一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于水产遗传分类技术领域，具体地说，对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒。所述的试剂盒包括taq酶预混液、蒸馏水、引物，所述的引物包括试剂1、试剂2和试剂3，试剂1、试剂2和试剂3为分别含有4种长度不同的SSR引物的混合试剂，使用该试剂盒进行分类操作简便，将数种产物长度不同的SSR进行混合，极大的减少了操作过程中的工作量，更为准确，使用SSR分子标记，分类快速，最快可在2小时内分类一批个体。

A fast of Spinibarbus hollandi kit for classification of different groups

The invention belongs to the technical field of aquatic genetic classification, specifically, kit for classification of Spinibarbus hollandi in different groups. The kit comprises a Taq enzyme pre mixed liquid, distilled water, primer, primer comprises a reagent 1, reagent 2, reagent 3, reagent 1, reagent 2 and 3 reagent mixed reagent respectively containing 4 SSR primers of different lengths, the classification of simple operation using the kit, the number of the products of different lengths of SSR are mixed, greatly reducing the workload in the process of operation, more accurate, the use of SSR molecular markers, the fastest fast classification, classification of a group of individuals in 2 hours.

【技术实现步骤摘要】
一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒
本专利技术属于水产遗传分类
，具体地说，对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒。
技术介绍
光倒刺鲃（Spinibarbushollandi）属鲤形目，鲤科，鲃亚科，倒刺鲃属。具有个体大、生长快、食性广、耐低氧、抗病力强、易养殖等优点。分布于长江、钱塘江、闽江、九龙江、珠江、元江、台湾岛及海南岛等诸水系。不同流域的光倒刺鲃长相相似，通过形态学分辨不同流域的光倒刺鲃较为费力且不准确。此试剂盒使用分子标记的的方法，快速简便的对不同的光倒刺鲃群体进行分类。串联重复序列（SSR）是一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星序列，是一类由几个核苷酸为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。通过电泳可充分显示不同长度重复序列片段的多态性。SSR标记具有以下优点：1.数量丰富，覆盖整个基因组，多态性高；2.具有多等位基因的特性，提供的遗传信息量高；3.以孟德尔方式遗传，呈共显性。在光倒刺鲃的种群分类中引入该方法，并将多条长度不一的SSR产物相组合，以最快最简洁的方法对光倒刺鲃的群体进行鉴定分类。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述问题，提供一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒，有效降低试验的工作量，提高准确度。本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒，所述的试剂盒包括taq酶预混液、蒸馏水、引物，所述的引物包括试剂1、试剂2和试剂3，试剂1、试剂2和试剂3为含有4种SSR引物的混合试剂，试剂1包括产物长度分别为109bp、150bp、202bp、273bp的SSR的引物，引物序列分别为CCTGTGAAATGATTCCATGC，CTTTGACGTAAAACCCCCAA；CGAGAGCATCTTCACTGCTG，TGGTTTAAAATAGACGCGGG；TCCTGTCCTGAAAAGTGCAT，GGTGTCTGTTGAGGCACTGA；AGTTGGGATGTGGCAGTAGG，TGAGTGCTTGTGTGTGAGCA；试剂2包括产物长度分别为104bp、141bp、213bp、278bp的SSR引物，引物序列分别为ATCCGCTTCATCTCCAACAT，GGTGCAGTGAGAGTGTTTGC；CGGGGCAGAACTAAGACAAA，TTTGCAATGTGCAATGTGTTT；TGACGTGGCCAAGTATGGTA，GTTCGAGTCTCGGTACTGGC；AATTCTTCTCCAAGGGCTCC，TCGGTTAGACCAGAGAAAGCA；试剂3包括产物长度分别为114bp、154bp、204bp、248bp的SSR引物，引物序列分别为AACGTGTGTCTCTGGCACTG，ATGCGCAGTTTGTCCTGTAA；GCATTGTTGCTCTGCATGAT，CCTCCTCTTGTGTGTGGGAT；TTTTAGCAACCCCAAAATGC，CGCAGAGTCTCTCTCAACCC；CAGAAGTCTCTGTGTGGCATTT，TAAAAGTGTGAGGCCAGCAA。作为本专利技术的进一步优化方案，引物序列三个均为5’→3’,正向引物在前，反向引物在后。作为本专利技术的进一步优化方案，试剂1、试剂2和试剂3的浓度均为100μM/L，需要稀释十倍用于实验或者-20℃条件下保存。作为本专利技术的进一步优化方案，试剂1、试剂2和试剂3中的引物试剂所需的退火温度为51-62℃。作为本专利技术的进一步优化方案，所述的taq酶预混液购自诺唯赞公司。需要使用试剂1、试剂2和试剂3这三支引物试剂分别对待测个体进行PCR。使用该试剂盒进行PCR时体系为50μl，25μlTaq预混液，13μl蒸馏水，10μl引物试剂，2μl的DNA，容器为200μlEP管。对样品进行短暂离心。放入PCR仪。PCR反应程序设置：94℃预变性2min，94℃变性20s，51℃复性20s，72℃延伸25s，最终延伸4min，第二步到第四步进行27次循环。对PCR产物进行聚丙烯凝胶酰胺电泳，使用质量分数6%-12%浓度的聚丙烯凝胶酰胺，1×TBE作为缓冲液。电泳后，使用扫描仪对凝胶图进行扫描或者拍照，使用PHOTOSHOP的标尺或者尺子对每一条水平线上的PCR产物的条带进行比对和记录，在同一水平线上，有条带的记为1无条带的记为0。最后使用SPSS或者NTsys2.0对上述的记录进行聚类分析，得出结果。由以上步骤可以看出，该试剂盒极大的减少了操作过程中的工作量，操作简便，将数种产物长度不同的SSR进行混合，极大的减少了操作过程中的工作量，PCR反应最快50分钟即可完成，电泳1个小时内完成，因此，该方法最快可在2个小时内对光倒刺鲃不同群体进行鉴定分类。上述的Taq酶预混液购自诺唯赞生物公司。本专利技术的有益效果是：1、使用该试剂盒进行分类操作简便，将数种产物长度不同的SSR进行混合，极大的减少了操作过程中的工作量，更为准确，使用SSR分子标记，分类快速，最快可在2小时内分类一批个体。附图说明图1是对PCR产物进行聚丙烯凝胶酰胺电泳图；图2是构建0,1矩阵示意图，B1表示所有SSR共跑出来的条带总数；C1表示的是材料数，D2缺失数值；图3是聚类分析图；图4是引物详细信息图（序列，长度，退火温度，引物名称等）。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步说明：一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒，所述的试剂盒包括taq酶预混液、蒸馏水、引物，所述的引物包括试剂1、试剂2和试剂3，试剂1、试剂2和试剂3分别为含有4种SSR引物的混合试剂，试剂1包括产物长度分别为109bp、150bp、202bp、273bp的SSR的引物，引物序列分别为（引物序列三个均为5’→3’,正向引物在前，反向引物在后）CCTGTGAAATGATTCCATGC，CTTTGACGTAAAACCCCCAA；CGAGAGCATCTTCACTGCTG，TGGTTTAAAATAGACGCGGG；TCCTGTCCTGAAAAGTGCAT，GGTGTCTGTTGAGGCACTGA；AGTTGGGATGTGGCAGTAGG，TGAGTGCTTGTGTGTGAGCA；试剂2包括产物长度分别为104bp、141bp、213bp、278bp的SSR引物，引物序列分别为ATCCGCTTCATCTCCAACAT，GGTGCAGTGAGAGTGTTTGC；CGGGGCAGAACTAAGACAAA，TTTGCAATGTGCAATGTGTTT；TGACGTGGCCAAGTATGGTA，GTTCGAGTCTCGGTACTGGC；AATTCTTCTCCAAGGGCTCC，TCGGTTAGACCAGAGAAAGCA；试剂3包括产物长度分别为114bp、154bp、204bp、248bp的SSR引物，引物序列分别为AACGTGTGTCTCTGGCACTG，ATGCGCAGTTTGTCCTGTAA；GCATTGTTGCTCTGCATGAT，CCTCCTCTTGTGTGTGGGAT；TTTTAGCAACCCCAAAATGC，CGCAGAGTCTCTCTCAACCC；CAGAAGTCTCTGTGTGGCATTT，TAAAAGTGTGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒，所述的试剂盒包括taq酶预混液、蒸馏水、引物，其特征在于：所述的引物包括试剂1、试剂2和试剂3，试剂1、试剂2和试剂3分别为含有4种SSR引物的混合试剂，试剂1包括产物长度分别为109bp、150bp、202bp、273bp的SSR的引物，引物序列分别为CCTGTGAAATGATTCCATGC，CTTTGACGTAAAACCCCCAA；CGAGAGCATCTTCACTGCTG，TGGTTTAAAATAGACGCGGG；TCCTGTCCTGAAAAGTGCAT，GGTGTCTGTTGAGGCACTGA；AGTTGGGATGTGGCAGTAGG，TGAGTGCTT GTGTGTGAGCA；试剂2包括产物长度分别为104bp、 141bp、213bp、278bp的SSR引物，引物序列分别为ATCCGCTTCATCTCCAACAT，GGTGCAGTGAGAGTGTTTGC；CGGGGCAGAACTAAGACAAA，TTTGCAATGTGCAATGTGTTT；TGACGTGGCCAAGTATGGTA，GTTCGAGTCTCGGTACTGGC；AATTCTTCTCCAAGGGCTCC，TCGGTTAGACCAGAGAAAGCA；试剂3包括产物长度分别为114bp、154bp、204bp、248bp的SSR引物，引物序列分别为AACGTGTGTCTCTGGCACTG，ATGCGCAGTTTGTCCTGTAA；GCATTGTTGCTCTGCATGAT，CCTCCTCTTGTGTGTGGGAT；TTTTAGCAACCCCAAAATGC，CGCAGAGTCTCTCTCAACCC；CAGAAGTCTCTGTGTGGCATTT，TAAAAGTGTGAGGCCAGCAA。...

