1.PR-957用于制备治疗脑缺血再灌注损伤药物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗是通过减小脑组织梗死体积实现的。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗是通过抑制CD4+T细胞向Th17分化实现的。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗是通过降低脑组织中pSTAT3蛋白水平和RORγtmRNA水平实现的。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗是通过抑制脑组织内促炎性细胞因子的表达实现的。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述促炎性细胞因子包括I...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝峻巍，马晓峰，郭英，陈秀菊，李道静，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：天津,12