本发明专利技术公开了miR‑342‑5p在制备防治心脏病的药物中的应用，miR‑342‑5p具有显著的心脏保护作用，能够减轻心肌缺血/再灌注损伤，改善心脏功能。miR‑342‑5p是内源性物质，存在于正常的心肌细胞中，通过调节miR‑342‑5p防治心脏病具有安全性优势。miR‑342‑5p通过下调细胞凋亡相关蛋白caspase9、JNK2和激活心肌细胞生存信号发挥心脏保护作用，靶点多，综合效果好。
MiR 342 5p in preparation of medicine for preventing heart disease.
The invention discloses a miR 342 5p application of drugs for prevention and treatment of heart disease in the system, miR 342 5p has significant cardioprotective effects, can alleviate myocardial ischemia / reperfusion injury, improve heart function. MiR 342 5p is endogenous substances present in normal myocardial cells, with a safety advantage by adjusting the miR 342 5p heart disease prevention. MiR 342 5p by down regulating the expression of apoptosis related protein caspase9, JNK2 and the activation of myocardial cell survival signaling exerts cardioprotective effects, multiple target points, good comprehensive effect.
【技术实现步骤摘要】
miR-342-5p在制备防治心脏病的药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，涉及miR-342-5p在制备防治心脏病的药物中的应用。
技术介绍
冠心病是人类的头号杀手，给社会带来严重的医疗和经济负担。而冠心病危害心脏的主要病理机制就是急性冠脉阻塞后发生的心肌缺血/再灌注损伤。在心肌缺血期，心肌细胞能量代谢障碍，ATP生成减少，ROS和细胞浆游离Ca2+增多；在再灌注期，ROS和细胞浆游离Ca2+进一步增多，蛋白酶激活，线粒体损伤加重以及凋亡通路激活，导致心肌细胞发生凋亡和坏死，影响心脏功能。目前的介入手术在尽快恢复心肌血供方面发挥了重要作用，但是心肌缺血/再灌注引起的损伤减弱了介入手术的益处，影响了缺血区心肌细胞的存活和心脏功能的恢复。研究减轻心肌缺血/再灌注损伤的方法具有重要的临床意义。目前干预心肌缺血/再灌注损伤的手段比较有限，常规使用极化液保护心脏。但是极化液在应用中面临越来越多的的挑战，因为冠心病合并糖尿病的患者越来越多，其对存在心肌胰岛素抵抗的患者效果欠佳。因此，寻求新的药物治疗手段已成为世界范围内关注的热点。miRNA是一类长度在19-22个核苷酸的具有高度保守性的非编码RNA，它广泛存在于机体细胞，通过与靶标mRNA的3’UTR完全或者不完全配对，降解靶标mRNA或者干扰靶标mRNA的翻译。通常，一个miRNA可以调节数百个mRNA的表达水平或翻译能力，并且超过60％的蛋白基因受miRNA的调节。因此，miRNA在基因的转录后修饰中发挥非常重要作用，在细胞稳态、适应和病理生理过程中参与复杂的分子调控。研究发现，在病理条件下，如心肌缺血，心衰，心肌肥大等，心脏miRNA表达异常，并且，通过干预特定的miRNA可以调节病理过程。因此，miRNA是心脏疾病预防和治疗中的有效靶点。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供miR-342-5p在制备防治心脏病的药物中的应用，miR-342-5p通过减轻心肌缺血/再灌注损伤保护心肌细胞，改善心脏功能，在心脏病中具有药用价值。本专利技术是通过以下技术方案来实现：miR-342-5p在制备防治心脏病的药物中的应用。所述的药物是具有心脏保护作用、减轻心肌缺血/再灌注损伤的药物。所述的药物是降低心肌细胞中caspase9和JNK2蛋白水平，减少心肌细胞凋亡的药物。所述的药物是增加心肌细胞Akt的磷酸化水平，促进心肌细胞生存的药物。miR-342-5p作为靶点在制备防治心脏病的药物中的应用。所述的药物是在基因水平和/或蛋白水平以miR-342-5p作为药物靶点，调节其表达的药物。所述的药物是协同和/或协助miR-342-5p降低心肌细胞中caspase9和JNK2蛋白水平的药物。所述的药物协同和/或协助miR-342-5p增加心肌细胞Akt的磷酸化水平的药物。所述的药物协同和/或协助miR-342-5p减少心肌细胞凋亡、促进心肌细胞生存的药物。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：miR-342-5p具有显著的心脏保护作用，能够减轻心肌缺血/再灌注损伤，改善心脏功能。miR-342-5p是内源性物质，存在于正常的心肌细胞中，通过调节miR-342-5p防治心脏病具有安全性优势。miR-342-5p通过下调细胞凋亡相关蛋白caspase9、JNK2和激活心肌细胞生存信号发挥心脏保护作用，靶点多，综合效果好。