抗人Tn型糖基化MUC1抗体及其用途制造技术

本申请提供了结合人Tn型糖基化MUC1的抗体或其抗原结合部分及其用途，包含所述抗体或其抗原结合部分的检测试剂盒及其用途，利用所述抗体或其抗原结合部分检测样品中人Tn型糖基化MUC1水平的方法。

Anti human TN glycosylated MUC1 antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
抗人Tn型糖基化MUC1抗体及其用途
本申请大体上涉及生物检测领域，具体而言，本申请提供了结合人Tn型糖基化MUC1的抗体或其抗原结合部分及其用途。本申请提供了新的结合人Tn型糖基化MUC1的抗体或其抗原结合部分，并提供了包含所述抗体或其抗原结合部分的试剂盒，以及利用所述抗体或其抗原结合部分检测样品中人Tn型糖基化MUC1水平的方法。
技术介绍
人类肿瘤相关粘蛋白MUC1，也被称为癌症抗原15-3(CA15-3)或附膜蛋白，是一种高糖基化、高分子量蛋的白，其糖基化>50％，分子折射度>200kD，其编码序列长1821bp，含有7个外显子，其中第2个外显子含有串联重复序列(variablenumberoftandemrepeats,VNTR)，不同人的VNTR量从20-125个不等，构成MUC1基因的多态性，属于跨膜分子。每个VNTR含有60个碱基对，含有5个潜在的O糖基化位点。细胞恶变伴随异常的O糖基化时，原先的O糖链结构变成Tn抗原、唾液酸化的Tn抗原或者T抗原等肿瘤特异性的糖链结构。由于自身免疫耐受，单独的MUC1肽链无法刺激机体产生足够强烈的免疫反应。Sorensen等人利用重组糖基转移酶在MUC1上添加O糖链结构，合成Tn抗原、唾液酸化Tn抗原与O糖基化完整的糖肽抗原，5个位点完全O糖基化的完整的糖肽抗原诱发免疫法应最为强烈。Tn抗原是T抗原的前体，正常情况下隐蔽地表达粘蛋白，细胞恶变伴随不完全的糖基化时，Tn抗原就会暴露并出现较强的免疫反应，可作为潜在肿瘤威胁的标志。MUC1是乳腺癌、肺癌、结肠癌和宫颈癌等大约90％的肿瘤细胞表面的特异性分子标志物。美国国立癌症研究所(NCI)认为MUC1是目前已发现的75个优先肿瘤相关抗原中排名第二的最有前景的肿瘤特异性靶点。MUC1不仅是肿瘤细胞表面的特异性标记物，血液中MUC1水平的定量也是临床医生对癌症病人术后随访，监测肿瘤复发、转移的重要指标。然而由于糖基化的多样性以及MUC1在血清中的不稳定性，MUC1并不是均一多肽。区分健康细胞和肿瘤细胞来源的MUC1，需要精确测量临床样本中肿瘤相关的经过特殊糖基化修饰的MUC1，因此非常具有挑战性。目前我国MUC1临床检测严重依赖国外企业开发的诊断抗体产品。现有诊断抗体对MUC1的识别作用于不同的位点，同时由于最初建立此检测时对这一肿瘤标志物的认识的局限性，因此各诊断产品灵敏度和准确度参次不齐。美国宾夕法尼亚大学CarlJune教授团队对MUC1的最新研究发表于2016年，研究表明Tn型糖基化是决定MUC1作为肿瘤细胞特异抗原的关键。因此，专门针对Tn型糖基化MUC1肽段进行免疫筛选，开发用于临床血液免疫诊断和肿瘤组织免疫化学诊断的抗体产品，不但具备前瞻性和创新性，而且可填补国内高效价Tn型糖基化MUC1特异性抗体诊断试剂产品的空白，并可以延伸到其他各种对效价特别敏感的诊断项目甚至开发MUC1特异性肿瘤靶向药物。专利技术概述第一方面，本申请提供了结合人Tn型糖基化MUC1的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示、所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；或者所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:9所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:11所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:12所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:13所示；其中HCDR和LCDR的氨基酸序列根据Kabat或Chothia定义。在第一方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。在第一方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在第一方面的一些实施方案中，所述抗体与人Tn型糖基化MUC1的C末端结合，所述C末端包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。在第一方面的一些实施方案中，所述C末端包含由以下氨基酸确定的表位：SEQIDNO:1的第1-12位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第1-16位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第17-26位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第35-45位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第49-68位所示的氨基酸序列或SEQIDNO:1的第69-82位所示的氨基酸序列。第二方面，本申请提供了用于检测样品中人Tn型糖基化MUC1水平的试剂盒，其包含第一抗体和/或第二抗体；其中，所述第一抗体包含含SEQIDNO:2所示的HCDR1，SEQIDNO:3所示的HCDR2和SEQIDNO:4所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:5所示的LCDR1，SEQIDNO:6所示的LCDR2和SEQIDNO:7所示的LCDR3的轻链可变区；和/或所述第二抗体包含含SEQIDNO:8所示的HCDR1，SEQIDNO:9所示的HCDR2和SEQIDNO:10所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:11所示的LCDR1，SEQIDNO:12所示的LCDR2和SEQIDNO:13所示的LCDR3的轻链可变区。在第二方面的一些实施方案中，所述试剂盒还包含标准品、质控品和/或缓冲液。在第二方面的一些实施方案中，所述试剂盒用于辅助检测或评估肿瘤，例如胰腺癌。在第二方面的一些实施方案中，所述Tn型糖基化MUC1的水平与增加的肿瘤风险、诊断肿瘤的存在或肿瘤的严重程度相关联。在第二方面的一些实施方案中，所述Tn型糖基化MUC1的水平是监测肿瘤病人术后恢复情况、肿瘤复发或转移的严重程度的重要指标。第三方面，本申请提供了用于检测样品中人Tn型糖基化MUC1水平的方法，所述方法包括将第一抗体和第二抗体与所述样品接触；其中，所述第一抗体包含含SEQIDNO:2所示的HCDR1，SEQIDNO:3所示的HCDR2和SEQIDNO:4所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:5所示的LCDR1，SEQIDNO:6所示的LCDR2和SEQIDNO:7所示的LCDR3的轻链可变区；和/或所述第二抗体包含含SEQIDNO:8所示的HCDR1，SEQIDNO:9所示的HCDR2和SEQIDNO:10所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:11所示的LCDR1，SEQIDNO:12所示的LCDR2和SEQIDNO:13所示的LCDR3的轻链可变区。在第三方面的一些实施方案中，所述接触为同时接触本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合人Tn型糖基化MUC1的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列的轻链可变区，其中/n所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ IDNO:7所示；或者/n所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ IDNO:11所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQID NO:13所示；/n其中HCDR和LCDR的氨基酸序列根据Kabat或Chothia定义。/n

