一种VCAM-1单克隆抗体及制备方法和包含其的试剂盒技术

本申请涉及生物检测技术领域，具体公开了一种VCAM

【技术实现步骤摘要】
一种VCAM
‑
1单克隆抗体及制备方法和包含其的试剂盒


[0001]本申请涉及生物检测
，更具体地说，它涉及一种VCAM
‑
1单克隆抗体及制备方法和包含其的试剂盒。

技术介绍

黏附分子是一类分布于细胞表面或细胞外基质中的糖蛋白，其中可溶性血管细胞粘附分子sVCAM
‑
1是血管细胞粘附分子的可溶形式，炎性细胞包括单核、巨噬细胞、中性粒细胞及T淋巴细胞等，其释放大量的炎性介质，IL
‑
1、TNF
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a、IFN
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a以及Ang II等，激活核因子
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κB后，使血管内皮细胞分泌细胞黏附分子，如人VCAM
‑
1等，它们促进循环中单核细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞及血小板黏附于血管内皮，通过释放蛋白酶及氧自由基直接损伤血管内皮细胞，引起炎症反应、血栓形成，VCAM
‑
1在冠状动脉粥样硬化的过程中的作用尤为显著。VCAM
‑
1在正常血管上的表达用标准的免疫组织化学方法检测不到，而在炎症等病理条件下，血管内皮细胞、平滑肌细胞、骨髓基质细胞VCAM
‑
1的表达明显上升。
[0003]单核细胞和内皮细胞的粘附以及相伴随的内皮细胞单核细胞的细胞因子的释放导致血管内皮细胞上表达的粘附分子VCAM
‑
1释放而成sVCAM
‑
1，只有在病变形成伊始，或是出现血管痉挛、斑块不稳定等炎症急剧变化时迅速而明显增加，而且其上升的幅度与局部炎症的严重情况明显相关，在局部病变消退至相对比较平稳的时候，血中检测不到sVCAM
‑
1的升高。在已确诊为冠心病的患者，排除其他因素后，稳定型心绞痛患者sVCAM
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1水平与正常对照组无明显差别。对于sVCAM
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1与急性冠状动脉综合征的关系，不稳定型心绞痛和非q波心肌梗死患者sVCAM
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1明显高于稳定型心绞痛患者,sVCAM
‑
1可以很好的预测将来发生严重心血管事件的危险性，是冠心病患者未来致命性心血管事件的预测因子。
[0004]相关技术中可检测蛋白的诊断试剂盒有可能发生交叉反应，也就是样本中具有与待测物质具有较高的同源性、序列相似或者具有相似检测意义的蛋白交叉反应原时，抗体可能会识别并结合这些交叉反应原，导致假阳性，因此，诊断试剂盒的交叉反应性是一项重要的指标，对于临床结果的可靠性非常重要。因此，需要制备出具有优良的抗交叉反应性，对于人VCAM
‑
1蛋白检测结果有较好的阳阴性符合率的VCAM
‑
1化学发光试剂盒。

技术实现思路

[0005]为了制备出具有优良的抗交叉反应性，对于人VCAM
‑
1蛋白检测结果有较好的阳阴性符合率的VCAM
‑
1化学发光试剂盒，本申请提供一种VCAM
‑
1单克隆抗体及制备方法和包含其的试剂盒。
[0006]第一方面，本申请提供的一种VCAM
‑
1单克隆抗体，采用如下的技术方案：一种VCAM
‑
1单克隆抗体，，包括重链可变区和轻链可变区；所述的重链氨基酸含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:1所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:2所示，和互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:3所示；所述的轻链可变区氨基酸含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:4所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:5所示和互补决定区CDR3序列如
SEQ ID NO:6所示。
[0007]优选的，表达VCAM
‑
1单克隆抗体的遗传物质DNA包括重链和轻链；重链DNA含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:7所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:9所示；所述的轻链DNA含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:10所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:11所示，互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:12所示。
[0008]优选的，所述的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；所述的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。
[0009]优选的，重链DNA序列如SEQ ID NO:15所示；所述的轻链DNA序列如SEQ ID NO:14所示。
[0010]第二方面，本申请提供一种VCAM
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1单克隆抗体的制备方法，采用如下的技术方案：一种VCAM
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1单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：(a)制备重组人VCAM
‑
1蛋白：以T载体连接试剂盒进行连接，添加引物、cDNA模板开始反应，构建原核表达质粒pET
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28
‑
VCAM
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1，然后使用构建的pET
‑
28
‑
VCAM
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1转化BL21(DE3)感受态细胞，在上述细胞内进行重组人VCAM
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1蛋白的转录、翻译和收集；(b)制备单克隆抗体：采用重组人VCAM
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1蛋白对小鼠进行免疫，将经过免疫的小鼠脾脏制备成脾淋巴细胞悬液，与骨髓瘤细胞进行细胞融合并培养，即得杂交瘤细胞；对分泌抗性呈阳性的杂交瘤细胞进行克隆得到单克隆细胞，定株扩大培养并进行细胞冻存，即得单克隆抗体。
[0011]第三方面，本申请提供的一种包含VCAM
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1单克隆抗体的试剂盒，包括如下技术方案：一种包含VCAM
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1单克隆抗体的试剂盒，由以下部分组成：1)包被重组人VCAM
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1抗原蛋白的微孔板、2)含有VCAM
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1单克隆抗体的酶标记抗体、3)样本稀释液、4)双组分化学发光液、5)酶工作液。
[0012]优选的，所述含有VCAM
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1单克隆抗体的酶标记抗体制备过程中VCAM
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1单克隆抗体的添加量为5
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7mg，所述含有VCAM
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1单克隆抗体的酶标记抗体最终工作浓度为1mg/ml。
[0013]第四方面，本申请提供的一种包含VCAM
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1单克隆抗体的试剂盒在人VCAM
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1抗原蛋白的检测中应用。
[0014]综上所述，本申请具有以下有益效果：1、本申请中的包含VCAM
‑
1单克隆抗体的试剂盒稳定性良好，回收率达标、系统线性和重复性好。
[0015]2、本申请中的包含VCAM
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1单克隆抗体的试剂盒，在有较高的同源性、序列相似或者具有相似检测意义的蛋白存在时，具有优良的抗交叉反应性；对于人VCAM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种VCAM
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1单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区；所述的重链氨基酸含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:1所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:2所示，和互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:3所示；所述的轻链可变区氨基酸含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:4所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:5所示和互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:6所示。2.根据权利要求1所述的一种VCAM
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1单克隆抗体，其特征在于，表达VCAM
‑
1单克隆抗体的遗传物质DNA包括重链和轻链；重链DNA含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:7所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:9所示；所述的轻链DNA含有互补决定区CDR1序列如SEQ ID NO:10所示，互补决定区CDR2序列如SEQ ID NO:11所示，互补决定区CDR3序列如SEQ ID NO:12所示。3.根据权利要求1所述的一种VCAM
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1单克隆抗体，其特征在于，所述的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；所述的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。4.根据权利要求1所述的一种VCAM
‑
1单克隆抗体，其特征在于，重链DNA序列如SEQ ID NO:15所示；所述的轻链DNA序列如SEQ ID NO:14所示。5.如权利要求1所述的一种VCAM
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1单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）制备重组人VCAM
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1蛋白：以T载体连接试剂盒进行连接，添加引物、cDNA模板...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晖，谷明星，李鑫，陈勤慧，
申请(专利权)人：北京普恩光德生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：