用于检测可溶性ST2蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测可溶性ST2蛋白的试剂盒。具体地，本发明专利技术涉及的可溶性ST2蛋白检测试剂盒包含偶联有第一抗ST2蛋白单克隆抗体的磁珠和包含被标记物标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液。另一方面，本发明专利技术涉及2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14727的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14728的杂交瘤细胞、由所述杂交瘤细胞产生的抗ST2蛋白单克隆抗体、以及所述抗ST2蛋白单克隆抗体在制备用于检测可溶性ST2蛋白的试剂盒中的用途。

A kit for the detection of soluble ST2 protein

The invention relates to a kit for detecting soluble ST2 protein. In particular, the soluble ST2 protein detection kit included in the present invention includes a magnetic bead coupled with a first anti ST2 protein monoclonal antibody and an enzyme working fluid containing the second anti ST2 protein monoclonal antibody marked by the labeled substance. On the other hand, the invention relates to the hybridoma cells preserved in the CGMCC's preservation number of CGMCC No.14727 in October 23, 2017 and the hybridoma cells preserved in the CGMCC's preservation number in October 23, 2017, the anti ST2 protein monoclonal antibodies produced by the hybridoma cells, and the monoclonal antibodies against the anti ST2 protein in the hybridoma cells of the hybridoma cells. The use of the kit for detecting soluble ST2 protein is prepared.

