动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物医疗技术领域，具体涉及动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用，所述分子标记物为PR11‑387H17.6，其核酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术的目的就是针对目前临床上，动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的检测缺乏高灵敏度和高特异性的诊断指标，由此提供了动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物RP11‑387H17.6，对寻找高灵敏度和高特异性的动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物，并研制相应的辅助诊断试剂或试剂盒，具有重大意义。

Application of molecular markers in atherosclerotic renal artery stenosis

The present invention relates to the field of molecular biological medical technology, in particular to the application of molecular markers for the diagnosis of atherosclerotic renal artery stenosis. The molecular marker is PR11 387H17.6, and its nucleic acid sequence, such as SEQ ID No.1, is shown. The aim of the present invention is to provide a diagnostic molecular marker of atherosclerotic renal artery stenosis, RP11 387H17.6, for atherosclerotic renal artery stenosis, and to find highly sensitive and highly specific atherosclerotic kidneys for atherosclerotic renal artery stenosis. It is of great significance to diagnose molecular markers of arterial stenosis and develop corresponding diagnostic reagents or kits.

【技术实现步骤摘要】
动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用
本专利技术涉及分子生物医疗
，具体涉及动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用。
技术介绍
长链非编码RNA(LncRNA)是真核细胞中一类转录本长度超过200nt的非编码RNA分子，无或很少有蛋白编码功能，在哺乳动物基因组普遍被转录。LncRNA曾经被认为是转录过程中的副产物，不具有生物学功能。目前越来越多的研究证实LncRNA具有复杂的生物学功能,参与了基因组印记、转录控制、转录后调控、蛋白功能调节等信号转导过程中的重要环节，并与人类疾病的发生有密切的关系。LncRNA在细胞质、细胞核、细胞器均有分布，但主要存在细胞核内。哺乳动物全基因组4％-9％最终转录成LncRNA。LncRNA是一类物种内序列进化保守，且组织特异性远强于蛋白质编码RNA的分子。近年来研究表明，LncRNA与动脉粥样硬化密切相关。文献报道ANRIL能够促进血管平滑肌细胞增殖和动脉粥样斑块形成。Leung等发现了一种与血管紧张素II相关的lncRNA(lnc-Ang362)，用siRNA敲除lnc-Ang362可以抑制血管平滑肌细胞的增殖，该机制可能是通过对miRNA-221和miRNA-222的负调控使其生成减少，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖。Wu等发现lncRNA-p21作为抑癌基因p53的转录靶点，可以反馈性地增强p53的转录活性，进而调控血管平滑肌细胞增殖、凋亡和动脉粥样硬化进程，这提示lncRNA-21可能作为动脉粥样硬化和相关心血管疾病的治疗靶点。Chen等发现一个长链非编码单核细胞源性RNAlnc-MC，它可以通过与miR-199a-5p相互作用而调控人单核细胞/巨噬细胞的分化，为研究动脉粥样硬化提供了一条新思路。这些科学发现说明LncRNA的表达水平与动脉粥样硬化密切相关。肾动脉狭窄是多种原因导致的一种肾血管性疾病。肾动脉狭窄主要发病原因包括动脉粥样硬化、纤维肌发育不良和大动脉炎。70％由动脉粥样硬化所致，多见于多种心血管危险因素的老年人，肾动脉狭窄在普通高血压人群中患病率为1-5％，社区筛选结果显示在65岁以上人群中发病率高于7％，而在一些高危人群中患病率可达40％以上，且常合并外周血管疾病或冠状动脉疾病。肾动脉狭窄是引起继发性高血压、缺血性肾病和(或)肾功能不全的重要原因之一。肾动脉狭窄的患者若肾脏血流灌注不能得到及时恢复，肾实质将会发生不可逆的损害。如果未予以适当治疗，病情往往进入终末期肾病。肾动脉狭窄发病隐匿，临床表现不典型。目前用于诊断肾动脉狭窄方法包括多普勒超声、计算机体层摄影血管造影(CTA)和肾动脉造影等方法。双侧肾动脉多普勒超声容易受主观经验、肠内积气等因素干扰。CTA由于需要使用含碘对比剂，在肾功能受损的患者中应用受限。肾动脉造影对患者来说价格昂贵，增加患者经济负担，并且术中应用对比剂，在肾功能受损的患者中谨慎应用。目前尚无资料显示在肾动脉狭窄患者中有特异性标记物，因此寻找能用于诊断肾动脉狭窄的标记物具有广阔的市场前景。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对目前临床上，动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的检测缺乏高灵敏度和高特异性的诊断指标，由此提供了动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物RP11-387H17.6。