一种检测血液中地西泮含量的液相色谱分析方法技术

本发明专利技术检测血液中地西泮药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的地西泮药物浓度，本发明专利技术将内标法与高效液相色谱法相结合，提高了定量结果的准确性，消除系统误差；并有效缩短了分析时间，使检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的地西泮血药浓度进行监测。

A liquid chromatographic method for the determination of diazepam in blood

The method of detecting diazepam concentration in blood is to calibrate the standard solution by liquid chromatography analysis instrument and ultraviolet detector. The standard curve equation is y = a*x+b, and the blood samples are measured. The liquid chromatography analysis instrument and ultraviolet detector are also used after the treatment of the blood to be detected. The sample of the measured blood was detected and the y value of the measured blood was obtained. The measured blood y was replaced by the standard curve equation. The relative concentration of the target in the sample of the blood was calculated to be x, and the concentration of the working fluid of the internal standard was known, and the concentration of diazepam in the sample was calculated. The invention will be the invention. The combination of the standard method and high performance liquid chromatography (HPLC) improves the accuracy of the quantitative results, eliminates the systematic error, and effectively shortens the analysis time, makes the detection process simple and rapid, and is more conducive to the monitoring of diazepam blood concentration in the patient's body in the clinical treatment.

【技术实现步骤摘要】
一种检测血液中地西泮含量的液相色谱分析方法
本专利技术涉及精神类药物的临床血药浓度监测
，尤其涉及一种检测血液中地西泮药物浓度的方法。
技术介绍
地西泮(diazepam)，又称安定，是常用的苯二氮卓类药物，在临床上常作为麻醉前用药，辅助用药和复合全身麻醉的组成部分。此外，还常用来控制肌痉挛和抽搐，特别是与其他抗癫痫药物合用，治疗癫痫发作。地西泮分子式为C16H13ClN2O，具体结构式如图1所示。作为临床常用镇静剂，地西泮在体内主要经肝脏细胞色素P450酶作用进行氧化代谢，具有遗传多态性。由于其个体差异大，治疗窗窄，毒副作用与血药浓度密切相关，因而进行血药浓度监测对于指导临床合理用药、减少不良反应、提高疗效具有重要意义。目前，国内外已报道的地西泮的测定方法有HPLC、HPLC-MS/MS、GC-MS、GC-ECD、固相萃取-紫外导数光谱检测、TLC-UV、酶联免疫法等。其中，免疫法所用进口试剂价格昂贵，且所用试剂盒专属性稍差；TLC-UV法耗时耗力，难以对大量样本进行分析；液相色谱质谱联用法分析成本较高，对人员及场地要求高，不适于在中小型医院广泛开展；高效液相色谱法具有准确灵本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测血液中地西泮药物浓度的方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别和10μL内标工作液及80μL的甲醇混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200‑2000rpm下涡旋混匀30s‑1min后，使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的地西泮和内标色谱图，在上述地西泮和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上...

【技术特征摘要】
1.一种检测血液中地西泮药物浓度的方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别和10μL内标工作液及80μL的甲醇混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的地西泮和内标色谱图，在上述地西泮和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为地西泮溶液，所述内标工作液为氯硝西泮溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取地西泮标准品5mg置于5ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于5ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为0％-25％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有0.5ug/mL-50ug/mL地西泮的范围内配置出各标准工作液，并在-20℃条件下保存；(b)内标工作液的配制：精确称取氯硝西泮标准品5mg置于5mL容量瓶，用含水量为0％-25％甲醇溶解，并定容于5mL，得到标准储备液B，将标准储备液B用含水量为0％-25％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，得到浓度为10ug/mL的内标工作液，并在-20℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(c)用移液枪移取10μL步骤(b)中所述内标工作液于1.5ml离心管中，然后加入100μL步骤(二)中所述血清或血浆，在1200-2000rpm的转速下涡旋震荡混合20s-1min；(d)用移液枪移取800uL的乙酸乙酯加入步骤(c)的离心管中，在1200-2000rpm的转速下涡旋震荡混合4-6min，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液；(e)取步骤(d)上清液750uL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；(f)向步骤(e)的...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱胡月，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11