用于体内核酸表达的系统和方法技术方案

本发明专利技术提供用于在受试者中产生一种或多种蛋白质和/或生物活性核酸分子的表达(例如，在治疗水平下持续产生治疗作用所需的延长的时间段)的组合物、系统、试剂盒以及方法。在某些实施方案中，提供了系统和试剂盒，所述系统和试剂盒包括第一组合物，所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构；以及第二组合物，所述第二组合物包含治疗有效量的不含CpG或CpG减少的表达载体(例如，不与脂质体缔合的非病毒表达载体)，其中所述表达载体包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)一种或多种第一治疗性蛋白，和/或ii)一种或多种第一生物活性核酸分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于体内核酸表达的系统和方法本申请要求2015年9月18日提交的美国临时申请序列号62/220,646的优先权，所述申请以引用的方式并入本文。
本专利技术提供用于在受试者、人或非人哺乳动物中表达一种或多种蛋白质或生物活性核酸分子(例如，在治疗水平下持续产生治疗作用所需的延长的时间段)的组合物、系统、试剂盒以及方法。在某些实施方案中，提供了系统和试剂盒，所述系统和试剂盒包括第一组合物，所述第一组合物包含聚阳离子结构(例如，空阳离子脂质体、阳离子胶束、阳离子乳液或阳离子聚合物)；以及第二组合物，所述第二组合物包含不含CpG或CpG减少的表达载体(例如，不与脂质体或其他载体缔合的非病毒表达载体)，所述表达载体包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)一种或多种第一治疗性蛋白，和/或ii)一种或多种第一生物活性核酸分子。在其他实施方案中，此类第一和第二组合物被顺序地(例如全身性地)施用至受试者，以使得所述治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子在所述受试者中表达(例如，在治疗水平下持续至少5天或至少50天，以使得治疗疾病或病状或改变生理或疾病性状)。技术背景最简单的非病毒基因递送系统使用裸表达载体DNA。将游离DNA直接注射到某些组织(特别是肌肉)中已经显示产生高水平的基因表达，并且这种方法的简单性已使得其在许多临床方案中采用。具体地说，这种方法已经应用于癌症的基因疗法，其中DNA可直接注射到肿瘤中，或者可注射到肌细胞中以便表达可充当癌症疫苗的肿瘤抗原。尽管质粒DNA的直接注射已显示产生基因表达，但总体表达水平远低于用病毒或脂质体载体。由于存在血清核酸酶，裸DNA通常也被认为不适于全身施用。结果，质粒DNA的直接注射似乎仅限于涉及直接注射容易地进入的组织如皮肤和肌细胞的一些应用。
技术实现思路
本专利技术提供了用于在受试者中表达一种或多种蛋白质和/或生物活性核酸分子(例如，在治疗水平下持续在宿主中产生治疗作用所需的延长的时间段)的组合物、系统、试剂盒以及方法。在某些实施方案中，提供了系统和试剂盒，所述系统和试剂盒包括第一组合物，所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构(例如，空阳离子脂质体、空阳离子胶束或空阳离子乳液)；以及第二组合物，所述第二组合物包含治疗有效量的不含CpG或CpG减少的表达载体(例如，不与脂质体缔合的非病毒表达载体)，其中所述表达载体包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)第一治疗性蛋白(或非治疗性蛋白，如标记蛋白)，和/或ii)第一生物活性核酸分子。在某些实施方案中，所述表达载体包含编码第二、第三和/或第四治疗性或非治疗性蛋白和/或第二、第三或第四生物活性核酸分子的第二、第三或第四核酸序列。在一些实施方案中，所述第一核酸序列进一步编码第二、第三、第四、第五和/或第六治疗性蛋白和/或第二、第三、第四、第五和/或第六生物活性核酸分子。在其他实施方案中，此类第一和第二组合物被顺序地(例如全身性地)施用至受试者，以使得所述治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子在所述受试者中表达(例如，在治疗水平下，持续至少5天或至少50天，或至少100...200...或至少400天，以使得治疗疾病或病状或改变生理性状)。