一种RNA聚合酶II转录亚基37e介体的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种RNA聚合酶II转录亚基37e介体的单克隆抗体及其应用。实验结果表明，本发明专利技术抗体能够应用于针对该蛋白研究的抗体芯片反应、免疫沉淀、Western Blotting以及检测植物根部有毒致癌成分多环芳烃(PAHs)的含量。

Monoclonal antibody against RNA polymerase II transcription subunit 37E mediator and its application

The invention provides a monoclonal antibody of RNA polymerase II transcription subunit 37E mediator and its application. The experimental results show that the antibody can be applied to the antibody chip reaction, immunoprecipitation, Western Blotting, and the detection of toxic carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in plant roots.

【技术实现步骤摘要】
一种RNA聚合酶II转录亚基37e介体的单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种RNA聚合酶II转录亚基37e介体的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
RNA聚合酶II转录亚基37e介体是由MED37E基因编码的一种涉及几乎所有RNA聚合酶II依赖基因调控转录的共激活因子的组成成分。此蛋白是一种分子伴侣，属于热激蛋白70家族并广泛存在于植物中，特别是作物根部中。多环芳烃(PAHs)对人类具有潜在的致癌作用和毒性，人类通过摄入受污染的食物致病。目前市面上并没有专门针对作物中有毒致癌物质PAHs研究的RNA聚合酶II转录亚基37e介体的靶向抗体，对于该研究领域在蛋白组学层面缺乏有效的抗体工具。因此，本领域亟待开发靶向蛋白研究的工具，对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的进行更深层次研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种RNA聚合酶II转录亚基37e介体的单克隆抗体及其应用，实验结果表明，通过单克隆抗体制备工艺技术针对RNA聚合酶II转录亚基37e介体的多肽片段成功得到高亲和力，高特异性以及多应用场景等特点的单克隆抗体。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2，和SEQIDNO:3所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有本专利技术的第一方面所述的重链可变区和重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为鼠源的。在本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述的轻链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO:5所示的CDR1’，SEQIDNO:6所示的CDR2’，和SEQIDNO:7所示的CDR3’；优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。在本专利技术的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有本专利技术的第三方面所述的轻链可变区和轻链恒定区。在另一优选例中，所述轻链的恒定区为鼠源的。在本专利技术的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)本专利技术的第一方面所述的重链可变区；和/或(2)本专利技术的第三方面所述的轻链可变区；优选地，所述抗体具有：本专利技术的第二方面所述的重链；和/或本专利技术的第四方面所述的轻链。在另一优选例中，所述抗体为特异性抗RNA聚合酶II转录亚基37e介体多肽的抗体。在另一优选例中，RNA聚合酶II转录亚基37e介体多肽选自下组：‘VGVWQHDRVE’、‘MVNHFVQEFK’、‘CFDIDANGIL’、‘AIQWLDSNQL’或其组合。在另一优选例中，所述的抗体包括：单链抗体(scFv)、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、鼠源抗体。在本专利技术的第六方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)本专利技术的第一方面所述的重链可变区的序列、本专利技术的第二方面所述的重链的序列、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区的序列、本专利技术的第四方面所述的轻链的序列、或本专利技术的第五方面所述的抗体的序列；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。在另一优选例中，所述的标签序列选自下组：6×His标签、GGGS序列、FLAG标签。在另一优选例中，所述的重组蛋白包括双特异性抗体、嵌合抗体。在本专利技术的第七方面，提供了一种多核苷酸，它编码选自下组的多肽：(1)本专利技术的第一方面所述的重链可变区、本专利技术的第二方面所述的重链、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区、本专利技术的第四方面所述的轻链、或本专利技术的第五方面所述的抗体；或(2)本专利技术的第六方面所述的重组蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种载体，它含有本专利技术的第七方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒。