抗-GPRC5D抗体、结合GPRC5D和CD3的双特异性抗原结合分子及其用途制造技术

本文提供了特异性地结合至GPRC5D的抗体。本发明专利技术还描述了能够编码所提供的GPRC5D特异性抗体或抗原结合片段的相关多核苷酸、表达所提供的抗体或抗原结合片段的细胞、以及相关载体和带可检测标记的抗体或抗原结合片段。此外，还描述了使用所提供的抗体的方法。例如，所提供的抗体可用于诊断、治疗或监测GPRC5D表达型癌症的进展、消退或稳定性；以用于确定癌症患者是否应该接受治疗；或用于确定受治疗者是否患有GPRC5D表达型癌症，并因此可适于用GPRC5D特异性抗癌治疗剂诸如本文所述的针对GPRC5D和CD3的多特异性抗体治疗。GPRC5D和CD3的多特异性抗体治疗。GPRC5D和CD3的多特异性抗体治疗。

【技术实现步骤摘要】
抗
‑
GPRC5D抗体、结合GPRC5D和CD3的双特异性抗原结合分子及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求提交于2016年7月20日的美国临时申请序列号62/364,811的权益。上述申请的全部内容全文以引用方式并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，所述序列表据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2017年6月28日，命名为PRD3422USNP_SL.txt，并且大小为57,673字节。


[0005]本文所提供的公开内容涉及特异性结合G蛋白偶联受体C5家族亚型D(GPRC5D)的单克隆抗体，特异性结合GPRC5D和簇决定子3(CD3)的多特异性抗体，以及产生和使用所述抗体的方法。

技术介绍

[0006]多发性骨髓瘤(MM)为第二常见的恶性血液肿瘤，并且占所有癌症死亡的2％。MM为一种异质性疾病，并且主要由染色体易位引起，尤其是t(11；14)、t(4；14)、t(8；14)、del(13)、del(17)(Drach等人，(1998)Blood 92(3):802
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809；Gertz等人，(2005)Blood 106(8):2837
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2840；Facon等人，(2001)Blood 97(6):1566
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1571))。由于骨髓浸润、骨破坏、肾衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担，MM影响的患者可能经历各种疾病相关症状。截至2006年，MM的5年相对存活率约为34％，强调MM是目前尚无治愈选择的难治性疾病。
[0007]G蛋白偶联受体C5家族亚型D(GPRC5D)是2001年首次鉴定出的孤儿非典C类GPCR(
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Osborne等人Biochim Biophys Acta.1518(3):237
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248,2001)。GPRC5D及其它5族GPCR通常具有C类受体的较短氨基端结构域，并因此预测在构象上类似于A类受体。就这一点而言，它们较为独特，与C类GPCR具有序列同源性并且所预测的结构拓扑相当于A类受体。GPRC5D活化的功能性结果尚未描述并且配体仍然未知。其基因具有三个外显子并且位于人的染色体12p13.3上。GPRC5D受体在不同物种间高度保守并且与食蟹猴GPRC5D共享92％的同一性。
[0008]GPRC5D mRNA主要表达于MM患者的所有恶性浆细胞中(Atamaniuk JA等人Eur J Clin Invest 42(9)953
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960；2012；Frigyesi
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blood和Cohen等人Hematology 18(6):348
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35；2013)。GPRC5D的表达在患者间有差异并且与浆细胞负荷和遗传畸变如Rb
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1缺失密切相关(Atamaniuk JA等人Eur J Clin Invest 42(9)953
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960；2012)。
[0009]该GPRC5D在浆细胞谱系上的独有表达使其被指定为抗骨髓瘤抗体的理想靶标。

