ZIKV-NS1蛋白及其在制备寨卡病毒传播阻断疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ZIKV‑NS1蛋白及其在制备寨卡病毒传播阻断疫苗中的应用。本发明专利技术提供了一种蛋白质，命名为ZIKV‑NS1蛋白，为由序列表的序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明专利技术还保护所述ZIKV‑NS1蛋白的应用，为如下(e1)或(e2)：(e1)制备寨卡病毒疫苗；(e2)制备寨卡病毒传播阻断疫苗。本发明专利技术提供的疫苗可阻断寨卡病毒通过蚊虫在自然界的传播，降低自然环境中蚊虫的感染率，从而保护健康人群不受寨卡病毒感染，预防寨卡病毒突然大暴发。

ZIKV-NS1 protein and its application in the preparation of blocking vaccine against Chai virus

The invention discloses ZIKV NS1 protein and its application in preparing the blocking vaccine of the Chai virus. The invention provides a protein, named ZIKV NS1 protein, which is a protein composed of amino acid sequence shown in sequence 1 of the sequence table. The invention also protects the application of the said ZIKV NS1 protein, and produces the Chai virus vaccine for the following (E1) or (E2): (E1); (E2) preparation of the blocking vaccine for the transmission of the Chai virus. The vaccine provided by the invention can block the spread of mosquitoes in the natural world and reduce the infection rate of mosquitoes in the natural environment, thus protecting the healthy population from the infection of the village card virus and preventing the sudden outbreak of the village card virus.

