【技术实现步骤摘要】
本申请属于单克隆抗体，具体涉及一种vcam-1单克隆抗体、制备方法及检测试剂盒和应用。
技术介绍
1、冠状动脉粥样硬化型心脏病(coronary heart disease，chd)是世界上发病率和病死率最高的疾病之一，严重影响着人类的寿命和生存质量。国内外许多权威文献都把冠心病看作是一种多风险因素(易感基因与环境因素)共同作用的疾病，其主要病因是冠状动脉血管富脂粥样硬化斑块的形成。动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，是冠心病的发病基础，慢性炎症促进了冠心病的进展。炎性细胞(单核/巨噬细胞，中性粒细胞及t淋巴细胞等)释放大量的炎性介质，如il-1、tnf-a、ifn-a以及ang ii等，激活核因子-kb(nf-kb)后，使血管内皮细胞分泌细胞粘附分子，如血管细胞间粘附分子-1(vcam-1；又名cd106)等，它们促进循环中单核细胞、中性粒细胞、t淋巴细胞及血小板黏附于血管内皮，通过释放蛋白酶及氧自由基直接损伤血管内皮细胞，引起炎症反应、血栓形成，在chd的发生、发展中起重要作用。可溶性血管细胞粘附分子(soluble vcam-1，svcam-1)是血管细胞粘附分子的可溶形式，在冠状动脉粥样硬化的过程中的作用尤为显著。
2、粘附分子(adhesion molecules,am)是一类分布于细胞表面或细胞外基质中的糖蛋白。它们以配体-受体相对应的形式发挥作用，介导细胞-细胞、细胞-细胞外基质或细胞-基质-细胞间发生黏附。粘附分子根据cdna同源性，目前主要分为五大类，包括：免疫球蛋白超家族、选择素家族、整合素家族、黏
3、人血管细胞粘附分子-1(vcam-1)主要表达于血管内皮细胞，亦可表达于其他细胞如巨噬细胞、肌细胞、树突状细胞。vcam-1在正常血管上的表达用标准的免疫组织化学方法检测不到，而在炎症等病理条件下，血管内皮细胞、平滑肌细胞、骨髓基质细胞等的表达明显上升。单核细胞和内皮细胞的粘附，以及相伴随的细胞因子的释放导致血管内皮细胞上表达的粘附分子vcam-1释放而成为svcam-1。svcam-1只有在病变形成伊始，或是出现血管痉挛、斑块不稳定等炎症急剧变化时迅速而明显增加，而且其上升的幅度与局部炎症的严重情况明显相关，在局部病变消退至相对比较平稳的时候，血中检测不到svcam-1的升高。svcam-1在正常个体中无明显的差异性，但在已确诊为冠心病的患者，排除其他因素后，稳定型心绞痛患者svcam-1水平与正常对照组无明显差别，也不能反应冠状动脉病变(由冠状动脉造影判断)的严重性。对于svcam-1与急性冠状动脉综合征的关系，不稳定型心绞痛和非q波心肌梗死患者svcam-1明显高于稳定型心绞痛患者，且维持达6月之久，6个月后至1年内逐渐下降至接近正常人水平；且svcam-1的升高与发病6个月后再发生心血管恶性事件明显相关，svcam-1可以很好的预测将来发生严重心血管事件的危险性，提供针对vcam-1的单克隆抗体，对冠心病患者未来致命性心血管事件的检测具有重要意义。
技术实现思路
1、为了检测人血管细胞粘附分子-1(vcam-1)，本申请的目的旨在提供一种抗人血管细胞粘附分子-1的单克隆抗体，作为vcam-1的检测试剂，对vcam-1进行高特异性、高灵敏度、高准确性检测。
2、在本申请的第一方面，提供了一种vcam-1单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链可变区vh和轻链可变区vl。
3、所述重链可变区vh为具有互补决定区cdr1h、cdr2h和cdr3h的片段，其中，所述互补决定区cdr1h的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述互补决定区cdr2h的氨基酸序列如seqid no.2所示；所述互补决定区cdr3h的氨基酸序列如seq id no.3所示；
4、所述轻链可变区vl为具有互补决定区cdr1l、cdr2l和cdr3l的片段，其中，所述互补决定区cdr1l的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述互补决定区cdr2l的氨基酸序列如seqid no.5所示；所述互补决定区cdr3l的氨基酸序列如seq id no.6所示。
5、在本申请的一个实施方案中，所述重链可变区vh为具有互补决定区cdr1h、cdr2h和cdr3h的片段，其中，所述互补决定区cdr1h的dna序列如seq id no.7所示；所述互补决定区cdr2h的dna序列如seq id no.8所示；所述互补决定区cdr3h的dna序列如seq id no.9所示；
6、在本申请的一个实施方案中，所述轻链可变区vl为具有互补决定区cdr1l、cdr2l和cdr3l的片段，其中，所述互补决定区cdr1l的dna序列如seq id no.10所示；所述互补决定区cdr2l的dna序列如seq id no.11所示；所述互补决定区cdr3l的dna序列如seq id no.12所示。
7、在本申请的一个实施方案中，所述重链可变区vh包含框架区frh。
8、优选的，所述框架区frh包括框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h，所述框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h的氨基酸序列如seq id no.13～16所示。
9、优选的，所述框架区frh包括框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h，所述框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h的dna序列如seq id no.17～20所示。
10、更优选的，所述重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no.21所示；所述重链可变区vh的dna序列如seq id no.22所示。
11、在本申请的一个实施方案中，所述轻链可变区vl包含框架区frl。
