糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白（C4.4A）的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的单克隆抗体及其应用。实验结果表明，本发明专利技术抗体能够应用于针对该蛋白研究的抗体芯片反应、免疫沉淀、Western Blotting、流式细胞术、活细胞富集。

Monoclonal antibody against glycosylphosphatidylinositol anchored glycoprotein (C4.4A) and its application

【技术实现步骤摘要】
糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白（C4.4A）的单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
C4.4A是一个含346个氨基酸残基的糖基磷脂酰肌锚定糖蛋白，属于Ly-6家族成员。研究表明C4.4AmRNA在正常组织中很少表达，仅胎盘和皮肤组织高表达，食管和膀胱弱表达。但实验证明恶性黑色素瘤、肺癌、乳腺癌及膀胱癌等肿瘤组织中C4.4AmRNA表达上调，其转移组织中表达强度更高，因此推测C4.4A可能与肿瘤的侵袭转移相关。目前大多数肿瘤转移还不能早期诊断，虽然一些免疫相关分子在少数肿瘤复发转移的诊断起到较好作用，但在大肠癌至今未发现有意义的早期肿瘤转移标志物，近端大肠癌较远端大肠癌的术后分期更差、预后也更差。肿瘤标志物是大肠癌诊断的重要措施，临床肿瘤标志物特异性较差，现有研究认为C4.4A与大肠癌的转移密切相关，其为大肠癌诊断及治疗提供了一个新的思路，C4.4A用于大肠癌诊断有其优点，其诊断大肠癌特异性好，表达率高、稳定表达，并且在离体组织中表达，而且C4.4A分子多以低聚物形式存在、糖基化程度变异很大，这种特性便于利用其制造单克隆抗体以降低血液中的C4.4A分子水平从而用于相关治疗等。目前市场上鲜有临床应用于大肠癌诊断、肿瘤复发转移诊断等的抗体类诊断产品，并且都没有数据表明可以用于活肿瘤细胞富集。对于该研究领域缺乏有效的抗体工具。
技术实现思路
本抗体的目的为提供一个靶向蛋白研究的工具，以实现对不同癌症患者、癌症不同分期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO.1所示的VHCDR1，SEQIDNO.2所示的VHCDR2，和SEQIDNO.3所示的VHCDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO.4所示的氨基酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有本专利技术的第一方面所述的重链可变区和重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为鼠源的。在本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述的轻链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：SEQIDNO.5所示的VLCDR1，SEQIDNO.6所示的VLCDR2，和SEQIDNO.7所示的VLCDR3；优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO.8所示的氨基酸序列。在本专利技术的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有本专利技术的第三方面所述的轻链可变区和轻链恒定区。在另一优选例中，所述轻链的恒定区为鼠源的。在本专利技术的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)本专利技术的第一方面所述的重链可变区；和/或(2)本专利技术的第三方面所述的轻链可变区；优选地，所述抗体具有：本专利技术的第二方面所述的重链；和/或本专利技术的第四方面所述的轻链。在另一优选例中，所述抗体为特异性抗糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)多肽的抗体。在另一优选例中，所述糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)多肽选自下组：‘LECYSCVQKA(SEQIDNO.9)’、‘TVKCAPGVDV(SEQIDNO.10)’、‘IHGQFSLAVR(SEQIDNO.11)’、‘DRGLDLHGLL(SEQIDNO.12)’、或其组合。在另一优选例中，所述的抗体包括：单链抗体(scFv)、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、鼠源抗体。在本专利技术的第六方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)本专利技术的第一方面所述的重链可变区的序列、本专利技术的第二方面所述的重链的序列、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区的序列、本专利技术的第四方面所述的轻链的序列、或本专利技术的第五方面所述的抗体的序列；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。在另一优选例中，所述的标签序列选自下组：6×His标签、GGGS序列、FLAG标签。在另一优选例中，所述的重组蛋白包括双特异性抗体、嵌合抗体。在本专利技术的第七方面，提供了一种多核苷酸，它编码选自下组的多肽：(1)本专利技术的第一方面所述的重链可变区、本专利技术的第二方面所述的重链、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区、本专利技术的第四方面所述的轻链、或本专利技术的第五方面所述的抗体；或(2)本专利技术的第六方面所述的重组蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种载体，它含有本专利技术的第七方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒。在本专利技术的第九方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本专利技术的第八方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术的第七方面所述的多核苷酸。在本专利技术的第十方面，提供了一种偶联物，所述偶联物包括：(a)本专利技术的第五方面所述的抗体或本专利技术的第六方面所述的重组蛋白；和(b)与(a)中所述抗体或重组蛋白相连的可检测标记物。在另一优选例中，所述可检测标记物选自下组：生物素、荧光素、化学发光基团、化学荧光基团、荧光蛋白、酶、胶体金、彩色磁珠、乳胶颗粒、生物素标记、放射性核素、抗体、配体、抗原、受体，纳米粒子或其组合。在另一优选例中，所述纳米粒子选自下组：纳米金、纳米银、量子点、或其组合。在另一优选例中，所述酶选自下组：辣根过氧化物酶、酸性磷酸酶、或其组合。在本专利技术的第十一方面，提供了一种检测制品，所述检测制品包括：(1)本专利技术的第五方面所述的抗体、本专利技术的第六方面所述的重组蛋白、或本专利技术的第十方面所述的偶联物；和(2)任选的缓冲溶液或缓冲剂。在另一优选例中，所述检测制品用于检测糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)。在另一优选例中，所述的检测制品包括：检测试剂、侧流片、芯片、测试条、检测板、测试片。在另一优选例中，所述的测试片包括：检测区，所述检测区固定有抗糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的另一种抗体(抗体二)，所述抗体二用于捕获所述糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)。在另一优选例中，所述的测试片包括：质控区，所述质控区固定有与针对糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的抗体(一抗)结合的抗体(二抗)，所述二抗用于捕获所述针对糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的抗体(一抗)。在另一优选例中，所述检测片选自：多孔板，较佳地为96孔板、PVDF膜。在另一优选例中，所述与针对糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白(C4.4A)的抗体(一抗)结合的抗体(二抗)选自：HRP标记的羊抗鼠IgG二抗。在本专利技术的第十二方面，提供了本专利技术的第一方面所述的重链可变区、本专利技术的第二方面所述的重链、本专利技术的第三方面所述的轻链可变区、本专利技术的第四方面所述的轻链、本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：/nSEQ ID NO.1所示的VH CDR1，/nSEQ ID NO.2所示的VH CDR2，和/nSEQ ID NO.3所示的VH CDR3；/n优选地，所述重链可变区具有SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：
SEQIDNO.1所示的VHCDR1，
SEQIDNO.2所示的VHCDR2，和
SEQIDNO.3所示的VHCDR3；
优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO.4所示的氨基酸序列。