在本专利技术的第九方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本专利技术的第八方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术的第七方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第十方面，提供了一种偶联物，所述偶联物包括：(a)本专利技术的第五方面所述的抗体或本专利技术的第六方面所述的重组蛋白；和(b)与(a)中所述抗体或重组蛋白相连的可检测标记物。在另一优选例中，所述可检测标记物选自下组：生物素、荧光素、化学发光基团、化学荧光基团、荧光蛋白、酶、胶体金、彩色磁珠、乳胶颗粒、生物素标记、放射性核素、抗体、配体、抗原、受体，纳米粒子或其组合。在另一优选例中，所述纳米粒子选自下组：纳米金、纳米银、量子点或其组合。在另一优选例中，所述酶选自下组：辣根过氧化物酶、酸性磷酸酶或其组合。在本专利技术的第十一方面，提供了一种检测制品，所述检测制品包括：(1)本专利技术的第五方面所述的抗体、本专利技术的第六方面所述的重组蛋白、或本专利技术的第十方面所述的偶联物；和(2)任选的缓冲溶液或缓冲剂。在另一优选例中，所述检测制品用于检测多环芳烃(PAHs)。在另一优选例中，所述的检测制品包括：检测试剂、侧流片、芯片、测试条、检测板、测试片。在另一优选例中，所述的测试片包括：检测区，所述检测区固定有抗RNA聚合酶II转录亚基37e介体的另一种抗体(抗体二)，所述抗体二用于捕获所述抗RNA聚合酶II转录亚基37e介体。在另一优选例中，所述的测试片包括：质控区，所述质控区固定有与针对RNA聚合酶II转录亚基37e介体的抗体(一抗)结合的抗体(二抗)，所述二抗用于捕获所述针对RNA聚合酶II转录亚基37e介体的抗体(一抗)。在另一优选例中，所述检测片选自：多孔板，较佳地为96孔板、PVDF膜。在另一优选例中，所述与针对RNA聚合酶II转录亚基37e介体的抗体(一抗)结合的抗体(二抗)选自：HRP标记的羊抗鼠IgG二抗。在本专利技术的第十二方面，提供了本专利技术的第一方面所述的重链可变区、本专利技术的第二方面所述的重链、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区、本专利技术的第四方面所述的轻链、本专利技术的第五方面所述的抗体、本专利技术的第六方面所述的重组蛋白、或本专利技术的第十方面所述的偶联物、或本专利技术的第十一方面所述的检测制品的用途，用于制备检测植物中多环芳烃(PAHs)的检测制品或试剂盒。在另一优选例中，所述的检测制品包括芯片、包被抗体的免疫微粒。在本专利技术的第十三方面，提供了一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包含本专利技术的第五方面所述的抗体、本专利技术的第六方面所述的重组蛋白、或本专利技术的第十方面所述的偶联物或本专利技术的第十一方面所述的检测制品。在本专利技术的第十四方面，提供了一种检测植物中多环芳烃(PAHs)的方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供待检测的样品；(b)将该样品与本专利技术的第五方面所述的抗体、本专利技术的第六方面所述的重组蛋白、本专利技术的第十方面所述的偶联物、或本专利技术的第十一方面所述的检测制品混合，形成混合物；(c)检测所述混合物中“抗体-RNA聚合酶II转录亚基37e介体复合物”的存在与否，其中如果存在所述复合物，则表明所述样品中存在多环芳烃(PAHs)；如果不存在所述复合物，则表明所述样品中不存在多环芳烃(PAHs)。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2，和SEQ ID NO:3所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2，和SEQIDNO:3所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。2.一种抗体的重链，其特征在于，所述的重链具有权利要求1所述的重链可变区和重链恒定区。3.一种抗体的轻链可变区，其特征在于，所述的轻链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO:5所示的CDR1’，SEQIDNO:6所示的CDR2’，和SEQIDNO:7所示的CDR3’；优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。4.一种抗体的轻链，其特征在于，所述的轻链具有权利要求3所述的轻链可变区和轻链恒定区。5.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：(1)权利要求1所述的重链可变区；和/或(2)权利要求3所述的轻链可变区；优选地，所述抗体具有：权利要求2所述的重链；和/或权利要求4所述的轻链。6.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：(i)权利要求1所述的重链可变区的序列、权利要求2所述的重链的序列、权利要求3所述的轻链可变区的序列、权利要求4所述的轻链的序列、或权利要求5所述的抗体的序列；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。7.一种多核苷酸，其特征在于，它编码选自下组的多肽：(1)权利要求1所述的重链可变区、权利要求2所述的重链、权利要求3所述的轻链可变区、权利要求4所述的轻链、或权利要求5所述的抗体；或(2)权利要求6所述的重组蛋白。8.一种载...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炜宁，张玉娜，孟逊，
申请(专利权)人：艾比玛特医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31