利拉利汀的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术提供一种利拉利汀的高效液相色谱检测方法及定量检测方法，其色谱条件如下：色谱柱采用反相C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为甲酸‑醋酸铵的水溶液，水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，水溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；流动相B为甲酸‑醋酸铵的乙腈，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，乙腈溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；采用梯度洗脱。本发明专利技术的方法，具有操作简单、分离效果好且精密度和准确度高的特点，能实现对利拉利汀及其有关物质的良好分离，呈良好的线性关系，并且重现性高，可用于精准测定利拉利汀的含量，同时用于其原料及制剂的质量优化和有关物质检测，有助于其后期的原料优化、药代动力学定量考察以及制剂质量研究。

High performance liquid chromatography for the determination of L - L

The present invention provides a high performance liquid chromatography method for the detection and quantitative detection of rrrl. The chromatographic conditions are as follows: the chromatographic column uses a reverse phase C18 column; the mobile phase includes the mobile phase A and the mobile phase B; the mobile phase A is the aqueous solution of ammonium acetate of formic acid, the volume concentration of formic acid in the aqueous solution is 0.01 to 0.05%, and the aqueous solution is in the aqueous solution. The concentration of ammonium acetate is 0.5 to 1.5mM, the mobile phase B is acetonitrile, the volume concentration of formic acid in acetonitrile solution is 0.01 ~ 0.05%, the concentration of ammonium acetate in acetonitrile solution is 0.5 ~ 1.5mM, and the gradient elution is used. The method of the invention has the characteristics of simple operation, good separation effect, high precision and high precision. It can achieve a good separation of L and its related substances, has a good linear relationship and high reproducibility. It can be used to accurately determine the content of L - L - L, and to optimize the quality of its raw materials and preparations. The detection of related substances will help to optimize the raw materials, quantitative pharmacokinetics and quality research of the preparations.

