结合死亡受体4和死亡受体5的抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合死亡受体4和/或死亡受体5的单克隆抗体，包括所述抗体的药物组合物，以及对患者给予所述药物组合物的治疗方法。及对患者给予所述药物组合物的治疗方法。及对患者给予所述药物组合物的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
Haematol 130：501
‑
510,2005)和TRA
‑
8及其人源化形式的tigatuzumab(CS
‑
1008，A Yada等.,Ann Oncol 19:1060
‑
1067,2008)；以及van Roosmalen所列的其他mAbs(如前所引，见第450页的表1)。然而，尽管所有这些药物在体外以及通常的动物模型中能够非常有效地杀死肿瘤细胞(参见上文引用的参考文献)，但是它们中的任何一种在临床试验中都没有表现出强的活性，无论是单独使用还是与其他药剂组合使用，并且没有一种进入III期试验(综述于PM Holland，Cytokine Growth Factor Rev 25:185
‑
193,2014以及Lemke等，如前所引。特别参见Holland的表1和Lemke等的表2和3，和其中引用的参考文献)。对于mAbs，一个原因可能是有交联mAbs的要求，以此寡聚化死亡受体以触发凋亡途径。这样的要求可以通过在体内将mAbs的Fc结构域与免疫细胞上的Fcγ受体(FcγR)结合而体内满足，但浸润肿瘤的免疫细胞可能太少，或者这种结合可能不具有足够高的亲和力。癌细胞也可能表达凋亡蛋白的抑制剂(见Lemke等，如前所引)。为了改善功效，人们正在开发TRAIL的修饰形式，包括与其他蛋白结构域融合以增强稳定性、寡聚和/或靶向(Lemke等，如前所引和Holland，如前所引)。同样地，已开发出了包含多个结合DR4和/或DR5的抗体结构域的结构体(K Miller等，J Immunol 170：4854
‑
4861,2003；W Wang等，Immunol Cell Biol 91:360
‑
367,2013；JE Allen等.，Mol Cancer Ther 11:2087
‑
95，2012；H Huet等，Cancer Res 72abstract 3853,2012；WO 2014/022592；WO 2015/017822)，但这些结构体还没进入临床试验，或是在临床试验中未取得成功(KP Papadopoulos等，Cancer Chemother Pharmacol；Feb 27，2015，PMID：25721064)；它们非常不自然的结构可能会限制它们的临床效用。在另一种方案中，TRAIL和抗DR5 mAb AMG655的组合或联合用药比其单独的任一种药剂在体外和体内更有效(JDGraves等.，Cancer Cell 26：177
‑
189,2014)。

技术实现思路

本专利技术提供了与DR4和DR5结合的单克隆抗体(mAb)，如D114和G4.2以及它们的人源化形式。在一个实施方案中，本专利技术提供了包含两对重链和轻链的双特异性单克隆抗体，其中每个重链/轻链对包含一个结合DR4的结构域和一个结合DR5的结构域。在其他实施方案中，本专利技术提供了具有4个结合DR4的结构域或4个结合DR5的结构域的多聚体mAb。在优选的实施方案中，该抗体具有Bs(scFv)4‑
IgG抗体的形式，该术语定义见下文。在任何双特异性或多聚体mAbs中，每个结合结构域优选为来自人源化的或人mAb，例如D114和G4.2的人源化形式。而且，本专利技术的任何mAb可以含有恒定区，所述恒定区包含增强与细胞Fcγ受体(FcγR)结合的突变，例如FcγRIIb，例如γ
‑
1恒定区中的S267E和/或L328F突变(根据基于EU索引的Kabat编号)，优选两个或更多个此类突变。有利的是，mAb抑制小鼠中人肿瘤异种移植物的生长。另一方面，本专利技术提供了包含任何这些mAbs的药物组合物。第三个方面，对患者给予这种药物组合物来治疗癌症或其它疾病。
附图说明
图1A,B。为Bs(scFv)4‑
IgG抗体形式的结构简图，示出了单独的可变区和恒定区(A)或通过将每个轻链区与各自的重链区折叠在一起形成的结构域(B)。V
H
1(或V
L 1)＝第一抗体的重链(或轻链)可变区；对于第二抗体的V
H
2和V
L
2同样如
此。C
H
1，C
H
2，C
H
3(或C
L
)＝重(轻)恒定区；H＝铰链区。V1(或V2)＝第一(或第二)抗体的全部可变区。图2A
‑
D。图2A显示4H6和D114 mAbs与DR4的结合。图2B显示4H6和D114 mAbs抑制Apo2L与DR4的结合。图2C显示3H3和G4.2 mAbs与DR5的结合。图2D显示3H3和G4.2 mAbs抑制Apo2L与DR5的结合。mlgG是小鼠阴性对照mAb。图3A
‑
D。在山羊抗小鼠IgG
‑
Fc抗体(anti
‑
mIgG
‑
Fc)存在的情况下，经4H6和D114mAbs处理后，H60肺肿瘤细胞(A)和SW480结肠肿瘤细胞(B)的细胞活力；在anti
‑
mIgG
‑
Fc存在的情况下，经3H3和G4.2 mAbs处理后，H60肺肿瘤细胞(C)和COLO 205结肠肿瘤细胞(D)的细胞活力。图4A
‑
D。4H6mAb的成熟重链(A)和轻链(B)可变区以及3H3mAb的成熟重链(C)和轻链(D)可变区的单字母氨基酸序列(分别为SEQ ID NOS:1
‑
4)。图5A
‑
D。为HuD114
‑
L1轻链(A)和HuD114
‑
H1和HuD114
‑
H2重链(B)的成熟可变区的氨基酸序列与小鼠D114和人受体V区的比对；HuG4.2
‑
L1和HuG4.2
‑
L2轻链(C)以及HuG4.2
‑
H1和HuG4.2
‑
H2重链(D)的成熟可变区的氨基酸序列与小鼠G4.2和人受体V区的比对。上述序列分别为(A)SEQ ID NOS.5
‑
7，(B)SEQ ID NOS.8
‑
11，(C)SEQ ID NOS.12
‑
15，和(D)SEQ ID NOS.16
‑
19。CDRs在D114(或G4.2)序列中用下划线标注。D114的CDR
‑
L1，
‑
L2，
‑
L3，
‑
H1，
‑
H2和
‑
H3分别表示为SEQ ID NOS.20
‑
25，而G4.2的则分别表示为SEQ ID NOS.26
‑
31，HuD114(或HuG4.2)序列中用小鼠D114(或G4.2)氨基酸取代的氨基酸用双下划线标注。这里所有图中的轻链和重链都采用单字母氨基酸编码本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与死亡受体5结合的单克隆抗体(mAb)，其包含轻链V区和重链V区，所述轻链V区具有三个CDR，所述轻链V区的三个CDR的序列分别如SEQ ID NO：26
‑
28所示，所述重链V区具有三个CDR，所述重链V区的三个CDR的序列分别如SEQ ID NO：29
‑
31所示。2.根据权利要求1所述的mAb，其是人源化抗体。3.根据权利要求2所述的mAb，其包含具有与HuG4.2
‑
L1(SEQ ID NO：13)或HuG4.2
‑
L2(SEQ ID NO：14)至少90％序列同一性的轻链V区，和具有与HuG4.2
‑
H1(SEQ ID NO：17)或HuG4.2
‑
H2(SEQ ID NO：18)至少90％序列同一性的重链V区，其中Kabat编号的轻链位置4和68分别被L和R占据，Kabat编号的重链位置27、2...

【专利技术属性】
技术研发人员：京振，
申请(专利权)人：银河生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：