在一些实施方案中，本文提供在受试者(例如人或非人哺乳动物)中表达第一治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子的方法，所述方法包括：a)向受试者施用(例如全身性地)第一组合物，其中所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构(例如，空阳离子脂质体、空阳离子胶束或空阳离子乳液)，并且其中所述第一组合物不含或基本上不含核酸分子(例如，核酸在所述组合物中不可检测或几乎不可检测)；以及b)向所述受试者施用(例如全身性地、血管内等)第二组合物(例如，在施用所述第一组合物的约2...10...50...100...200...300...400分钟内开始)，其中所述第二组合物包含一定量的表达载体(例如，不与脂质体或任何其他载体缔合的非病毒表达载体)，其中所述表达载体是不含CpG或CpG减少的，其中所述表达载体中的每种包含核酸序列，所述核酸序列编码：i)第一、第二、第三、第四、第五和/或第六治疗性蛋白或非治疗性蛋白，和/或ii)第一、第二、第三、第四、第五和/或第六生物活性核酸分子。在某些实施方案中，作为施用所述第一组合物和施用所述第二组合物的结果，所述第一治疗性或非治疗性蛋白和/或所述生物活性核酸分子在所述受试者中表达(例如，在关于疾病或病状的治疗水平下，持续至少5...50...100...300天...400天或更长时间，或者在足以改变生理或疾病性状的有效水平下)。在某些实施方案中，存在于所述第一组合物中的聚阳离子结构(例如，空脂质体)具有约20-85nm(例如20...25...30...40...45...50...55...60...65...70...75...80...85nm)的z-平均直径。在某些实施方案中，所述聚阳离子结构是具有约72-76nm的z-平均直径的空脂质体，并且是小单层囊泡。在一些实施方案中，本文提供在受试者中表达第一治疗性或非治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子的方法，所述方法包括：a)向受试者施用第一组合物，其中所述受试者具有疾病或病状的至少一种症状，或至少具有待改变的生理性状，其中所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构(例如，空阳离子脂质体、空阳离子胶束或空阳离子乳液)，并且其中所述第一组合物不含或基本上不含核酸分子；以及b)在施用所述第一组合物的约100分钟或约200...或400分钟内向所述受试者施用(或开始施用)第二组合物，其中所述第二组合物包含治疗有效量的表达载体，其中所述表达载体是不含CpG或CpG减少的，其中所述表达载体各自包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)第一治疗性或非治疗性蛋白，和/或ii)第一生物活性核酸分子；c)向所述受试者施用地塞米松棕榈酸酯和/或中性脂质，所述地塞米松棕榈酸酯和/或中性脂质在所述第一和/或第二组合物中或存在于第三组合物中(例如，在施用所述第一或第二组合物的100或200...或400分钟内)。在一些实施方案中，作为施用所述第一组合物、施用所述第二组合物和施用地塞米松棕榈酸酯和/或中性脂质的结果，所述第一治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子在所述受试者中在关于所述疾病或病状的治疗水平下或在足以改变所述生理或疾病性状的有效水平下表达。在某些实施方案中，地塞米松棕榈酸酯是在所述第一组合物中，并且其中2.0％至6.0％(例如2.0％...2.5％...3.0％)的所述第一组合物的包含地塞米松棕榈酸酯。在某些实施方案中，地塞米松棕榈酸酯在所述第三组合物中施用，其在施用所述第一和/或第二组合物之前施用，或在所述第一和/或第二组合物之后施用，但在其100...400分钟内施用。在某些实施方案中，所述方法还包括d)向所述受试者施用地塞米松，所述地塞米松在所述第一和/或第二和/或第三组合物中，或存在于第四组合物中(例如，在施用所述第一或第二或第三组合物的100或300分钟内开始，如在所述施用中的任一者之前或在其他施用之后)。在某些实施方案中，存在于所述第一组合物中的聚阳离子结构(例如，空脂质体)具有约20-85nm(例如20...25...30...40...45本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在受试者中表达第一治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子的方法，所述方法包括：a)向受试者施用第一组合物，其中所述受试者具有疾病或病状的至少一种症状或至少具有待改变的生理性状，其中所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构，并且其中所述第一组合物不含或基本上不含核酸分子；以及b)在施用所述第一组合物的约300分钟内向所述受试者施用第二组合物，其中所述第二组合物包含治疗有效量的表达载体，其中所述表达载体是不含CpG或CpG减少的，其中所述表达载体各自包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)第一治疗性蛋白，和/或ii)第一生物活性核酸分子，其中所述第一量的所述聚阳离子结构与所述治疗有效量的表达载体的比例是5∶1至25∶1，并且其中，作为所述施用所述第一组合物和所述施用所述第二组合物的结果，所述第一治疗性蛋白和/或所述生物活性核酸分子在所述受试者中在关于所述疾病或病状的治疗水平下或在足以改变所述生理或疾病性状的有效水平下表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.18 US 62/220,6461.