本发现对寻找高灵敏度和高特异性的动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物，并研制相应的辅助诊断试剂或试剂盒，具有重大意义。本专利技术的第二个目的是提供所述的动脉粥样硬化性肾动脉狭窄临床诊断分子标记物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂或试剂盒中的应用。为实现上述目的，专利申请人采用LncPathTM表达谱芯片技术初步筛选出动脉粥样硬化肾动脉狭窄组和非肾动脉狭窄组差异表达LncRNAs，并在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄组和非肾动脉狭窄组外周血中验证，经PCR方法检测发现，与非肾动脉狭窄组外周血白细胞比较，动脉粥样硬化性肾动脉狭窄患者中LncPR11-387H17.6表达水平显著升高，差异具有统计学意义。动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物RP11-387H17.6所述的分子标记物在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄为高表达。所述长链非编码RNAPR11-387H17.6的核酸序列如SEQIDNo.1所示：Cccaagggctttggaactgcgggattgggacacgtgacttccctggtcattcaccttgaagtggacacgggctggggtgagagaggggaaactgccccatcttctcatcttagaaccatgcagcgttaatgctggaagggaccttggagtcgattccaaccccgtgaactgggccagggaaggaagtgccttgcccaaggtcatgagagggcatttcatcatgttgcccaggctgatctcaaactcctgggcttgtgtccgaaactggtgagtgcttggtctcactgacttcaagaaggaagccgcggaccctcgcagtgagtgttacagctcttaaggtggtgcatctggagtttgttccttctgatgttcagatgtgttcgcagtttcttccttctggtgggttcgtggtctcgctggctgaggagtgaagctgcagaccttcgcggtgagtgttatagctcttaaggcagcgcggccggagttgttcattcctcccggtgggctcgtggtcttagtggcttcaggagtgaagctgcagaccttcgtggtgagtgttacagctcataaaagcagtgtggacccaaaaagcgagcagtagcaagatttatcgcaaacagcaaaagaacaaagctgccatattgtggatggggacctgtgcccgttgccactgctggctcgggcagcctgcttttattctcttatctggccccacccacatcctgctgattggtagagccgagtggtctgttttgacagggcgctgattggtgcgtttacaatc所述的分子标记物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄试剂或试剂盒的用途，所述的诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄试剂盒，所述的试剂盒用于检测RP11-387H17.6的基因表达水平的寡聚核苷酸片段。所述试剂盒包括扩增LncRNAs标记物LncPR11-387H17.6的引物，所述扩增LncPR11-387H17.6所使用的特异性引物对包括上游引物和下游引物，其中上游引物序列为SEQIDNo.2(5’-CGCAAACAGCAAAAGAACAA-3’)，下游引物序列为SEQIDNo.3(5’-GGCTCTACCAATCAGCAGGA-3’)。LncPR11-387H17.6的检测方法为荧光定量PCR法。优选的，所述试剂盒的组分包括：1)血液中总RNA提取试剂：Trizol、氯仿、异丙醇和75％乙醇等。2)反转录试剂：5XgDNAEraserBuffer,gDNAEraser,totalRNA,RNaseFreedH2O。3)定量PCR试剂：PCR缓冲液、SYBRGreen荧光染料、dNTPs组成的SYBRGreen聚合酶链本文档来自技高网...

【技术保护点】
动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用，其特征在于，所述分子标记物为PR11‑387H17.6，其核酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用，其特征在于，所述分子标记物为PR11-387H17.6，其核酸序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断分子标记物的应用，其特征在于，所述的分子标记物RP11-387H17.6在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄为高表达。3.一种分子标记物RP11-387H17.6在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄试剂或试剂盒的用途，所述的试剂盒用于检测RP11-387H17.6的基因表达水平的寡聚核苷酸片段。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括扩增LncRNAs标记物LncPR11-387H17.6的引物，所述扩增LncPR11-387H17.6所使用的特异性引物对包括上游引物和下游引物，其中上游引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王效增，傅文霞，张效林，张权宇，
申请(专利权)人：中国人民解放军沈阳军区总医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21