包含经修饰的重链恒定区的抗体制造技术

本文提供了重链恒定区(称为“经修饰的重链恒定区”)或其功能上等同的片段，所述重链恒定区或其功能上等同的片段相对于未修饰形式的相同抗体增强了抗体的生物学特性。示例性的经修饰的重链恒定区包含一个IgG2铰链和三个恒定结构域(即，CH1、CH2和CH3结构域)，其中所述恒定区结构域中的一个或多个是非IgG2同种型(例如是IgG1、IgG3或IgG4)的。所述重链恒定区可以包含野生型人IgG结构域序列或这些序列的变体。本文还提供了用于增强包含非IgG2铰链的抗体的某些生物学特性(如内化、激动作用和拮抗作用)的方法，其中所述方法包括用IgG2铰链替代所述抗体的非IgG2铰链。链替代所述抗体的非IgG2铰链。

【技术实现步骤摘要】
包含经修饰的重链恒定区的抗体
[0001]本申请是申请号为2018800342753的中国专利技术专利申请(申请日：2018年5月24日，专利技术名称：包含经修饰的重链恒定区的抗体)的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求美国临时申请号62/511,178(2017年5月25日提交)和62/599,221(2017年12月15日提交)的优先权。贯穿本说明书引用的任何专利、专利申请和参考文献的内容均通过引用以其整体特此并入。

