The invention discloses a method for extracting peptidyl peptide of spleen Aminopeptide, including the following steps: step one, preparation of reagents, preparing mobile phase A and mobile phase B; step two, step two, sample treatment, adding spleen Aminopeptide into the initial flow phase, obtaining sample solution; step three, gradient elution. The invention has the following advantages and effects: using chromatographic separation to extract peptide from spleen Aminopeptide, when the sample is treated, the samples are filtered with 0.22 mu m organic membrane to remove the macromolecule substance in the sample of spleen Aminopeptide and reduce the interference to the extraction of polypeptide. Secondly, after sampling, gradient elution is carried out, and the flow phase A and B are adjusted by adjusting the flow phase. The ratio of peptides can be eluted at the main chromatographic peaks, which achieves the effect of extracting polypeptide from splenic peptide and good separation and purification effect.
【技术实现步骤摘要】
一种脾氨肽内多肽的提取方法
本专利技术涉及生物制品领域,特别涉及一种脾氨肽内多肽的提取方法。
技术介绍
脾氨肽口服冻干粉属于从脏器提取的生化药,主要成分包括氨基酸、多肽、核苷酸等物质,作为免疫体调节剂,用于反复呼吸道感染、支气管炎、哮喘、肺炎、癌症等病症的辅助治疗。临床观察显示,能够有效提高患者的抵抗力,减少呼吸道感染的发生率,并具有调节细胞免疫的功能,脾氨肽中主要的活性物质为多肽,国家药品标准WS1-(X-002)-2002Z中,测定多肽的含量是控制脾氨肽产品含量的唯一指标,将脾氨肽内的多肽分离纯化后,对于研究脾氨肽作为免疫调节剂的作用机制,以及将分离的多肽作为冻干粉制剂以显著提高药品的活力,都具有显著的作用和意义,因此,有必要提出一种脾氨肽内多肽的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种脾氨肽内多肽的提取方法,具有分离脾氨肽内多肽的效果。本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:一种脾氨肽内多肽的提取方法,包括以下步骤,步骤一,试剂配制,配制流动相A、流动相B,流动相A内溶剂为水、溶质为质量百分比浓度为0.1的甲酸,流动相B内溶剂为乙腈、溶质包括质量百分比浓度为0.1%的甲酸和0.05%的己二酸;步骤二,样品处理,将脾氨肽加入到起始流动相中,得到样品溶液;步骤三,分离纯化,色谱条件,色谱柱填料为多孔硅胶,填料颗粒直径为5μm,色谱柱内径2.1mm,柱长75mm,柱温40℃,梯度洗脱0min-5min-14min-18min-24.5min-30min,流动相B5%-12%-17%-17.5%-30%-50%;流速为0.5mL/min ...
【技术保护点】
一种脾氨肽内多肽的提取方法,其特征在于:包括以下步骤步骤一,试剂配制,配制流动相A、流动相B,流动相A内溶剂为水、溶质为质量百分比浓度为0.1的甲酸,流动相B内溶剂为乙腈、溶质包括质量百分比浓度为0.1%的甲酸和0.05%的己二酸;步骤二,样品处理,将脾氨肽加入到起始流动相中,得到样品溶液;步骤三,分离纯化,色谱条件,色谱柱填料为多孔硅胶,填料颗粒直径为5μm,色谱柱内径2.1mm,柱长75mm,柱温40℃,梯度洗脱0min‑5min‑14min‑18min‑24.5min‑30min,流动相B 5%‑12%‑17%‑17.5%‑30%‑50%;流速为0.5mL/min,进样体积为20μL,检测波长214nm,收集主要色谱峰。
【技术特征摘要】
1.一种脾氨肽内多肽的提取方法,其特征在于:包括以下步骤步骤一,试剂配制,配制流动相A、流动相B,流动相A内溶剂为水、溶质为质量百分比浓度为0.1的甲酸,流动相B内溶剂为乙腈、溶质包括质量百分比浓度为0.1%的甲酸和0.05%的己二酸;步骤二,样品处理,将脾氨肽加入到起始流动相中,得到样品溶液;步骤三,分离纯化,色谱条件,色谱柱填料为多孔硅胶,填料颗粒直径为5μm,色谱柱内径2.1mm,柱长75mm,柱温40℃,梯度洗脱0min-5min-14min-18min-24.5min-30min,流动相B5%-12%-17%-17.5%-30%-50%;流速为0.5mL/min,进样体积为20μL,检测波长214nm,收集主要色谱峰。2.根据权利要求1所述的一种脾氨肽内多肽的提取方法,其特征在于:步骤二,样品处理,取脾氨肽原液离心,离心条件为:12000rpm、10min、4℃,离心后取上清液,加入到...
【专利技术属性】
技术研发人员:李起竖,蒋舒,张卫青,陈晓俊,徐锋,
申请(专利权)人:浙江丰安生物制药有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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