The liquid chromatography analysis method for the detection of the content of valproic acid in the blood is to calibrate the standard solution by liquid chromatography analyzer and ultraviolet detector. The standard curve equation is y = a*x+b, and the blood samples are measured. The liquid chromatography analyzer and purple are also used after the treated blood is processed. The external detector tests the sample of the test, obtains the y value of the blood to be measured, and substituting the measured blood y into the standard curve equation. By calculating the concentration of valproic acid in the blood to be detected, this method improves the accuracy of the quantitative results, greatly shortens the analysis time, makes the detection process simple and fast, and the experimental cost is reduced. It is better to monitor the concentration of valproic acid in the patient's body in clinical treatment, and provide an experimental basis for the individualized administration of valproic acid and the reduction of the side effects.
【技术实现步骤摘要】
检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法
本专利技术涉及精神类药物的临床血药浓度监测
,尤其涉及一种检测血液中抗癫痫药物丙戊酸浓度的方法。
技术介绍
丙戊酸钠是传统的广谱抗癫痫药物,对各类型癫痫均有效。其口服后通过胃肠道后,在血液中循环的活性化合物为丙戊酸。丙戊酸(Valproicacid,VPA),分子式为C8H16O2,具体化学结构如图1所示。丙戊酸的有效血药浓度为50-100mg/L,当血药浓度>100mg/L时,毒副作用增强。常见不良反应是胃肠道反应,少数患者出现肝毒性。VPA主要通过神经系统发挥其药理作用,由于VPA治疗窗较窄,体内代谢过程存在较大的个体差异,服药周期长,给药剂量和血药浓度相关性不稳定,而血药浓度与疗效及毒性反应相关,用药剂量不足与药物过量的临床症状相似,所以对其血药浓度的监测是调整剂量,减少不良反应的重要参考,在临床用药中具有重大意义。目前常用的丙戊酸(钠)血药浓度的测定方法众多,各有优缺点,包括荧光偏振免疫分析法、酶放大免疫法、高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱串联质谱法等。荧光偏振免疫分析法灵敏度高,快速简便,但分析成本非常高,易受其他物质干扰。酶放大免疫法自动化程度高,样品用量少,但试剂盒稳定性较差,专属性较差,价格昂贵。液相色谱串联质谱法测定血药浓度具有灵敏度高、专属性强等优点,但成本较高,且对人员和环境的要求较高。高效液相色谱法定量准确,重现性好,且经济效益好,但目前的已知方法仍存在前处理复杂,提取效率低、分析时间较长等问题。
技术实现思路
针对上述技术问题,本专利技术目的是提供一种检测血液中丙戊酸药物浓度的方法 ...
【技术保护点】
一种检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:它包括以下步骤:(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液15μL和285μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液,上述标准溶液分别在转速为1000‑2000rpm下涡旋混匀30s‑1min后,加入含有20‑40%体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL,其中高氯酸溶液的含水量为80‑95%,并在转速为1200‑2000rpm下涡旋混匀2‑4min后,再以10000‑15000rpm的转速下高速离心10‑20min,得到上清液,分别取上述上清液200uL,用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测,得出上述至少三种标准溶液的丙戊酸色谱图,以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积作为标准曲线图的纵坐标y,以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度作为标准曲线图的横坐标x,将以上检测所得至少三组数据进行线性回归,拟合得到标准曲线方程为y=a*x+b,并且得出权重系数a和b;(a)标准工作液的配制:精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶,用含水量为0%‑25%的甲醇溶液进行溶解,并定容于1ml, ...
【技术特征摘要】
1.一种检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:它包括以下步骤:(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液15μL和285μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液,上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后,加入含有20-40%体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL,其中高氯酸溶液的含水量为80-95%,并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀2-4min后,再以10000-15000rpm的转速下高速离心10-20min,得到上清液,分别取上述上清液200uL,用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测,得出上述至少三种标准溶液的丙戊酸色谱图,以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积作为标准曲线图的纵坐标y,以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度作为标准曲线图的横坐标x,将以上检测所得至少三组数据进行线性回归,拟合得到标准曲线方程为y=a*x+b,并且得出权重系数a和b;(a)标准工作液的配制:精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶,用含水量为0%-25%的甲醇溶液进行溶解,并定容于1ml,得到标准储备液A,其丙戊酸的浓度为38658mg/L,将标准储备液A用含水量为10%-40%的甲醇溶液的稀释液进行稀释,分别在含有100-10000μg/mL丙戊酸的范围内配置出各标准工作液,并在-80℃条件下保存;(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml,在离心速度为3500rpm下离心10min,取上清液得血清或血浆,上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用;(三)待测样品处理(b)用移液枪移取步骤(二)的血清或血浆置于1.5ml的离心管中;(c)用移液枪移取含有20-40%体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL加入步骤(b)的离心管中,其中高氯酸溶液的含水量为80-95%,然后以1200-2000rpm的转速下涡旋混合2-4min后,再在10000-15000rpm的转速下高速离心10-20min,得到上清液即...
【专利技术属性】
技术研发人员:贾永娟,王超,邱天袆,倪君君,郑春梅,
申请(专利权)人:北京和合医学诊断技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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