技术介绍

[0004]抗体治疗剂是疾病(如癌症和免疫障碍)治疗中发展最快的领域之一。然而，通过治疗性抗体有效靶向抗原仍然是卫生保健的主要挑战。因此，抗体工程已经成为制药领域的主要焦点。从这一焦点出发，已经出现了大量新的工程化抗体，如抗体片段、抗体药物缀合物(ADC)、具有经修饰的效应子区域的抗体和双特异性抗体。
[0005]抗体通过许多不同的机制促进其治疗特性。抗体可以直接抑制或激活靶抗原，从而调节细胞信号传导。抗体可以抑制配体与受体的结合。抗体还可以例如通过增强受试者的免疫系统(例如，作为T细胞激活中的共刺激物)来诱导或抑制免疫应答以抵抗感染或癌症。
[0006]此外，抗体介导的细胞表面受体/抗原的内化被认为是治疗性抗体的主要作用机理。在这种情况下，抗体通过诱导靶标到细胞中的内化将靶标从细胞表面去除并使其无法发挥功能。实际上，抗体治疗剂的先驱者之一是用于治疗乳腺癌的曲妥珠单抗。曲妥珠单抗靶向ErbB2受体并诱导受体/抗体内化，从而抑制EGFR信号传导。然而，抗体并不总是展示出有效的内化品质，因此对具有改善的内化功能的抗体存在持续的需求。因此，非常需要用于改善已知治疗性抗体的内化的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了重链恒定区(称为“经修饰的重链恒定区”)或其功能上等同的片段，所述重链恒定区或其功能上等同的片段相对于未修饰形式的相同抗体增强或修饰抗体的生物学特性。例如，包含经修饰的恒定区的抗体展现出增加的内化和/或激动或拮抗活性。因此，本专利技术的抗体是原始未修饰抗体的优化形式。在某些实施方案中，重链包含经修饰的恒定区，所述经修饰的恒定区包含相对于野生型重链恒定区的一个或多个突变或修饰。在某些实施方案中，经修饰的重链恒定区包含一个IgG2铰链和三个恒定结构域(即，CH1、CH2和CH3结构域)，其中所述恒定区结构域中的一个或多个是非IgG2人同种型(例如IgG1、IgG3或IgG4)或其功能上等同的片段。经修饰的恒定区可以包含相应的野生型氨基酸序列或其变体，例如在铰链或CH1、CH2、CH3结构域内相对于野生型氨基酸序列的一个或多个(例如在1
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10之间或更多个)氨基酸取代或缺失。因此，铰链和/或每个恒定结构域的氨基酸序列与相应的野生型氨基酸序列至少约80％、85％、90％、95％或更多(即，96％、97％、98％、99％或100％)相同。
[0008]在一个实施方案中，经修饰的重链恒定区包含野生型人IgG2铰链或与野生型人IgG2铰链的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。所述铰链可以进一步含有另外的修饰，例如以减少二硫键的形成。在一个实施方案中，所述铰链相对于野生型人IgG2铰链包含氨基酸取代C219S。在某些实施方案中，所述铰链包含SEQ ID NO:8、21
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23、126
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132和134
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147中任何一个所示的氨基酸序列或如下序列之一，所述序列包含在CVE与CPP之间插入的1
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3个氨基酸。
[0009]在某些实施方案中，经修饰的重链恒定区包含IgG2 CH1结构域，例如野生型人IgG2 CH1结构域或与野生型人IgG2 CH1结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)至少95％相同的氨基酸序列。
[0010]在某些实施方案中，经修饰的重链恒定区包含IgG1 CH2结构域，例如野生型人IgG1 CH2结构域或与野生型人IgG1 CH2结构域的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。所述CH2结构域可含有另外的修饰(例如，以降低或消除效应子功能)。在某些实施方案中，所述CH2结构域相对于野生型全长人IgG1 CH2包含氨基酸取代A330S和P331S。在某些实施方案中，所述CH2结构域包含SEQ ID NO:24。
[0011]在某些实施方案中，经修饰的重链恒定区包含IgG1 CH3结构域，例如野生型人IgG1 CH3结构域或与野生型人IgG1 CH3结构域的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。所述CH3结构域可以进一步含有赋予特定同种异型的另外的修饰。在一个实施方案中，相对于不同同种异型(例如，“fa”同种异型，其分别在以下那些位置处具有D和L)的野生型全长人IgG1，所述CH3结构域在位置356处含有氨基酸残基E并且在位置358处含有氨基酸M(“f”同种异型)。在某些实施方案中，所述CH3结构域包含SEQ ID NO:5。
[0012]在特定的实施方案中，所述抗体包含经修饰的重链恒定区，其中(a)所述CH1结构域是具有或不具有另外的修饰的野生型人IgG2 CH1结构域或野生型IgG1 CH1结构域，(b)所述铰链是具有或不具有C219S取代的野生型IgG2铰链，(c)所述CH2结构域是具有或不具有另外的修饰的野生型人IgG1CH2结构域或野生型IgG2 CH2结构域，并且(d)所述CH3结构域是具有或不具有位置356处的氨基酸E和位置358处的氨基酸M的野生型人IgG1 CH3结构域或野生型人IgG2 CH3结构域(例如同种异型f或fa的)。在特定的实施方案中，所述经修饰的重链恒定区包含本文所述的氨基酸序列，例如SEQ ID NO:26
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37和78
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93中的任何一个所示的氨基酸序列。
[0013]与不具有经修饰的重链恒定区的相同抗体相比，本专利技术的抗体(即，具有经修饰的恒定区的抗体)可以是完全人抗体或人源化的抗体，并且还展现出一种或多种增强或改变的特征。这些特征可以包括增加或改变的细胞内化、激动活性、大的交联复合物的形成、ADCC、受体介导的信号传导、拮抗剂活性、免疫调节活性和抗肿瘤活性；或引入新的特性(例如激动剂活性)。
[0014]还提供了含有本专利技术的经修饰的恒定区的双特异性分子和免疫缀合物，以及含有所述抗体、双特异性分子或免疫缀合物和可接受的药物载体的组合物。此类组合物还可以包含一种或多种另外的治疗剂，例如刺激免疫系统的药剂，如检查点抑制剂、共刺激分子、抗CD39抗体或抗A2AR抗体。
[0015]还提供了用于制备包含经修饰的重链恒定区的抗体的方法。与包含非IgG2同种型的铰链的相同抗体相比，本文提供的某些方法包括增加细胞对抗体的内化的方法以及用于
增加抗体的激动剂活性的方法。此类方法包括以下步骤：提供具有不是IgG2铰链的铰链的抗体，以及将所述铰链用IgG2铰链(如作为野生型人IgG2铰链的铰链、具有与野生型人IgG2铰链的氨基酸序列至少95％相同的氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含经修饰的重链恒定区的抗体，其中所述经修饰的重链恒定区以从N末端到C末端的顺序包含CH1结构域、铰链、CH2结构域和CH3结构域，其中所述铰链是IgG2同种型的，并且所述CH1、CH2或CH3结构域中的至少一个不是IgG2同种型的。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述铰链是野生型人IgG2铰链或包含与野生型人IgG2铰链的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述铰链含有减少二硫键形成的一个或多个修饰。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述铰链包含氨基酸取代C219S。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述铰链包含SEQ ID NO:8、21
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23、126
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132或134
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147中任何一个的氨基酸序列或如下序列，所述序列包含在CVE与CPP之间插入的1
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【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：