附图说明图1为miR-342-5p对在体心脏缺血/再灌注损伤的抑制作用；其中，n＝5，*p＜0.05vs.Pre-I，**p＜0.01vs.I/R；图2为miR-342-5p对离体心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用；其中，n＝4，*p＜0.05；**p＜0.01vs.miR-NC；图3为miR-342-5p对心肌细胞凋亡相关蛋白的调节；其中，n＝4，*p＜0.05；**p＜0.01vs.mimic-NC，#p＜0.05vs.inhibitor-NC；图4-1为miR-342-5p与相关蛋白mRNA预测结合序列，以及相关蛋白mRNA突变序列示意图；图4-2为双荧光素酶报告基因结果；其中，n＝3，**p＜0.01vs.WT-NC；图5为miR-342-5p对心肌细胞生存信号的调节；其中，n＝3，**p＜0.01vs.mimic-NC，#p＜0.05vs.inhibitor-NC。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。miR-342-5p是一种miRNA其序列为：GAGUUAGUGUCUAUCGUGGGGA，本专利技术通过以下研究发现miR-342-5p具有显著的心脏保护作用，能够减轻心肌缺血/再灌注损伤，其可应用于防治心脏病的药物。1)miR-342-5p对在体心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的抑制将6周龄雄性SD大鼠随机分为两组，实验组(I/R+miR-342-5p)心肌点注射miR-342-5pagomir(10nmol)，对照组(I/R)心肌点注射其对照试剂。48h后制备心肌缺血再灌注模型。在3％戊巴比妥钠麻醉条件下，结扎大鼠冠状动脉左前降支，30min后松开结扎线进行再灌注2h，用多通道生物信息采集处理系统(ADInstruments，Australia)检测心脏功能并用TTC和伊文氏蓝染色评估心梗面积。检测结果如图1所示，A为心肌梗死面积占缺血面积百分比，B为心功能指标，两者均反映心肌损伤程度，其中，n＝5，*p＜0.05vs.Pre-I，**p＜0.01vs.I/R。结果表明miR-342-5p显著减少SD大鼠心肌梗死面积，改善心脏功能。2)miR-342-5p对离体心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制用消化法分离SD乳鼠心肌细胞，培养在含10％胎牛血清(四季青，中国)的DMEM培养基中，放置于37℃孵箱中(95％Air/5％CO2)。培养48h后换液，使用LipoiMAX(invitrogen，USA)和miR-342-5pmimic(100nM)转染细胞。具体步骤为：首先将3μlLipoiMAX和10μlmiR-342-5pmimic(20μM)及其对照NC分别加入到150μlopti-MEM(invitrogen，USA)中，再将两者混匀，静置5min后与1.7ml含10％胎牛血清(不含抗生素)的DMEM培养基混合，加入细胞中，培养6h后换液，培养48h后进行缺氧(12h)/复氧(3h)刺激，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用LDH试剂盒以及cck-8试剂盒检测相关心肌损伤指标。检测结果如图2所示(其中，n＝4，*p＜0.05；**p＜0.01vs.miR-NC)，A为细胞凋亡百分比的检测结果，其中D为A的原始数据，可以看到加入miR-342-5p后可以减少心肌细胞凋亡；B为LDH试剂盒检测细胞培养上清中LDH水平，可以看到加入miR-342-5p后LDH显著降低；C为cck-8试剂盒检测细胞活力的结果，可以看到加入miR-342-5p后细胞活力增加；综上结果表明miR-342-5p显著减轻乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤，表现为减少心肌细胞凋亡和LDH释放，提高细胞活力。3)miR-342-5p对心肌细胞凋亡相关蛋白的调节使用LipoiMAX和miR-342-5pmimic(100nM)及对照NC，m本文档来自技高网...
【技术保护点】
miR‑342‑5p在制备防治心脏病的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.miR-342-5p在制备防治心脏病的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是具有心脏保护作用、减轻心肌缺血/再灌注损伤的药物。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是降低心肌细胞中caspase9和JNK2蛋白水平，减少心肌细胞凋亡的药物。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是增加心肌细胞Akt的磷酸化水平，促进心肌细胞生存的药物。5.miR-342-5p作为靶点在制备防治心脏病的药物中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：高峰，侯作旭，王立锋，秦兴华，张星，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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