一种在受试者中表达第一治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子的方法，所述方法包括：a)向受试者施用第一组合物，其中所述受试者具有疾病或病状的至少一种症状或至少具有待改变的生理性状，其中所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构，并且其中所述第一组合物不含或基本上不含核酸分子；以及b)在施用所述第一组合物的约300分钟内向所述受试者施用第二组合物，其中所述第二组合物包含治疗有效量的表达载体，其中所述表达载体是不含CpG或CpG减少的，其中所述表达载体各自包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)第一治疗性蛋白，和/或ii)第一生物活性核酸分子，其中所述第一量的所述聚阳离子结构与所述治疗有效量的表达载体的比例是5∶1至25∶1，并且其中，作为所述施用所述第一组合物和所述施用所述第二组合物的结果，所述第一治疗性蛋白和/或所述生物活性核酸分子在所述受试者中在关于所述疾病或病状的治疗水平下或在足以改变所述生理或疾病性状的有效水平下表达。2.如权利要求1所述的方法，其中所述聚阳离子结构包含空脂质体。3.如权利要求2所述的方法，其中存在于所述第一组合物中的所述空脂质体具有约20-85nm的z-平均直径。4.如权利要求1所述的方法，其中：A)所述比例是10∶1至18∶1；B)2.0％至6.0％的所述第一组合物包含地塞米松或地塞米松棕榈酸酯；和/或C)所述表达载体中的每种各自仅包含单一表达盒，其中所述表达盒包含编码所述第一治疗性蛋白的所述第一核酸序列和编码第二治疗性蛋白的第二核酸序列。5.如权利要求1所述的方法，其还包括施用药剂或含有表达盒的另外的调控表达载体，所述药剂或另外的调控表达载体在所述第一和/或第二组合物中或存在于第三组合物中，其中与不向所述受试者施用所述药物剂时相比，所述药剂增加或减少在所述治疗或有效水平下的所述表达和/或在所述治疗或有效水平下的所述表达的时间长度。6.如权利要求5所述的方法，其中所述药剂选自秋水仙碱、地塞米松、地塞米松棕榈酸酯、中性脂质、丙戊酸、茶碱、西地那非、氨来呫诺、氯喹、SAHA以及L-精氨酸+西地那非。7.如权利要求1所述的方法，其中所述表达载体各自还包含调控核酸序列，其中所述调控核酸序列减少在不存在所述调控核酸序列的情况下将发生的所述第一核酸序列的表达的持续时间。8.如权利要求7所述的方法，其中所述调控核酸序列选自由以下各项组成的组：启动子、增强子、编码第二蛋白质的第二核酸序列和/或第二生物活性核酸分子。9.如权利要求1所述的方法，其中所述第一组合物中的所述第一量的聚阳离子结构包含阳离子脂质和中性脂质的混合物，与在所述方法中仅采用所述阳离子脂质时所述第一治疗性蛋白和/或第一生物活性核酸分子的表达相比，所述混合物降低这种表达。10.如权利要求1所述的方法，其中所述治疗性蛋白以高于1μg/ml的水平表达，并且其中所述治疗性蛋白在所述受试者中以所述水平表达至少连续7天。11.如权利要求1所述的方法，其中所述第一核酸序列编码所述治疗性蛋白，并且其中所述治疗性蛋白选自由以下各项组成的组：人G-CSF、利妥昔单抗和人因子IX。12.一种在受试者中表达第一治疗性蛋白和/或生物活性核酸分子的方法，所述方法包括：a)向受试者施用第一组合物，其中所述受试者具有疾病或病状的至少一种症状或至少具有待改变的生理性状，其中所述第一组合物包含第一量的聚阳离子结构，并且其中所述第一组合物不含或基本上不含核酸分子；以及b)在施用所述第一组合物的约300分钟内向所述受试者施用第二组合物，其中所述第二组合物包含治疗有效量的表达载体，其中所述表达载体是不含CpG或CpG减少的，其中所述表达载体各自包含第一核酸序列，所述第一核酸序列编码：i)第一治疗性蛋白，和/或ii)第一生物活性核酸分子，c)向所述受试者施用地塞米松棕榈酸酯和/或中性脂质，所述地塞米松棕榈酸酯和/或中性脂质在所...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·J·德布斯，T·D·海斯，C·汉德姆龙古尔，
申请(专利权)人：DNARX公司，
类型：发明
国别省市：美国,US