分离的抗原结合蛋白及其应用制造技术

本申请涉及一种分离的抗原结合蛋白，其具有以下特性：(a)特异性结合CDH6，和(b)具有通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。本申请还提供了包含所述抗原结合蛋白的药物以及使用其治疗肿瘤的方法。物以及使用其治疗肿瘤的方法。

【技术实现步骤摘要】
分离的抗原结合蛋白及其应用


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种结合Cadherin
‑
6(CDH6)蛋白的抗体及其应用。

技术介绍

[0002]钙黏着蛋白是在其胞外结构域中含有大约100个残基的钙黏着蛋白重复序列的跨膜糖蛋白超家族。钙黏着蛋白介导钙依赖性细胞
‑
细胞黏附，并在正常组织发育中发挥至关重要的作用
(1)
。经典的钙黏着蛋白亚家族包括N
‑
、P
‑
、R
‑
、B
‑
和E
‑
钙黏着蛋白，以及约十个在黏附连接中存在的其他成员，黏附连接是一种在极化上皮细胞顶面的细胞结构。经典钙黏着蛋白的胞质结构域可与β
‑
联蛋白、γ
‑
联蛋白(也称作斑珠蛋白)和p120联蛋白相互作用。β
‑
联蛋白和γ
‑
联蛋白与α
‑
联蛋白结合，并且α
‑
联蛋白将钙黏着蛋白
‑
联蛋白复合体连接至肌动蛋白细胞骨架
(1,2)
。β
‑
和γ
‑
联蛋白在连接复合体中发挥结构性作用，而p120可调节钙黏着蛋白黏附活性和转运
(1
‑
4)
。研究者认为E
‑
钙黏着蛋白是许多上皮癌侵润和生长的活性抑制蛋白
(1
‑
3)
。研究表明，除了上皮钙粘素丢失外，癌细胞的神经钙粘素表达上调。钙粘素表达的这种变化被称作“钙粘素转换”。N
‑
钙黏着蛋白与FGF受体协作，导致MMP
‑
9过表达和细胞侵袭
(3)
。研究表明，在内皮细胞中，VE
‑
钙黏着蛋白信号转导、表达和定位与血管通透性和肿瘤血管生成相关
(5,6)
。研究者还已经证实，正常情况下在上皮细胞中的存在的P
‑
钙黏着蛋白，其表达在卵巢和其他人类癌症中也发生改变
(7,8)
。钙粘素
‑
6也称肾钙粘素(K
‑
钙粘素，CDH6)，它是一种II型典型钙粘素。
[0003]据报道，CDH6在胆管癌细胞中有抑癌基因功能
(9)
，钙粘素
‑
6表达经证实是上皮
‑
间质细胞转换的一个标记物，与乳头状甲状腺癌的阶段和转移呈正相关
(10,11)
。在有关研究中，钙粘素
‑
6经证实会与GABARAP和相关蛋白相互作用来抑制自噬，从而促进转移性行为
(12)
。CDH6在一些癌症中过表达，尤其是肾细胞癌和卵巢癌。CDH6过表达与肿瘤的生长和增殖有关，并且与肾细胞癌的不良预后有关，因此是癌症靶向性治疗的理想靶点。

技术实现思路

[0004]本申请的目的之一在于提供一种结合CDH6蛋白的抗原结合蛋白及其应用。本申请所述的抗原结合蛋白具有下列性质中的一种或多种：1)以较高的亲和力特异性与CDH6蛋白相结合；2)特异性识别在细胞表面表达的CDH6蛋白；3)能够被细胞内化，尤其是肿瘤细胞的内化；4)可以抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。本申请还提供了所述抗体的制备方法和应用。
[0005]一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
[0006]1)在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合；
[0007]2)通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。
[0008]在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白具备选自下组的一种或多种性质：1)能够以1.8
×
10
‑9M或更低的KD值结合CDH6蛋白；2)能够特异性识别在细胞表面表达的
CDH6蛋白；3)能够被细胞内化；4)抑制肿瘤和/或肿瘤细胞增殖。
[0009]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
[0010]所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
[0011]所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
[0012]所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
[0013]所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
[0014]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
[0015]在某些实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体、完整抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
[0016]在某些实施方式中，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab
’
，Fv片段，F(ab
’
)2，scFv，di
‑
scFv和/或dAb。
[0017]在某些实施方式中，其中所述抗体包括嵌合抗体或人源化抗体。
[0018]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
[0019]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
[0020]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0021]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
[0022]在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：1)在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合；2)通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性；3)其与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab
’
，Fv片段，F(ab
’
)2，scFv，di
‑
scFv和/或dAb。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区。9.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG的恒定区。10.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人
IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的恒定区。11.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。12.根据权利要求1
‑
11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列。14.根据权利要求1
‑
13中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。16.根据权利要求1
‑
15中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明桥，潘荣，蒋岳云，王一强，王朝晖，
申请(专利权)人：艾比玛特医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：