技术实现思路

[0010]本文提供了特异性地结合至GPRC5D的抗体及其抗原结合片段。本文还描述了能够
编码所提供的GPRC5D特异性抗体和抗原结合片段的相关多核苷酸、表达所提供的抗体和抗原结合片段的细胞、以及相关载体和带可检测标记的抗体和抗原结合片段。此外，还描述了使用所提供的抗体和抗原结合片段的方法。例如，GPRC5D特异性抗体和抗原结合片段可用于诊断或监测GPRC5D表达型癌症的进展、消退或稳定性；以用于确定癌症患者是否应该接受治疗；或用于确定受治疗者是否患有GPRC5D表达型癌症，并因此可适于用GPRC5D特异性抗癌治疗剂诸如本文所述的针对GPRC5D和CD3的多特异性抗体治疗。
[0011]本文还提供了免疫特异性地结合至GPRC5D和CD3的多特异性抗体及其多特异性抗原结合片段。本文还描述了能够编码所提供的GPRC5D
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CD3多特异性抗体的相关多核苷酸、表达所提供的抗体的细胞以及相关载体和可检测标记的多特异性抗体。此外，还描述了使用所提供的多特异性抗体的方法。例如，GPRC5D
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CD3多特异性抗体可用于诊断或监测GPRC5D表达型癌症的进展、消退或稳定性；以用于确定癌症患者是否应该接受治疗；或用于确定受治疗者是否患有GPRC5D表达型癌症，并因此可适于用GPRC5D特异性抗癌治疗剂诸如本文所述的GPRC5D
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CD3多特异性抗体治疗。
[0012]GPRC5D特异性抗体
[0013]本文描述了特异于GPRC5D的分离抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，GPRC5D特异性抗体和抗原结合片段结合人GPRC5D。在一些实施方案中，GPRC5D特异性抗体和抗原结合片段结合人GPRC5D和食蟹猴GPRC5D。在一些实施方案中，GPRC5D特异性抗体和抗原结合片段结合具有SEQ ID NO.22的氨基酸序列的多肽的一个或多个残基。该GPRC5D特异性抗体或抗原结合片段能够以28nM或更小的EC
50
在体外诱导ADCC。
[0014]表1提供了本文所述的一些GPRC5D特异性抗体的示例的汇总：
[0015]表1：针对人GPRC5D生成的mAb的CDR序列
[0016][0017][0018]在一些实施方案中，提供了GPRC5D特异性抗体或其抗原结合片段，它们包含含有表1所述抗体中的任一抗体的CDR1、CDR2和CDR3的重链。在一些实施方案中，提供了GPRC5D特异性抗体或其抗原结合片段，它们包含含有表1所述抗体中的任一抗体的CDR1、CDR2和CDR3的重链以及含有表1所述抗体中的任一抗体的CDR1、CDR2和CDR3的轻链。在本文所述的一些实施方案中，GPRC5D特异性抗体或其抗原结合片段与包含含有表1所述抗体中的任一抗体的CDR1、CDR2和CDR3的重链以及含有表1所述抗体中的任一抗体的CDR1、CDR2和CDR3的轻链的抗体或抗原结合片段竞争性结合GPRC5D。
[0019]人IgG类分为四种同种型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。它们在Fc区的氨基酸序列中共享大于95％的同源性，但显示的主要差别在于铰链区的氨基酸组成和结构。Fc区介导效应子功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。在ADCC中，抗体的Fc区结合至免疫效应子细胞(诸如自然杀伤细胞和巨噬细胞)的表面上的Fc受体(FcgR)，导致靶细胞的吞噬作用或裂解。在CDC中，抗体通过触发细胞表面的补体级联反应来杀伤靶细胞。本文所述的抗体包括具有与任何IgG同种型组合的可变域的所述特征的抗体，包括其中Fc序列已经被修饰以实现不同效应子功能的修饰型式。
[0020]对于治疗性抗体的许多应用，Fc介导的效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性地结合至GPRC5D的分离抗体或其抗原结合片段，所述分离抗体或其抗原结合片段包含：a.具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链互补决定区1（CDR1）、具有SEQIDNO:5的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:9的氨基酸序列的重链CDR3；b.具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:6的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:10的氨基酸序列的重链CDR3；c.具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:7的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:11的氨基酸序列的重链CDR3；d.具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:8的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:12的氨基酸序列的重链CDR3；e.具有SEQIDNO:61的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:67的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:72的氨基酸序列的重链CDR3；f.具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:28的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:30的氨基酸序列的重链CDR3；g.具有SEQIDNO:27的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:73的氨基酸序列的重链CDR3；h.具有SEQIDNO:27的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:29的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:11的氨基酸序列的重链CDR3；i.具有SEQIDNO:62的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:68的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:74的氨基酸序列的重链CDR3；j.具有SEQIDNO:63的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:69的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:75的氨基酸序列的重链CDR3；k.具有SEQIDNO:64的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:70的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:12的氨基酸序列的重链CDR3；l.具有SEQIDNO:65的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:68的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:76的氨基酸序列的重链CDR3；或m.具有SEQIDNO:66的氨基酸序列的重链CDR1、具有SEQIDNO:71的氨基酸序列的重链CDR2、以及具有SEQIDNO:77的氨基酸序列的重链CDR3。2.根据权利要求1所述的分离抗体或抗原结合片段，其中a.包含具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:5的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:9的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:16的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:19的氨基酸序列的轻链CDR3；b.包含具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:6的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:10的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:16的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:19的氨基酸序列的轻链CDR3；c.包含具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:7的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:11的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体