【技术特征摘要】
1.一种快速对光倒刺鲃不同群体进行分类的试剂盒，所述的试剂盒包括taq酶预混液、蒸馏水、引物，其特征在于：所述的引物包括试剂1、试剂2和试剂3，试剂1、试剂2和试剂3分别为含有4种SSR引物的混合试剂，试剂1包括产物长度分别为109bp、150bp、202bp、273bp的SSR的引物，引物序列分别为CCTGTGAAATGATTCCATGC，CTTTGACGTAAAACCCCCAA；CGAGAGCATCTTCACTGCTG，TGGTTTAAAATAGACGCGGG；TCCTGTCCTGAAAAGTGCAT，GGTGTCTGTTGAGGCACTGA；AGTTGGGATGTGGCAGTAGG，TGAGTGCTTGTGTGTGAGCA；试剂2包括产物长度分别为104bp、141bp、213bp、278bp的SSR引物，引物序列分别为ATCCGCTTCATCTCCAACAT，GGTGCAGTGAGAGTGTTTGC；CGGGGCAGAACTAAGACAAA，TTTGCAATGTGCAATGTGTTT；TGACGTGGCCAAGTATGGTA，GTTCGAGTCTCGGTACTGGC；AATTCTTCTCCAAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒琥，杨扬，岳磊，李强，蓝召军，谷平华，
申请(专利权)人：广州大学，
类型：发明
国别省市：广东,44