一种预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断组合物和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断组合物。本发明专利技术发现circRNAs可以用于预测不同类型冠心病是否会发生阿司匹林抵抗，可以在PCI术前早期评估不同类型冠心病患者发生阿司匹林抵抗的风险，作为是否进行PCI术的参考依据或尽早做好PCI术后出现阿司匹林抵抗的应急预案。

A genetic diagnostic kit and kit for predicting aspirin resistance in patients with unstable angina pectoris

The invention discloses a gene diagnosis composition for predicting aspirin resistance in patients with unstable angina pectoris. This invention has found that circRNAs can be used to predict the occurrence of aspirin resistance in different types of coronary heart disease. It is possible to assess the risk of aspirin resistance in patients with different types of coronary heart disease early before PCI, as a reference for whether or not to do PCI, or to do an emergency plan for the emergence of aspirin resistance as soon as possible after PCI.

【技术实现步骤摘要】
一种预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断组合物和试剂盒
本专利技术属于生物领域，具体涉及不同类型冠心病患者出现抗血小板药物抵抗的预测。
技术介绍
血小板活化和聚集参与了冠心病的整个发展过程，阿司匹林、氯吡格雷为基础的抗血小板治疗是冠心病介入治疗术后药物治疗的基石。PCI术后给予阿司匹林、氯吡格雷能够延迟血管内皮化，延迟再狭窄和血栓形成过程，能显著降低心血管不良事件，尤其是支架内血栓发生的风险。临床证据表明，对于不同类型冠心病患者行PCI治疗后抗血小板治疗可以明显降低不良心血管事件的发生，降低出血风险。近年来研究发现，患者对抗血小板药物的反应存在个体差异，低反应的患者发生血栓事件的风险更高。现有研究表明，冠心病患者中有5％-45％对阿司匹林抵抗，而对氯吡格雷抵抗的患者亦有5％-30％。阿司匹林抵抗的的患者中有47％对氯吡格雷亦呈现抵抗，对两者均抵抗的患者约有10％。这部分患者更易发生血栓事件。抗血小板药物抵抗一方面是指通过血小板功能检测发现其不能抑制血小板聚集，即生物化学抵抗；另一方面是指摄入治疗量的抗血小板药物后仍有心血管事件的发生，即临床治疗失败或临床抵抗。临床证据表明，不同类型冠心病患者行PCI术后使用阿司匹林、氯吡格雷为基础的抗血小板治疗出现抵抗的比例存在明显差异。这表明，对于冠心病患者出现阿司匹林、氯吡格雷抵抗的诊断预测应该对冠心病类型进行区分。基于病理生理机制和临床特征，将冠心病分为稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛和心肌梗死，其中，心肌梗死又分为ST段抬高心肌梗死和非ST段抬高心肌梗死。冠状动脉造影是诊断冠心病的“金标准”，被广泛应用于冠心病的诊断中。冠状动脉造影可清楚地显影左、右冠状动脉及其主要分支，显现各支动脉狭窄性病变部位，并预测疾病严重程度。心电图ST-T段改变，即ST下斜型或水平型压低≥0.05mV，以及T波低平和倒置，一直以来被当作冠状动脉粥样硬化及狭窄引起的冠状动脉供血不足的典型心电图表现，并且由于其具有无创、简便、重复性好等优点，其在冠心病的诊断中应用广泛。也就是说，依靠冠状动脉造影和心电图这两种金标准方法，即可将冠心病分为稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛、ST段抬高心肌梗死和非ST段抬高心肌梗死，准确可靠。目前，尚没有可靠的方法预测不同类型的冠心病患者是否会发生氯吡格雷或阿司匹林抵抗。但是，一旦发生氯吡格雷或阿司匹林抵抗，就会导致PCI术治疗后不良心血管事件的发生，出血风险大大增加，甚至危及患者生命。环状RNA(circularRNA，CircRNA)是一类具有特殊未知功能的RNA，而且是客观大量存在，由前体RNA通过剪切，然后由线性RNA的头对尾连接形成。研究表明，在生物体内大量存在环状RNA，环状RNA由于形成闭合的环，不受RNA外切酶影响，不易降解，在生物体内非常的稳定，使得环状RNA在作为新型临床诊断标记物的应用上具有明显优势。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术不足，提供一种预测不同类型冠心病患者(稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛、ST段抬高心肌梗死和非ST段抬高心肌梗死)出现阿司匹林抵抗的circRNAs诊断组合物及预测方法，以在PCI术前早期评估不同类型冠心病患者发生阿司匹林抵抗的风险，作为是否进行PCI术的参考依据或尽早做好PCI术后出现阿司匹林抵抗的应急预案。上述目的通过如下技术方案实现：第一部分：预测稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断组合物一种用于预测稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的circRNAs组合物，该组合物包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0067415和hsa_circ_0067353。进一步地，所述的circRNAs组合物还包括内参GAPDH。一种用于预测稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断试剂盒，包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0067415和hsa_circ_0067353的实时荧光定量PCR引物。