【技术实现步骤摘要】
ZIKV-NS1蛋白及其在制备寨卡病毒传播阻断疫苗中的应用
本专利技术涉及ZIKV-NS1蛋白及其在制备寨卡病毒传播阻断疫苗中的应用。
技术介绍
寨卡病毒(zikavirus，ZIKV)属于黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，最早在非洲乌干达丛林中被发现。寨卡病毒的天然蚊媒宿主是伊蚊，包括埃及伊蚊和白纹伊蚊。寨卡病毒呈球形，由囊膜、衣壳蛋白及单股正链RNA组成。寨卡病毒在进化过程中，逐渐分成两个世系—非洲世系和亚洲世系。在2007年，寨卡病毒只是在非洲和亚洲热带地区散在流行，直到2013年在法国波利尼西亚群岛暴发，随后在2015年在美洲地区大暴发。寨卡病毒感染后，典型的临床症状有发热、斑丘疹、关节及肌肉酸痛。2013年和2015年的寨卡病毒疫情表明，寨卡病毒也会引起格林巴利综合征和新生儿小头畸形。寨卡病毒主要由埃及伊蚊(Aedesaegypti)叮咬人体后感染传播。不存在埃及伊蚊的地区，白纹伊蚊(Aedesalbopictus)也被认为是寨卡病毒传播的重要媒介。目前认为，寨卡病毒的天然宿主仅有人、低等灵长类及伊蚊。在自然界中，寨卡病毒主要在两种模式中循环：1)城市循环：在城市型的寨卡病毒流行中，病毒在“人-伊蚊-人”之间传播；2)丛林循环：主要是通过热带丛林中的伊蚊及低等灵长类之间传播，此循环为寨卡病毒的原始循环。城市循环的寨卡病毒严格遵循“人-伊蚊-人”的传播途径，伊蚊是唯一的传播媒介。在病毒传播的过程中，感染的伊蚊通过叮咬将寨卡病毒注射到人体内(传播病毒)，病毒在人皮下角质细胞及树突状细胞中增殖；病毒扩散到血液后进一步感染血液中的各类免疫细胞形成病毒血症；在病毒血症期，病毒可通过吸血的方式被吸入到叮咬的蚊虫体内(病毒获取)。病毒感染蚊虫的唾液腺等组织，感染的伊蚊可再次传播病毒。寨卡病毒虽然从发现至今已有70多年的历史，但是目前仍无特效的治疗方法以及有效的可以应用的疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ZIKV-NS1蛋白及其在制备寨卡病毒传播阻断疫苗中的应用。本专利技术提供了一种蛋白质，命名为ZIKV-NS1蛋白，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由序列表的序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质；(a3)来源于寨卡病毒的与(a1)具有97％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。本专利技术还提供了一种融合蛋白，为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)或(b6)或(b7)：(b1)由序列表的序列5自N端第53至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)由序列表的序列5自N端第43至404位氨基酸残基组成的蛋白质；(b3)由序列表的序列5自N端第43至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b4)由序列表的序列5自N端第39至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b5)由序列表的序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b6)给序列表的序列5自N端第53-404位氨基酸残基组成的蛋白质的末端增加蛋白标签得到的蛋白质；(b7)将(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)或(b6)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质。编码所述ZIKV-NS1蛋白的基因也属于本专利技术的保护范围。编码所述融合蛋白的基因也属于本专利技术的保护范围。编码所述ZIKV-NS1蛋白的基因为如下(c1)或(c2)或(c3)所述的DNA分子：(c1)编码区如序列表的序列2所示的DNA分子；(c2)在严格条件下与(c1)限定的DNA序列杂交且编码所述ZIKV-NS1蛋白的DNA分子；(c3)来源于寨卡病毒的与(c1)限定的DNA序列至少具有97％以上同源性且编码所述ZIKV-NS1蛋白的DNA分子。编码所述融合蛋白的基因为如下(d1)或(d2)或(d3)或(d4)所述的DNA分子：(d1)编码区如序列表的序列4第7-1239位核苷酸所示的DNA分子；(d2)序列表的序列4所示的DNA分子；(d3)在严格条件下与(d1)或(d2))限定的DNA序列杂交且编码所述融合的DNA分子；(d4)来源于寨卡病毒的与(d1)或(d2)限定的DNA序列至少具有97％以上同源性且编码所述融合蛋白的DNA分子。以所述ZIKV-NS1蛋白为免疫原得到的抗体(抗体甲)也属于本专利技术的保护范围。以所述融合蛋白为免疫原得到的抗体(抗体乙)也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还保护所述ZIKV-NS1蛋白或所述融合蛋白的应用，为如下(e1)或(e2)：(e1)制备寨卡病毒疫苗；(e2)制备寨卡病毒传播阻断疫苗。本专利技术还保护一种疫苗，其活性成分为所述ZIKV-NS1蛋白或所述融合蛋白；所述疫苗为寨卡病毒疫苗或寨卡病毒传播阻断疫苗。本专利技术还保护所述抗体甲或所述抗体乙的应用，为如下(e1)或(e2)：(e1)制备寨卡病毒疫苗；(e2)制备寨卡病毒传播阻断疫苗。本专利技术还保护一种疫苗，其活性成分为所述抗体甲或所述抗体乙；所述疫苗为寨卡病毒疫苗或寨卡病毒传播阻断疫苗。以上任一所述疫苗具有阻断蚊虫从人获取登革热病毒的功能。以上任一所述疫苗具有阻断蚊虫从哺乳动物获取登革热病毒的功能。以上任一所述疫苗具有抑制蚊虫获取寨卡病毒的功能。以上任一所述疫苗具有抑制蚊虫传播寨卡病毒的功能。以上任一所述疫苗具有阻断蚊虫从人体感染寨卡病毒的功能。以上任一所述疫苗具有阻断蚊虫从哺乳动物体感染寨卡病毒的功能。以上任一所述疫苗具有预防寨卡病毒传播的功能。以上任一所述疫苗具有阻断寨卡病毒传播的功能。所述哺乳动物具体可为灵长类动物。所述哺乳动物具体可为小鼠。所述蚊虫可为伊蚊，具体可为埃及伊蚊。以上任一所述寨卡病毒具体可为PRVABC59毒株。以上任一所述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。对于虫媒传染病的预防，除了传统的疫苗策略外，还可以阻断媒介病原体在自然界的循环过程，从而降低媒介传染病在自然界的传播。因此，传播阻断疫苗是一种在宿主中免疫某种抗原蛋白阻断病原体传播途径，从而降低虫媒感染率及宿主发病率的免疫策略。本专利技术提供的疫苗，可以降低媒介蚊虫的感染率，从而作为寨卡病毒防治的效措施，具有重大的应用推广价值。本专利技术提供的疫苗可阻断寨卡病毒通过蚊虫在自然界的传播，降低自然环境中蚊虫的感染率，从而保护健康人群不受寨卡病毒感染，预防寨卡病毒突然大暴发。附图说明图1为实施例2中NS1含量的结果。图2为实施例2中感染率的结果。图3为实施例3中NS1含量的结果。图4为实施例3中感染率的结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。pFastBac-dual载体和大肠杆菌DH10Bac感受态：赛默飞世尔，货号10359-016。ZIKV病毒PRVABC59毒株，简称PRVABC59毒株：参考文献：LiuY,LiuJ,DuS,etal.Evolutionaryenhancement本文档来自技高网...

【技术保护点】
ZIKV‑NS1蛋白或具有所述ZIKV‑NS1蛋白的融合蛋白；所述ZIKV‑NS1蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由序列表的序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质；(a3)来源于寨卡病毒的与(a1)具有97％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.ZIKV-NS1蛋白或具有所述ZIKV-NS1蛋白的融合蛋白；所述ZIKV-NS1蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由序列表的序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质；(a3)来源于寨卡病毒的与(a1)具有97％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)或(b6)或(b7)：(b1)由序列表的序列5自N端第53至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)由序列表的序列5自N端第43至404位氨基酸残基组成的蛋白质；(b3)由序列表的序列5自N端第43至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b4)由序列表的序列5自N端第39至410位氨基酸残基组成的蛋白质；(b5)由序列表的序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b6)给序列表的序列5自N端第53-404位氨基酸残基组成的蛋白质的末端增加蛋白标签得到的蛋白质；(b7)将(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)或(b6)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质。3.编码权利要求1所述ZIKV-NS1蛋白的基因或编码权利要求1所述融合蛋白的基因。4.如权利要求3所述的基因，其特征在于：编码权利要求1所述ZIKV-NS1蛋白的基因为如下(c...

【专利技术属性】
技术研发人员：程功，杜森焱，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11