【技术特征摘要】
1.结合人Tn型糖基化MUC1的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示、所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；或者
所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:9所示、所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示、所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:11所示、所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:12所示、所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:13所示；
其中HCDR和LCDR的氨基酸序列根据Kabat或Chothia定义。


2.如权利要求1所述的抗体，其中
所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)；和/或
所述抗体为单克隆抗体，优选为兔单克隆抗体。


3.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体与人Tn型糖基化MUC1的C末端结合，所述C末端包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。


4.如权利要求3所述的抗体，其中所述C末端包含由以下氨基酸确定的表位：
SEQIDNO:1的第1-12位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第1-16位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第17-26位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第35-45位所示的氨基酸序列、SEQIDNO:1的第49-68位所示的氨基酸序列或SEQIDNO:1的第69-82位所示的氨基酸序列。


5.用于检测样品中人Tn型糖基化MUC1水平的试剂盒，其包含第一抗体和/或第二抗体；
其中，所述第一抗体包含含SEQIDNO:2所示的HCDR1，SEQIDNO:3所示的HCDR2和SEQIDNO:4所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:5所示的LCDR1，SEQIDNO:6所示的LCDR2和SEQIDNO:7所示的LCDR3的轻链可变区；和/或
所述第二抗体包含含SEQIDNO:8所示的HCDR1，SEQIDNO:9所示的HCDR2和SEQIDNO:10所示的HCDR3的重链可变区，以及含SEQIDNO:11所示的LCDR1，SEQIDNO:12所示的LCDR2和SEQIDNO:13所示的LCDR3的轻链可变区；
任选地，所述第一抗体或第二抗体用可检测的标记物标...

【专利技术属性】
技术研发人员：张君，劳滔滔，林潮喜，张雁，
申请(专利权)人：深圳市倍诺博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44