【技术实现步骤摘要】
用于检测可溶性ST2蛋白的试剂盒
本专利技术属于分子免疫学领域，具体涉及一种可溶性生长刺激表达因子2(ST2)蛋白检测试剂盒、以及检测ST2蛋白的蛋白单克隆抗体及其用途。
技术介绍
心力衰竭(简称心衰)为各种心脏疾病的始末和严重阶段，发病率高，是当今重要的心血管疾病之一。心衰是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈或射血能力受损的一组复杂临床综合症，其发病率和病死率高，5年存活率与恶性肿瘤相近。近年来随着人口老龄化程度加重，高血压、糖尿病、肥胖发病率逐年上升及各种血管危险因素的増加，心衰发病率日益上升。因此快速判断心衰患者预后，早期采取积极的管理方法具有重要意义。ST2基因于1989年首次发现，ST2蛋白由328个氨基酸组成，是Toll/IL-1(IL-1R)超受体家族的成员之一。ST2基因位于2号染色体(2ql2)，包含11个外显子，一个近端启动子和个远端启动子。ST2蛋白主要有两种由不同启动子调控的初级亚型，一种可溶性蛋白(可溶性ST2或sST2)和一种跨膜形式蛋白(ST2L)。可溶性ST2在心肌受到过度牵拉受到损伤的过程中大量生成，作为一种诱骗受体，可以通过与ST2L竞争性结合IL-33，阻断经ST2L的信号转导，对IL-33/ST2L信号转导通路的效应进行负调节。可溶性ST2是一种机械应力诱导性蛋白，心力衰竭时可溶性ST2浓度升高机制可能是心衰时随着心脏容量负荷增加心肌细胞处于拉伸状态，在机械及炎症刺激的心肌细胞及心脏成纤维细胞可溶性ST2的表达量升高。在临床上，急性心力衰竭和慢性心力衰竭患者血清可溶性ST2浓度明显升高，且升高水平与心衰严重程度呈正相关。另外，可溶性ST2水平升高可作为心力衰竭患者不良结局的危险预测因子。对心衰患者的随访发现，可溶性ST2浓度可预测患者1年死亡率并可提高死亡预测效能。目前市场主流产品为Critical公司的ST2反应试剂盒，总时间为120分钟；并且Critical公司的ST2试剂盒主要组份大多需要提前进行稀释或者溶解，对于操作人员实施较为繁琐，本专利技术具有检测速度快、操作简便、灵敏度高、特异性好、稳定性高，可以批量生产等特点。
技术实现思路
一方面，本专利技术提供了一种可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其包含：偶联有第一抗ST2蛋白单克隆抗体的磁珠和包含被标记物标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液，其中所述标记物选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、放射性标记和免疫荧光标记；其中所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14728的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体；或者所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14728的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体。一方面，本专利技术提供一种杂交瘤细胞，其于2017年10月23日提交于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101；保藏号为CGMCCNo.14727，分类命名为ST2杂交瘤细胞株。另一方面，本专利技术提供一种杂交瘤细胞，其于2017年10月23日提交于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101；保藏号为CGMCCNo.14728，分类命名为ST2杂交瘤细胞株。根据本专利技术的一些具体实施方案，提供了根据本专利技术的抗ST2蛋白单克隆抗体在制备诊断试剂中的用途。根据本专利技术的一些具体实施方案，提供了本专利技术的杂交瘤细胞在制备诊断试剂中的用途。本专利技术的两种抗ST2蛋白单克隆抗体可以单独用于制备诊断试剂，然而优选本专利技术的两种抗ST2蛋白单克隆抗体组合用于制备诊断试剂。在一些具体实施方案中，所述诊断试剂是可溶性ST2蛋白检测试剂。可溶性ST2蛋白检测试剂是指用于定量或定性检测人类样本中可溶性ST2蛋白的试剂。可溶性ST2蛋白检测试剂可检测人类样本中可溶性ST2蛋白的存在和/或含量。所述诊断试剂可以是现有技术中任何适当的形式，包括但不限于ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、放射免疫检测试剂、免疫荧光检测试剂。实际上，本专利技术的抗ST2蛋白单克隆抗体或杂交瘤细胞可以用于制备任何基于抗原-抗体相互作用的检测试剂。在一些具体实施方案中，所述诊断试剂可以体现为液体形式、干粉、冻干粉形式、颗粒形式、多孔板形式或其它本领域公知的形式。优选地，根据本专利技术所提供的可溶性ST2蛋白检测试剂盒的酶工作液中还包含酶缓冲液，所述酶缓冲溶液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清和Proclin-300。当磁珠上的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.14728的另一株杂交瘤细胞产生；反之亦然，当磁珠上的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.14728的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞产生。在一个优选的实施方案中，所述磁珠和所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体的质量比为10∶1至40∶1，优选20:1。在又一个优选的实施方案中，所述包含标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液中第二抗ST2蛋白单克隆抗体的终浓度为1mg/L。在一些具体实施方案，本专利技术的可溶性ST2蛋白检测试剂盒还可以根据需要包含样本稀释液、酶反应底物、ST2蛋白校准品和ST2蛋白质控品。样本稀释液包含盐、表面活性剂、缓冲成分，pH在5-8之间，优选6-7。在一些具体实施方案，样本稀释液包含NaCl、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、山羊血清、吐温20、Proclin-300，pH值6.2-6.6。在一些具体实施方案，样本稀释液可以配制成浓缩型。所述酶反应底物根据所标记的酶而改变，例如当使用辣根过氧化物酶时，适合的底物包括但不限于邻苯二胺(OPD)、ABTS、四甲基联苯胺(TMB)或4氨基安替比林等。当使用碱性磷酸酶时，适合的底物包括但不限于BCIP/NBT。在一些具体实施方案中，本专利技术的ST2蛋白检测试剂盒包含：包被有本专利技术的一种抗ST2蛋白单克隆抗体的磁珠、酶工作液、样本稀释液、酶反应底物、ST2蛋白校准品和ST2蛋白质控品，其中酶工作液包含辣根过氧化物酶标记的另一种ST2蛋白单克隆抗体。优选地，根据本专利技术所述的可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含酶反应底物、ST2蛋白校准品和ST2蛋白质控品；其中所述ST2蛋白校准品为已知ST2蛋白浓度的血清，其中ST2蛋白浓度分别为200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、20ng/ml、5ng/ml、0ng/ml，所述ST2蛋白质控品为ST2蛋白浓度在80ng/ml至120ng/ml和16ng/ml至24ng/ml之间的血清。在一个具体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其包含：偶联有第一抗ST2蛋白单克隆抗体的磁珠和包含被标记物标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液，其中所述标记物选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、放射性标记和免疫荧光标记；其中所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14727的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14728的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体；或者所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14728的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCC No.14727的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其包含：偶联有第一抗ST2蛋白单克隆抗体的磁珠和包含被标记物标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液，其中所述标记物选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、放射性标记和免疫荧光标记；其中所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14728的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体；或者所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体和所述第二抗ST2蛋白单克隆抗体分别选自由2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14728的杂交瘤细胞和2017年10月23日保藏在CGMCC的保藏号为CGMCCNo.14727的杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其中所述磁珠和所述第一抗ST2蛋白单克隆抗体的质量比为10∶1至40∶1，优选20:1。3.根据权利要求1或2所述的可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其中所述包含被标记物标记的第二抗ST2蛋白单克隆抗体的酶工作液中第二抗ST2蛋白单克隆抗体的终浓度为1mg/L。4.根据权利要求3所述的可溶性ST2蛋白检测试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含酶反应底物、ST2蛋白校准品和ST2蛋白质控品；其中所述ST2蛋白校准品为已知ST2蛋白浓度的血清，其中ST2蛋白浓度分别为200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、20ng/ml、5ng/ml、0ng/ml，所述ST2蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晖，谷明星，代晓曼，李雨心，
申请(专利权)人：北京普恩光德生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11