一种白头翁的有效组分及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种白头翁的有效组分及其制备方法与用途，其制备过程包括以下步骤：步骤１：用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对白头翁进行提取；步骤２：提取液经过色谱柱层析得洗脱液；步骤３：用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集２４．０－２８．０分钟，２８．０－３２．０分钟，３２．０－３６．０分钟，４８．０－５２．０分钟，５２．０－５６．０分钟，６０．０－６４．０分钟洗脱液得到有效组分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种治疗肿瘤疾病的中药提取物，具体地说涉及从白头翁中提取 的有效组分，制剂及其制备方法与用途。技术背景-肿瘤是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一 类疾病。目前业内对恶性肿瘤的治疗主要还是以手术、放疗、化疗为主，但许多 化学抗癌药物在作用于耙细胞时往往累及正常细胞，造成严重的副反应。植物药 的遗传毒性不明显，中草药在抗癌抗突变方面有独特的优势和广阔的应用前景， 而且中药在对肿瘤的辅助治疗中也起到不容忽视的作用。紫杉醇即是典型的从植 物中获得的具有良好抗癌活性的天然化合物，现已开发为抗肿瘤药物。目前我国 危害性最为严重的肿瘤为肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、 宫颈癌、白血病及淋巴瘤等。特别是肝癌的发生率近年来有所增加。值得重视， 这些肿瘤的病因学、发病学及其防治，均为我国肿瘤研究的重点。寻找高效低毒 的抗癌药物以及抗癌辅助药物是当前肿瘤研究的重要内容。我国药用生物资源十分丰富，其生理活性物质是研究和发现新药先导化学 物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取活性物质，用于开发成 治疗肿瘤疾病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活性物质， 开发成具有抗肿瘤疗效的新药，具有重要应用价值和广阔发展前景。白头翁为多年生草本植物。其含有的化学成分有白头翁根含白头翁皂甙(pulchinenoside) A、 B、 C、 D， 3-0-a -L-吡喃鼠李糖-(1—2) -a-L-吡喃阿 拉伯糖-， 23- 二羟基-△ 20 ( 29 )-羽扇豆烯-28-酸(3-0_ a-L-rhamnopyranosyl- (1—2) a-L-arabinopyranosyl-3 6 ， 白头翁阜 武(pulchinenoside) A3、 B4，皇武 (saponin) 1、 2，白桦脂酸-3-0-a-L阿 拉伯吡喃糖甙(betulinic acid 3-0-a -L-arabin叩yranoside )，白桦脂酸(betulinic acid)， 3-氧代白桦脂酸(3-oxobetulinic acid),胡萝卜武(daucosterol)，白头翁素(anemonin)，原白头翁素。其性味苦，寒。归胃、 大肠经。其功能主治为赤白痢疾；鼻衄；崩漏；血痔；寒热温症；带下；阴痒；湿疹； 瘰疬；痈疮；眼目赤痛。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供白头翁的有效组分。本专利技术的另一目的在于提供上述白头翁有效组分的制备方法。本专利技术还提供含有上述白头翁有效组分的制剂及该组分的用途。本专利技术的白头翁有效组分，其制备过程包括以下歩骤步骤1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对白头翁进行提取，步骤2:提取液经过色谱柱层析得洗脱液；步骤3:用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集24. 0 — 28.0分钟、28. 0—32. 0分钟、32. 0—36.0分钟、48. 0 —52. O分钟、 52.0—56.0分钟或60.0 — 64.0分钟洗脱液，得到有效组分1 (或称为C06)、有、-f /,n / 、 ,、 z —li 一/_ , — 、 ~/~> 入ri / 、/ _Li> 一 / _ 、i 一 a ^ 、 _/~> _i_， , m 、 ， , _i >_ 一' 、r ———、双组^rz 、g)c桫刀uj/入^双组甘3匸战孙刀uwj、名欢组分4 L战称刀uw、有效组分5 (或称为C13)、有效雄分6 (或称为C15)。其中步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5，优选为乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2，最优选为乙酸乙酯乙醇=1:1。 所述步骤中，步骤1具体为取白头翁药材，以乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5为溶剂，囱流提取，将提取液与药渣分离，分离后得到的提取液为提取物l， 步骤2具体为将提取物1过ODS-C18柱，首先，采用30%EtOH (5 BV;1BVs250 ml)作为流动相，然后改换95XEtOH (5 BV)作为流动相，得洗脱液， 步骤3具体为用制备液相色谱继续分离得到的洗脱液，流动相为水-A和乙腈-B,进行梯度洗脱，流速为9-11ml/min，柱温为室温，收集24. 0_28. 0分钟、28. 0 — 32.0分钟、32. 0—36. O分钟、48. 0 — 52.0分钟、52. 0—56. 0分钟或60. 0—64. 0分钟洗脱液得到有效组分。步骤3中所述梯度洗脱程序如下表1洗脱梯度表 Time (min) A (%) B (%)0 80 204 80 2019 50 5060 5 9564 5 95流速为10ml/min,柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分 离，在时间段24. 0_28. 0分钟、28. 0—32.0分钟、32. 0_36. O分钟、48.0 — 52. 0分钟、52. 0_56. 0分钟或60. 0—64. 0分钟收集溶液，溶液经浓縮干燥后得 到有效组分。