提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法。所述方法将一定量的鱼类肌肉组织在研钵中利用液氮研磨成粗粉，加入一定量的核提取液来提取细胞核，随后离心将大部分杂质与细胞核分离，并用percoll细胞分离混合溶液进一步进行核层分离，并最终将细胞核包埋于低熔点琼脂糖凝胶中，最后在胶块中进行蛋白、RNA等物质的去除。

A method for extracting genomic DNA from fish muscle tissue

The invention relates to a method for extracting genomic DNA from fish muscle tissue. In this method, a certain amount of fish muscle tissue is made into coarse powder in the mortar by lapping liquid nitrogen in the mortar, adding a certain amount of nuclear extract to extract the nucleus. Then, most of the impurities are separated from the nucleus by centrifugation, and the mixed solution is separated by Percoll cells to further separate the nuclear layer, and the nucleus is eventually embedded in the low melting point Joan. In the fat gels, the protein, RNA and other substances were removed in the rubber block finally.

【技术实现步骤摘要】
提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法
本专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法。
技术介绍
自人类基因组计划完成后，测序技术实现了突飞猛进的发展速度，尤其是近些年二代和三代测序技术的不断成熟和测序成本的不断降低，极大的推动了人类对于动植物基因组学的认识，而获得完整性高、纯净度好的基因组DNA是获得真实、准确的基因组信息的前提和关键。目前关于鱼类肌肉组织高分子量核DNA提取的报告很少，要高效地提取出完整性好的鱼类肌肉组织核DNA并不简单，主要是鱼类肌肉组织含有较多的肌纤维，研磨难度较大，如研磨时间过短，组织不能破碎，很难提取出核；研磨时间增长或者研磨力度过大，都会使核膜破裂导致未受到保护的DNA断裂，其次是离心和细胞核洗涤步骤方法不同，在核提取的浓度、纯度、完整性和效率上也会出现不同效果。一旦方法不对就会提取出不合格的核DNA，导致其在二代和三代测序技术中造成文库构建失败或信息分析异常。因此有必要开发一种能够完整的提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法，为进一步推动基因组的研究和利用提供有效手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决存在于鱼类肌肉组织基因组提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)将鱼类肌肉组织在液氮预冷的研钵中研磨成粗粉，加入核提取液进行核提取，用孔径为80‑100μm的过滤网过滤核提取液，将滤液在2‑4℃离心机中，600g‑650g离心10‑15min，弃掉上清，收集沉淀；(二)用核提取液重悬步骤(一)获得的沉淀，再用孔径为20‑40μm的过滤网过滤重悬液，滤液部分在2‑4℃离心机中，50g‑60g离心1‑2min，收集上清，再将上清液在2‑4℃离心机中，600g‑650g离心10‑15min，弃掉上清，用核提取液重悬沉淀，最后将重悬液加到percoll细胞分离混合溶液上方，2‑4℃离心机中，6...

【技术特征摘要】
1.一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)将鱼类肌肉组织在液氮预冷的研钵中研磨成粗粉，加入核提取液进行核提取，用孔径为80-100μm的过滤网过滤核提取液，将滤液在2-4℃离心机中，600g-650g离心10-15min，弃掉上清，收集沉淀；(二)用核提取液重悬步骤(一)获得的沉淀，再用孔径为20-40μm的过滤网过滤重悬液，滤液部分在2-4℃离心机中，50g-60g离心1-2min，收集上清，再将上清液在2-4℃离心机中，600g-650g离心10-15min，弃掉上清，用核提取液重悬沉淀，最后将重悬液加到percoll细胞分离混合溶液上方，2-4℃离心机中，600g-650g离心30-50min后将中间层及中间层下方1-2mL液体吸出获得核液；(三)用核提取液和0.5-1xPBS溶液重悬步骤(二)所得核液后，离心去除percoll细胞分离混合溶液并收集沉淀，将沉淀用CSB溶液重悬并在43-45℃水浴3.5-4.5min后与琼脂糖液混匀制胶块；其中，所述percoll细胞分离混合溶液的组成成分包括20-30％(体积)的核提取液和70-80％(体积)的percoll细胞分离液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(二)中相对于每毫升的所述滤液部分，percoll细胞分离混合溶液的用量为1-1.5mL。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，以g/mL计，步骤(一)中鱼类肌肉组织与核提取液按照1：8-10的质量体积比混合。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(三)中所述CSB溶液的组成成分为：10mM-15mMTris-HCL，10mM-25mMEDTA。5.根据权利要求1或2所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑洪坤，郑建坡，刘东源，刘慧，
申请(专利权)人：北京百迈客生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11