白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用。具体的，肠病毒为EV71。白头翁皂苷B5对EV71感染小鼠具有明显的保护作用，提高小鼠存活率，小鼠肌肉组织有明显改善。此外，白头翁皂苷B5给药组小鼠肌肉组织中VP‑1的表达量呈显著性减少，B5给药组病毒总颗粒数比EV71感染组少，且有统计学差异；白头翁皂苷B5能够显著下调RD细胞中的cleaved PARP、3C‑pro、VP‑1蛋白的表达并上调Bcl‑2蛋白的表达，说明白头翁皂苷B5可以抑制RD细胞的凋亡。此外，白头翁皂B5可激活RD细胞的天然免疫信号通路相关蛋白Mavs、p‑IRF 3、IFN‑β的表达。

Application of Pulsatilla Saponin B5 in preparation of drugs for prevention and / or treatment of enterovirus infection

The invention provides an application of Pulsatilla Saponin B5 in preparing medicine for preventing and / or treating enterovirus infection. Specifically, the enterovirus is EV71. Pulsatilla Saponin B5 has obvious protective effect on EV71 infected mice, which can improve the survival rate of mice and improve the muscle tissue of mice. In addition, the expression of VP 1 in the muscle tissue of the B5 group was significantly reduced. The total number of virus particles in the B5 administration group was less than that of the EV71 infection group, and there was a statistical difference. The expression of cleaved PARP, 3C pro, VP 1 egg white in RD cells and up regulation of the expression of Bcl 2 protein were significantly down. It indicates that Pulsatilla Saponin B5 can inhibit the apoptosis of RD cells. In addition, Pulsatilla chinensis soap B5 can activate the expression of RD signaling pathway related proteins Mavs, P IRF IRF 3 and IFN beta.

