一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，包括裂解结合液、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液，本发明专利技术利用磁珠法对骨骼基因组DNA进行提取，其中裂解结合液能够快速的为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率，另外采用96孔预分装深孔板模式，能够结合全自动核酸提取仪进行全自动DNA提取，与传统的DNA提取方法相比，极大的缩短了提取所需的时间和人力劳动，提高了整体的提取效率。

A magnetic bead method for extracting DNA from bone genome

The present invention provides a magnetic bead method bone genomic DNA extraction kit, including cracking binding fluid, magnetic beads, first rinse liquid, second rinse liquid, third rinse solution and DNA eluent. The present invention uses magnetic bead method to extract DNA from bone genome, in which lysate binding solution can quickly provide stable magnetic beads to DNA with magnetic beads. In the environment, the extraction efficiency is greatly enhanced. In addition, the 96 hole pre loaded deep hole plate model can be used to extract the full automatic DNA with full automatic nucleic acid extraction instrument. Compared with the traditional DNA extraction method, the time and labor labor required are greatly shortened, and the overall extraction efficiency is improved.

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒
本专利技术属于DNA提取
，尤其是涉及一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒。
技术介绍
由于骨骼的特殊组织结构能够减缓DNA降解和污染，因此在其他检材条件不具备的情况下，骨骼DNA的分型检验则更多地被应用于案件鉴定中，但骨骼的结构特殊使其DNA的提取、纯度难度较大，一些传统的骨骼DNA提取方法，操作步骤复杂，且容易接触有毒有害试剂，硅珠法提取陈旧骨骼DNA，操作相对简单，但需要多次离心，难免造成样本的损失，因此，目前磁珠法提取骨骼DNA开始被应用，但是目前有些磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果不好，严重影响后续PCR扩增及检测。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供一种能够满足检测纯度、提取速度快、提取效率高的磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、异丙醇、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。进一步地，所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。进一步地，所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。进一步地，所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl缓冲液的pH值均为8.0。进一步地，所述第三漂洗液的组份为质量浓度为70％的无水乙醇。进一步地，所述DNA洗脱液的组份包括10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和1mmol的EDTA溶液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。进一步地，所述磁珠的直径在5nm-80nm之间，所述磁珠的表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基。进一步地，所述试剂盒采用96孔预分装深孔板模式，第1列和第7列预分装的是裂解结合液和异丙醇，第2列和第8列预分装的是磁珠，第3列和第9列预分装的是第一漂洗液，第4列和第10列预分装的是第二漂洗液，第5列和第11列预分装的第三漂洗液，第6列和第12列预分装的是DNA洗脱液。与现有技术相比，本专利技术具有的优点和有益效果是：1、本专利技术利用磁珠法对骨骼基因组DNA进行提取，其中裂解结合液能够快速的为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率；2、本专利技术采用96孔预分装深孔板模式，能够结合全自动核酸提取仪进行全自动DNA提取，与传统的DNA提取方法相比，极大的缩短了提取所需的时间和人力劳动，提高了整体的提取效率。附图说明图1是本专利技术一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒提取DNA后纯度检测曲线图。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式作详细说明。一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、异丙醇、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。进一步地，所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0，在此酸碱度的环境下，能够快速为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率。进一步地，所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。进一步地，所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl缓冲液的pH值均为8.0。进一步地，所述第三漂洗液的组份为质量浓度为70％的无水乙醇。进一步地，所述DNA洗脱液的组份包括10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和1mmol的EDTA溶液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。进一步地，所述磁珠的直径在5nm-80nm之间，所述磁珠的表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基，DNA偶联量高，磁珠用量少，单分散可控粒径小，有利于对结合液中有限DNA的最大量吸附，提高了磁珠的灵敏性。进一步地，所述试剂盒采用96孔预分装深孔板模式，第1列和第7列预分装的是裂解结合液和异丙醇，第2列和第8列预分装的是磁珠，第3列和第9列预分装的是第一漂洗液，第4列和第10列预分装的是第二漂洗液，第5列和第11列预分装的第三漂洗液，第6列和第12列预分装的是DNA洗脱液，此试剂盒可以配合市面上的全自动核酸提取仪smart32使用，具体板孔设置如表1所示：表1板孔设置表本试剂盒的使用方法为：1、首先对未脱钙骨进行预处理：取0.1g骨粉，加入500ulTL裂解液和20ul蛋白酶K，55℃摇床过夜消化后，取400ul上清液进行后续实验。2、将预分装深孔板颠倒混匀后瞬时离心10秒，随后撕开封膜，并在第1列和第7列加入400ul的上述上清液，并按照表2所示的运行程序表在全自动核酸提取仪上设置提取程序，然后进行全自动提取，其中设置洗脱温度为56℃。表2运行程序3、基因组DNA浓度及纯度实验结果：采用超微量分光光度计ND2000检测基因组DNA的浓度和纯度，检测结果如表3所示：表3ND2000检测结果如图1所示对表3中3种提取方法提取的DNA进行峰值的纯度检测，如图1所示在260nm处均有明显的吸收峰，采用此试剂盒提取出的DNA纯度均满足实验要求。以上对本专利技术的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本专利技术的较佳实施例，不能被认为用于限定本专利技术的实施范围。凡依本专利技术申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本专利技术的专利涵盖范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。2.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。3.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。4.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl...

【专利技术属性】
技术研发人员：李微微，鲁明，迟翔宇，吴冰，
申请(专利权)人：天津威高分子诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12