2.一种抗体的重链，其特征在于，所述的重链具有权利要求1所述的重链可变区和重链恒定区。


3.一种抗体的轻链可变区，其特征在于，所述的轻链可变区具有以下的一个或多个互补决定区CDR：
SEQIDNO.5所示的VLCDR1，
SEQIDNO.6所示的VLCDR2，和
SEQIDNO.7所示的VLCDR3；
优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO.8所示的氨基酸序列。


4.一种抗体的轻链，其特征在于，所述的轻链具有权利要求3所述的轻链可变区和轻链恒定区。


5.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：
(1)权利要求1所述的重链可变区；和/或
(2)权利要求3所述的轻链可变区；
优选地，所述抗体具有：权利要求2所述的重链；和/或权利要求4所述的轻链。


6.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：
(i)权利要求1所述的重链可变区的序列、权利要求2所述的重链的序列、权利要求3所述的轻链可变区的序列、权利要求4所述的轻链的序列、或权利要求5所述的抗体的序列；以及
(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。


7.一种多核苷酸，其特征在于，它编码选自下组的多肽：
(1)权利要求1所述的重链可变区、权利要求2所述的重链、权利要求3所述的轻链可变区、权利要求4所述的轻链、或权利要求5所述的抗体；或
(2)权利要求6所述的重组蛋白。


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【专利技术属性】
技术研发人员：翁炜宁，张喆，孟逊，
申请(专利权)人：艾比玛特医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31