【技术实现步骤摘要】
利拉利汀的高效液相色谱检测方法
本专利技术涉及药物分析
，具体涉及一种利拉利汀的高效液相检测方法。
技术介绍
糖尿病是一种常见的慢性病，据国际糖尿病联合会(IDF)预测，2011年全世界糖尿病患病率约为8.3％(约3.66亿患者)，预计到2030年，糖尿病患病人数将升至5.52亿，其中以2型糖尿病最为常见。利拉利汀(Linagliptin)，是德国勃林格殷格翰制药公司开发的口服降糖药物，于2011年5月2日经美国FDA批准上市，商品名为Tradjenta。本品为片剂，与饮食和锻炼结合用于改善2型糖尿病患者的血糖控制能力。利拉利汀即可单独单独服用，也可与其它现有药物联合使用，如与二甲双胍(metformin)，格列美脲(glimepiride)和吡格列酮(pioglitazone)等合用。目前尚未有利拉利汀与胰岛素联合使用的研究报道。利拉利汀不能用于1型糖尿病患者或血中/尿中酮体升高(糖尿病酮酸症)的患者。在约3800名2型糖尿病患者参与的8项双盲临床试验中，利拉利汀的安全性和有效性得到证实。其主要不良反应包括：上呼吸道感染、流鼻涕、喉咙痛、肌肉疼和头痛等[BochringreIngelheimIntemationalGMBH&Co.KG.Phar-maceuticalcompasition,pharmaceuticaldosageform,processfortheirpreparationandusesthereof:US,2010/0209506AI[P].2010-02-11.]。虽然利拉利汀已经被美国FDA批准上市，但是它还是有一些不良反应，从而在服药时需要降低剂量以限制毒性进一步提高患者的耐受性，使靶向投药达到最大，这必然要求利拉利汀检测方法的定量检测限相对较低。本专利技术针对现有技术中高效液相定量手段进行了改进与优化，与现有技术中的方法相比，本专利技术的检测方法用于检测利拉利汀不仅分离效果好，精密度和准确度高，而且操作安全简易，处理方便快捷，适合高通量筛选及精准定量。该方法对利拉利汀的原料、制剂质量研究以及相关药动学定量研究等方面均具有重要研究价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种利拉利汀的高效液相色谱检测方法，其用于利拉利汀的含量检测具有定量检测限低、线性关系好、重复性好的特点。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种利拉利汀的高效液相色谱检测方法，色谱条件如下：色谱柱采用反相C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为甲酸-醋酸铵的水溶液，该水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，水溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；流动相B为甲酸-醋酸铵的乙腈溶液，该乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，乙腈溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0-0.01min，流动相B保持体积百分比为10％；0.01-2.10min,流动相B体积百分比由10％递增至80％；2.10-2.11min，流动相B体积百分比由80％递减至10％；2.11-3.00min，流动相B保持体积百分比为10％。在一个优选的实施例中，流动相A中还加入一定量的乙腈，流动相A中甲酸-醋酸铵的水溶液与乙腈的体积比为100～95：0～5；流动相B还加入一定量的水，流动相B中甲酸-醋酸铵的乙腈溶液与水的体积比为100～95：0～5。在一个优选的实施例中，流动相A是甲酸-醋酸铵的水溶液和乙腈的体积分数为95：5的混合溶液，流动相B是甲酸-醋酸铵的乙腈溶液和水的体积分数为95：5的混合溶液。在一个优选的实施例中，流动相A中，水溶液中甲酸体积浓度为0.02～0.04％，醋酸铵浓度为1.8～1.2mM；流动相B中，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.02～0.04％，醋酸铵浓度为1.8～1.2mM。在一个优选的实施例中，流动相A中，水溶液中甲酸体积浓度为0.025％，醋酸铵浓度为1mM；流动相B中，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.025％，醋酸铵浓度为1mM。在一个优选的实施例中，色谱柱柱长为100mm。在一个优选的实施例中，色谱柱为WatersXBridge色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。在一个优选的实施例中，流速为1.0～2.0ml/min，更优选为1.2～1.6ml/min，更优选为1.4ml/min。在一个优选的实施例中，检测波长为290～298nm，更优选为292～296nm，更优选为294nm。在一个优选的实施例中，柱温控制在35～40℃，更优选为40℃。在一个优选的实施例中，进样量为2～8μl，更优选为3～5μl，。本专利技术的利拉利汀的高效液相色谱检测方法，具有操作简单、分离效果好且精密度和准确度高的特点，能实现对利拉利汀及其有关物质的良好分离，在6.25～200ug/ml范围内呈良好的线性关系，并且重现性高，可用于精准测定利拉利汀的含量，同时用于其原料及制剂的质量优化和有关物质检测，有助于其后期的原料优化、药代动力学定量考察以及制剂质量研究。本专利技术采用了反相高效液相色谱法，通过制备供试液和梯度对照液，并且分别量取供试液及对照溶液，注入色谱仪，记录色谱图，制备线性相关工作曲线，代入供试样品峰面积计算并折干，即完成了利拉利汀含量的测定。具体的，本专利技术提供的精准测定利拉利汀含量的高效液相色谱检测方法的具体操作如下：(1)对照品溶液及供试品溶液的制备：精密称取一定量利拉利汀对照品，用注射用水溶解并定容成具有一定浓度梯度的多个对照品溶液；精密称取适量利拉利汀供试品，用注射用水溶解并定容得到供试品溶液；(2)色谱条件：色谱柱采用反相C18色谱柱；检测器采用DAD检测器；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为甲酸-醋酸铵的水溶液，该水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，水溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；流动相B为甲酸-醋酸铵的乙腈，该乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，乙腈溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0-0.01min，流动相B保持体积百分比为10％；0.01-2.10min,流动相B体积百分比由10％递增至80％；2.10-2.11min，流动相B体积百分比由80％递减至10％；2.11-3.00min，流动相B保持体积百分比为10％；(3)测定方法：将所述多个对照品溶液以及供试品溶液按所述(2)色谱条件依次进样，记录色谱图，根据多个对照品溶液的图谱数据和浓度数据制备线性相关工作曲线，代入供试样品的图谱数据计算并得出供试品溶液浓度，完成了利拉利汀含量的测定。在一个优选的实施例中，对照品溶液的浓度依次为6.25、12.5、25、50、100、200μg/ml。在一个优选的实施例中，流速为1.4ml/min，检测波长为294nm，柱温为40℃，进样量为3～5μl。本专利技术的液相色谱方法，记录时间在3min即可；分离效果好，R值≥1，在优选的条件下R值≥1.5；线性关系好，定量检测限低，可有效检测出浓度低至6.25μg/ml的样品，且重复性好，可用于利拉利汀的精准定量。本专利技术填补了目前利拉利汀含量测试分析方法尚无的空缺，本专利技术可以满足研发和生产的需求，能够有效的对利拉利汀含量进行更为严本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利拉利汀的高效液相色谱检测方法，其特征在于，色谱条件如下：色谱柱采用反相C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为甲酸‑醋酸铵的水溶液，水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，水溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；流动相B为甲酸‑醋酸铵的乙腈溶液，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，乙腈溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0‑0.01min，流动相B保持体积百分比为10％；0.01‑2.10min,流动相B体积百分比由10％递增至80％；2.10‑2.11min，流动相B体积百分比由80％递减至10％；2.11‑3.00min，流动相B保持体积百分比为10％。

【技术特征摘要】
1.一种利拉利汀的高效液相色谱检测方法，其特征在于，色谱条件如下：色谱柱采用反相C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为甲酸-醋酸铵的水溶液，水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，水溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；流动相B为甲酸-醋酸铵的乙腈溶液，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.05％，乙腈溶液中醋酸铵浓度为0.5～1.5mM；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0-0.01min，流动相B保持体积百分比为10％；0.01-2.10min,流动相B体积百分比由10％递增至80％；2.10-2.11min，流动相B体积百分比由80％递减至10％；2.11-3.00min，流动相B保持体积百分比为10％。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中还加入一定量的乙腈，流动相A中甲酸-醋酸铵的水溶液与乙腈的体积比为100～95：0～5；所述流动相B还加入一定量的水，流动相B中甲酸-醋酸铵的乙腈溶液与水的体积比为100～95：0～5。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A是甲酸-醋酸铵的水溶液和乙腈的体积分数为95：5的混合溶液，所述流动相B是甲酸-醋酸铵的乙腈溶液和水的体积分数为95：5的混合溶液。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中，水溶液中甲酸体积浓度为0.02～0.04％，醋酸铵浓度为1.8～1.2mM；所述流动相B中，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.02～0.04％，醋酸铵浓度为1.8～1.2mM。5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中，水溶液中甲酸体积浓度为0.025％，醋酸铵浓度为1mM；所述流动相B中，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.025％，醋酸铵浓度为1mM。6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱长为100mm。7.如权利要求1所述的检测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：王言言，汤城，
申请(专利权)人：上海药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31