12、优选的，所述框架区frl包括框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l，所述框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l的氨基酸序列如seq id no.23～26所示。
13、优选的，所述框架区frl包括框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l，所述框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l的dna序列如seq id no.27～30所示。
14、更优选的，所述轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no.31所示；所述轻链可变区vl的dna序列如seq id no.32所示。
15、在本申请的一个实施方案中，所述单克隆抗体包含氨基酸序列如seq id no.33所示的重链和氨基酸序列如seq id no.34所示的轻链。
16、在本申请的一个实施方案中，所述单克隆抗体包含dna序列如seq id no.35所示的重链和dna序列如seq id no.36所示的轻链。
17、在本申请的第二方面，提供了上述所述vcam-1单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
18、(a)制备重组人vcam-1蛋白：<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种VCAM-1单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区VH为具有互补决定区CDR1H、CDR2H和CDR3H的片段，所述互补决定区CDR1H、CDR2H和CDR3H的基酸序列如SEQ ID No.1~3所示，所述轻链可变区VL为具有互补决定区CDR1L、CDR2L和CDR3L的片段，所述互补决定区CDR1L、CDR2L和CDR3L的基酸序列如SEQ IDNo.4~6所示。
2.根据权利要求1所述的一种VCAM-1单克隆抗体，其特征在于，所述互补决定区CDR1H、CDR2H和CDR3H的DNA列如SEQ ID No.7~9所示，所述互补决定区CDR1L、CDR2L和CDR3L的DNA列如SEQ ID No.10~12所示。
3.根据权利要求1所述的一种VCAM-1单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区VH包含框架区FR1H、FR2H、FR3H和FR4H，所述框架区FR1H、FR2H、FR3H和FR4H的氨基酸序列如SEQ IDNo.13~16所示；所述轻链可变区VL包含框架区FR1L、FR2L、FR3L和
4.根据权利要求3所述的一种VCAM-1单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.21所示，所述轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID No.31所示。
5.根据权利要求4所述的一种VCAM-1单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID No.33所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID No.34所示的轻链。
6.权利要求1所述的一种VCAM-1单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.一种检测VCAM-1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1~5中任一项所述的单克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被人VCAM-1抗原蛋白的微孔板、权利要求1~8中任一项所述VCAM-1单克隆抗体的酶标记抗体、样本稀释液、双组分化学发光液、酶工作液。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述VCAM-1单克隆抗体的酶标记抗体最终工作浓度为1mg/ml。
10.权利要求1~5中任一项所述的单克隆抗体在制备VCAM-1蛋白检测产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种vcam-1单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区vh和轻链可变区vl，所述重链可变区vh为具有互补决定区cdr1h、cdr2h和cdr3h的片段，所述互补决定区cdr1h、cdr2h和cdr3h的基酸序列如seq id no.1~3所示，所述轻链可变区vl为具有互补决定区cdr1l、cdr2l和cdr3l的片段，所述互补决定区cdr1l、cdr2l和cdr3l的基酸序列如seq idno.4~6所示。
2.根据权利要求1所述的一种vcam-1单克隆抗体，其特征在于，所述互补决定区cdr1h、cdr2h和cdr3h的dna列如seq id no.7~9所示，所述互补决定区cdr1l、cdr2l和cdr3l的dna列如seq id no.10~12所示。
3.根据权利要求1所述的一种vcam-1单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区vh包含框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h，所述框架区fr1h、fr2h、fr3h和fr4h的氨基酸序列如seq idno.13~16所示；所述轻链可变区vl包含框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l，所述框架区fr1l、fr2l、fr3l和fr4l的氨基酸序列如seq...
【专利技术属性】
技术研发人员：于晖，谷明星，李鑫，陈勤慧，
申请(专利权)人：北京普恩光德生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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