还包含具有SEQIDNO:14的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:17的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:20的氨基酸序列的轻链CDR3；d.包含具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:8的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:12的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:15的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:18的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:21的氨基酸序列的轻链CDR3；e.包含具有SEQIDNO:61的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:67的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:72的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:78的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:80的氨基酸序列的轻链CDR3；f.包含具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:28的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:30的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:6的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:19的氨基酸序列的轻链CDR3；g.包含具有SEQIDNO:27的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:29的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:73的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:14的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:17的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:20的氨基酸序列的轻链CDR3；h.包含具有SEQIDNO:27的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:29的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:11的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:14的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:17的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:20的氨基酸序列的轻链CDR3；i.包含具有SEQIDNO:62的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:68的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:74的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:14的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:17的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:20的氨基酸序列的轻链CDR3；j.包含具有SEQIDNO:63的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:69的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:75的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:78的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:80的氨基酸序列的轻链CDR3；k.包含具有SEQIDNO:61的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:67的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:72的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:78的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:80的氨基酸序列的轻链CDR3；l.包含具有SEQIDNO:65的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:68的氨基酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQIDNO:76的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQIDNO:95的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQIDNO:79的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQIDNO:81的氨基酸序列的轻链CDR3；或m.包含具有SEQIDNO:66的氨基酸序列的所述重链CDR1、具有SEQIDNO:71的氨基
酸序列的所述重链CDR2、以及具有SEQ ID NO: 77的氨基酸序列的所述重链CDR3的所述抗体还包含具有SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的轻链CDR1、具有SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的轻链CDR2、以及具有SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的轻链CDR3。3. 一种分离抗体或其抗原结合片段，所述分离抗体或其抗原结合片段特异性地结合至GPRC5D并且包含选自SEQ ID NO: 52、53、54、55、82、83、84、85、86、87、88、89、或91的可变重（VH）链区。4. 根据权利要求3所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO: 56、57、58、92、93、或94的可变轻（VL）链区。5. 根据权利要求3所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO: 52、53、54、55、82、83、84、85、86、87、88、89、或91的VH区以及选自SEQ ID NO: 56、57、58、92、93、或94的VL区。6. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 56的VL链区配对的SEQ ID NO: 52、53、或83。7. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 57的VL链区配对的SEQ ID NO: 54、84、85、86、或90。8. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 58的VL链区配对的SEQ ID NO: 55或88。9. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 92的VL链区配对的SEQ ID NO: 82或87。10. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 93的VL链区配对的SEQ ID NO: 89。11. 根据权利要求5所述的抗体，其中所述VH链区包含与包含SEQ ID NO: 94的VL链区配对的SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：R阿塔，D钱，S艾达维塔尔，F高德，Y李，L鲁伊斯特罗，N马耶维斯基，M曼登卡，K皮拉瑞斯迪，A泰普亚科夫，M特内塔，
申请(专利权)人：詹森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：