进一步地，hsa_circ_0133159的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.3所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.4所示；hsa_circ_0067415的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.5所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.6所示；hsa_circ_0067353的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.7所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.8所示。进一步地，还包括内参GAPDH的实时荧光定量PCR引物。进一步地，GAPDH的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.1所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.2所示。进一步地，还包括实时荧光定量PCR所需要的酶和试剂。一种用于预测稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的方法，包括：首先，收集稳定性心绞痛患者的外周静脉血，分离出血浆样本；然后提取血浆中总RNA，以GAPDH为内参，采用实时荧光定量PCR测定血浆样本中hsa_circ_0133159、hsa_circ_0067415和hsa_circ_0067353的相对表达量，并代入方程Y＝-0.118+6.655×hsa_circ_0133159相对表达量+7.193×hsa_circ_0067415相对表达量+6.279×hsa_circ_0067353相对表达量计算得到Y值；最后将该Y值与诊断阈值2.304比较，大于2.304的预测为存在阿司匹林抵抗，小于2.304的预测为不存在阿司匹林抵抗。第二部分：预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断组合物一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的circRNAs组合物，该组合物包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0047850和hsa_circ_0031910。进一步地，所述的circRNAs组合物还包括内参GAPDH。一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断试剂盒，包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0047850和hsa_circ_0031910的实时荧光定量PCR引物。进一步地，hsa_circ_0133159的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.3所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.4所示；hsa_circ_0047850的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.9所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.10所示；hsa_circ_0031910的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.11所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.12所示。进一步地，所述的基因诊断试剂盒还包括内参GAPDH的实时荧光定量PCR引物。进一步地，GAPDH的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.1所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.2所示。进一步地，还包括实时荧光定量PCR所需要的酶和试剂。一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的方法，包括：首先，收集不稳定性心绞痛患者的外周静脉血，分离出血浆样本；然后提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的circRNAs组合物，其特征在于：该组合物包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0047850和hsa_circ_0031910。

【技术特征摘要】
1.一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的circRNAs组合物，其特征在于：该组合物包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0047850和hsa_circ_0031910。2.根据权利要求1所述的circRNAs组合物，其特征在于：还包括内参GAPDH。3.一种用于预测不稳定性心绞痛患者出现阿司匹林抵抗的基因诊断试剂盒，其特征在于：包括hsa_circ_0133159、hsa_circ_0047850和hsa_circ_0031910的实时荧光定量PCR引物。4.根据权利要求3所述的基因诊断试剂盒，其特征在于：hsa_circ_0133159的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.3所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.4所示；hsa_circ_0047850的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.9所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.10所示；hsa_circ_0031910的实时荧光定量PCR上游引物如SequenceNO.11所示，其实时荧光定量PCR下游引物如SequenceNO.12所示。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：周林飞，姜振东，董杏林，
申请(专利权)人：周林飞，
类型：发明
国别省市：湖南,43