【技术实现步骤摘要】
白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及化合物的应用。
技术介绍
肠病毒在病毒学上的分类是属于微小病毒科(picornaviridae)中的肠病毒群(enterovirus)。EV71为目前肠病毒群中最晚发现的病毒，其感染性强且致病率高，尤其是神经系统方面的并发症。其它同属于肠病毒群之病毒尚包括小儿麻痹病毒(Polioviruses；具3种型别)、柯萨奇病毒(Coxsackieviruses；A型具23种型别、B型具6种型别)、伊科病毒(Echoviruses；具31种型别)及肠病毒(Enteroviruses68～72型)。肠病毒的流行与季节转换、环境变异有着极大的关联性，肠病毒只在夏季及初秋流行，每年六～九月为高峰期，气温过低的地区并不利于肠病毒生存。根据流行病学调查，肠病毒之传染途径主为粪--口传染(stool-oral)，感染肠病毒的患者会经由粪便排出病毒，这些含有高浓度肠病毒的粪便会污染环境甚至地下水源，在公共卫生条件不佳的地区，极易经由污染的水源而散播该病毒。由于肠病毒除了在肠道外亦可在扁桃腺增殖，因此病患的唾液或口鼻分泌物也会带有高浓度的病毒，所以不排除经由空气或接触等传染途径。因此防治肠病毒之流行除了重视个人卫生外，公共卫生及环境卫生亦不容忽视。肠道病毒71型是引起婴幼儿手足口病(hand-footandmouthdisease；HFMD)主要病原体之一。肠病毒在病毒学上的分类是属于微小病毒科(picornaviridae)中的肠病毒群(enterovirus)。人类肠病毒71型于1969年首次从加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离出来的，这些病毒可被培养在恒河猴肾脏细胞(rhesusmonkeykidneycell；RhMK)及人胚二倍体细胞(humanfetaldiploidcell)中。EV71为目前肠病毒群中最晚发现的病毒，其感染性强且致病率高，尤其是神经系统方面的并发症。由于EV71对于中枢神经系统有极高的感染性，故临床上出现之症状包括脑炎(encephalitis)、无菌性脑膜炎(asepticmeningitis)、急性无力肢体麻痹(acuteflaccidparalysis)、手足口症(hand-foot-mouthdisease)、泡疹性咽峡炎(herpangina)、急性出血性结膜炎(acutehemorrhagicconjuctivitis)、肌肉僵直(myoclonicjerk)、头痛(headache)、发烧(fever)及呕吐(vomiting)等，而其中以手足口症及泡疹性咽峡炎最为常见。一般而言，感染肠病毒多为无症状(约50～80％)或出现轻微类似感冒的症状，病人会自然痊愈而产生抗体，但因感染肠病毒且转成重症之患者却有极高的机率死于心肺衰竭及广泛性的脑干伤害，因此，提供一种有效预防或治疗肠病毒感染的药物具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种化合物的应用。本专利技术试验表明，白头翁皂苷B5能够预防和/或治疗肠病毒感染，其中，肠病毒为EV71。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用。白头翁皂苷B5的结构如式I所示：本专利技术还提供了白头翁皂苷B5在制备肠病毒RD细胞凋亡的抑制剂中的应用。本专利技术还提供了白头翁皂苷B5在制备肠病毒cleavedPARP、3C-pro或VP-1蛋白表达的抑制剂中的应用。本专利技术还提供了白头翁皂苷B5在制备肠病毒Mavs、p-IRF3、IFN-β或Bcl-2蛋白表达的激活剂中的应用。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述肠病毒为EV71。在本专利技术的一些具体实施方案中，白头翁皂苷B5的有效剂量为25～100mg/kg小鼠体重。在本专利技术的一些具体实施方案中，白头翁皂苷B5的有效剂量为0.6～200μmol/(1×105个cell)。本专利技术还提供了cleavedPARP、3C-pro、VP-1、Mavs、p-IRF3、IFN-β或Bcl-2蛋白作为肠病毒治疗的靶标的用途。本专利技术提供了白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用。具体的，肠病毒为EV71。体内药效学实验结果显示，病毒感染后模型组小鼠多数出现一侧或双侧后肢明显僵直，爬行困难，生长变慢并死亡；B5给药组小鼠上述症状明显减轻，且B5给药组存活率均比造模组高，其中B5低剂量组的存活率达到100％。上述结果表明，白头翁皂苷B5对EV71感染小鼠具有明显的保护作用，可防止或缓解EV71病毒感染所导致的小鼠肢体僵直、甚至瘫痪等症状，提高小鼠存活率。组织病理切片结果表明，白头翁皂苷B5给药组小鼠肌肉组织有明显改善。对病毒外壳蛋白的影响：从小鼠肌肉组织免疫组化结果图3看来，造模组小鼠肌肉组织中VP-1的表达量增多，而B5给药组小鼠肌肉组织中VP-1的表达量呈显著性减少。病毒滴度测定结果如图4所示，B5给药组病毒总颗粒数比EV71感染组少，且有统计学差异(P<0.05)。对细胞凋亡的影响：白头翁皂苷B5对EV71引起RD细胞凋亡起抑制作用(P<0.05)。对相关蛋白表达的影响：白头翁皂苷B5(200μmol·L-1)给药组显著下调RD细胞中的cleavedPARP、3C-pro、VP-1蛋白的表达并上调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05)，说明白头翁皂苷D可以抑制RD细胞的凋亡。此外，白头翁皂B5可激活RD细胞的天然免疫信号通路相关蛋白Mavs、p-IRF3、IFN-β的表达，与对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示药效学评价结果；其中，图1(A)示体重变化；图1(B)示存活率的变化；图2示对组织病理学的影响；在400倍镜下拍摄的肌肉组织；图3示对病毒外壳蛋白的影响；其中，图3(A)示小鼠肌肉组织免疫组化结果；图3(B)示光密度的结果；图4示对病毒滴度的影响；图5示对细胞凋亡的影响；图6示对相关蛋白表达的影响。具体实施方式本专利技术公开了一种化合物的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的化合物的应用中所用原料及试剂均可由市场购得。实验动物：2日龄ICR小鼠(购于上海斯莱克实验动物有限责任公司)，平均体重在1.6-1.8克。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1体内药效学评价将2日龄小鼠分为6组：阴性组：不感染病毒；模型组：腹腔注射感染病毒，病毒滴度为106pfu，感染剂量为10μL/g，感染病毒24h后，每天腹腔注射10μL/g生理盐水；阳性对照组：感染病毒24小时后，每天腹腔注射利巴韦林(ribavirin)治疗，剂量为100mg/kg；实验组：感染病毒24小时后，每本文档来自技高网...

【技术保护点】
白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.白头翁皂苷B5在制备预防和/或治疗肠病毒感染的药物中的应用。2.白头翁皂苷B5在制备肠病毒RD细胞凋亡的抑制剂中的应用。3.白头翁皂苷B5在制备肠病毒cleavedPARP、3C-pro或VP-1蛋白表达的抑制剂中的应用。4.白头翁皂苷B5在制备肠病毒Mavs、p-IRF3、IFN-β或Bcl-2蛋白表达的激活剂中的应用。5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳丽，康乃馨，许琼明，杨世林，李笑然，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32