本专利技术优选的白头翁有效组分制备方法，包括下列歩骤将白头翁药材粉 碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:0.8-1.2),加热回流0.8-1.2小时，提取1-3次， 合并滤液得提取液，将提取液浓縮成浸膏，过ODS-C18柱，首先，采用30%EtOH(5 BV; 1BV*250 ml)作为流动相，得洗脱液i ，然后改换95%EtOH (5 BV) 作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色谱继 t大力肉i寸;tuprji十口口；巾'j甘CiH3口'丄力肉眾'i丁 ci咱1工乂、j巾u甘T工，wiL^yj《ti乂y/j人《h 。;]目， 梯度洗脱，流速为9-11ml/min，柱温为室温。本专利技术最优选的白头翁有效组分制备方法，包括下列步骤将白头翁药材 粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(l:l)，加热回流l小时，提取2次，合并滤液得提 取液；将提取液浓縮成浸膏，用乙醇溶解上样，过ODS-C18柱，首先，采用30 %EtOH (5 BV; 1BV 250 ml)作为流动相，得洗脱液i ，然后改换95XEtOH (5 BV)作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓縮干燥后得样品；用制备液相色 谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱Zorbax SB-C18;21.2mmx250ram，流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下Time (min)_A (%)_B (%)0 80 204 80 2019 50 5060 5 9564 5 95流速为10ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分 离，在时间段24. 0 — 28.0分钟、28. 0_32. O分钟、32. 0 — 36. O分钟、48.0—52. 0分钟、52. 0 — 56. 0分钟或60. 0 — 64. 0分钟收集溶液，溶液经浓縮干燥后得 到有效组分。本专利技术24. 0 — 28. 0分钟、28. 0 — 32. 0分钟、32. 0 — 36. 0分钟、52. 0—56. 0分钟收集的有效组分成分如下表表2成分表白头翁C06质谱解析结果<tab本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白头翁有效组分，其特征在于，其制备过程包括以下步骤：　步骤１：用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对白头翁进行提取，　步骤２：提取液经过色谱柱层析得洗脱液；　步骤３：用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集 ２４．０－２８．０分钟、２８．０－３２．０分钟、３２．０－３６．０分钟、４８．０－５２．０分钟、５２．０－５６．０分钟或６０．０－６４．０分钟洗脱液得到有效组分。

【技术特征摘要】
1、一种白头翁有效组分，其特征在于，其制备过程包括以下步骤步骤1用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对白头翁进行提取，步骤2提取液经过色谱柱层析得洗脱液；步骤3用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集24.0-28.0分钟、28.0-32.0分钟、32.0-36.0分钟、48.0-52.0分钟、52.0-56.0分钟或60.0-64.0分钟洗脱液得到有效组分。2、 权利要求1的有效组分，其特征在于，步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合 物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-5:1-5。3、 权利要求1的有效组分，其特征在于，步骤1中所述乙酸乙酯和乙醇的混合 物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇=1-2:1-2。4、 权利要求1的有效组分，其特征在于，步骤1中所碑乙酸乙酯和乙醇的混合 物，两者的比例为乙酸乙酯乙醇.=1:1。5、 权利要求l的有效组分，其特征在于，所述步骤中，步骤l为取白头翁药 材，以乙酸乙酯:乙醇=1-5:1-5为溶剂，回流提取，将提取液与药渣分离，分离后 得到的提取液为提取物1，步骤2为将提取物1过0DS-C18柱，首先，采用 30%EtOH (5BV; 1BVa250 ml)作为流动相，然后改换95^EtOH (5 BV)作为流动相，得洗脱液，歩骤3为用制备液相色谱继续分离得到的洗脱液，流动相为水-A和乙腈-B，进行梯度洗脱。6、 权利要求5的有效组分，其特征在于，所述梯度洗脱程序如下<formula>formula see original document page 2</formula>流速为10ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离， 在时间段24. 0 — 28.0分钟、28. 0_32. 0分钟、32. 0 — 36.0分钟、48, 0_52. 0 分钟、52.0—56.0分钟或60.0—64.0分钟收集溶液，溶液分别浓縮干燥后得到 有效组分。7、 含有权利要求l-6任何一项有效组分的药物组合物。8、 权利要求l的有效组分的制备方法，其特征在于，其制备过程包括以下步骤: 步骤1:用乙酸乙酯和乙醇混合物作为溶剂对白头翁进行提取，步骤2:提取液经过色谱柱层析得洗脱液；步骤3:用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液，流动相为水和乙腈，收集24.0—28. 0分钟、28. 0 — 32. 0分钟...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺庆，刘雳，程翼宇，水文波，窦静，葛志伟，
申请(专利权)人：天津天士力制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]