基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法及应用技术方案

本发明专利技术公开了一种基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)利用中空纤维柱澄清CHO细胞培养液，以除去细胞和细胞碎片；(2)利用中空纤维柱将(1)中澄清后的细胞培养液进行切向流过滤处理，以除去杂质后得到纯化后的重组猪瘟E2蛋白；本发明专利技术还公开了一种利用

Purification method and application of recombinant swine fever E2 protein based on CHO cell expression system

The present invention discloses a purification method of recombinant swine fever E2 protein based on CHO cell expression system. The method comprises the following steps: (1) clarifying CHO cell culture liquid by hollow fiber column to remove cell and cell debris; (2) a cell culture liquid after clarifying (1) in a hollow fiber column is used for tangential flow filtration. After purification, the purified recombinant swine fever E2 protein is purified.

【技术实现步骤摘要】
基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法及应用
本专利技术涉及到从CHO细胞表达重组蛋白的培养液中分离纯化重组蛋白的方法，特别是从CHO细胞表达重组猪瘟E2蛋白的培养液中分离纯化重组猪瘟E2蛋白的方法，属于生物医药提取

技术介绍
猪瘟在欧洲称为古典猪瘟(ClassicalSwineFever,CSF)是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus,CSFV)引起的一种急性、热性、致死性疾病。猪瘟具有高度接触传染性、发病急、高热稽留和小血管壁变性引起广泛出血、梗塞和坏死等病变特征。家养和野生猪是其唯一的天然宿主。世界动物卫生组织(OIE)将其定为A类传染病，我国《动物防疫法》将其列为一类传染病。猪瘟是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属成员，为单链线状RNA病毒。病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有脆弱的纤突结构。CSFV基因组长约12.5kb，仅含有1个大的开放性阅读框(ORF)，此ORF编码约3898个氨基酸残基、分子量约438kDa的多聚蛋白。此多聚蛋白在翻译的同时和在翻译后经病毒与宿主细胞蛋白酶加工本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：1)利用

【技术特征摘要】
1.一种基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：1)利用flux仪器以及中空纤维柱澄清CHO细胞培养液，以除去细胞和细胞碎片；以及2)利用flux仪器以及中空纤维柱将步骤1)中澄清后的细胞培养液进行切向流过滤处理，以除去杂质后得到纯化后的重组猪瘟E2蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中的中空纤维柱是0.2μm中空纤维柱。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，利用flux仪器和中空纤维柱澄清CHO细胞培养液的方法包括以下步骤：1-1)安装Filter，并用ddH2O清洗仪器管道和中空纤维柱，直至流出液体pH为7；1-2)仪器校准和测试，其中，校准包括Feedpump校准和Permeatepump校准，测试包括管路泄露测试和Fliter水通量测定；1-3)系统平衡：用缓冲液平衡整个系统管路及Fliter5min，然后转移多余缓冲液；1-4)样品澄清：1-4-1)将CHO细胞培养液加入到tank中，启动Feed泵到4000S-1，循环一定时间后经0.2μm中空纤维柱微滤，收集透过液，待用；1-4-2)然后将缓冲液加入tank中的细胞培养液中，重悬，其中缓冲液与细胞培养液的体积比为1:1；开启Feed泵一定时间，收集透过液，得到第一批澄清液，待用；1-4-3)重复步骤1-4-2)2次，共得到3批澄清液；1-4-4)将上述透过液以及三批澄清液混合均匀，得到澄清后的CHO细胞培养液；以及1-5)Filter的清洗和保存，使用缓冲液清洗Filter，清洗完毕后使用0.1MNaOH溶液保存Filter。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的中空纤维柱是30kD中空纤维柱。5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，利用flux仪器和中空纤维柱进行切向流过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱泓，吴有强，闻雪，贾宝琴，查银河，
申请(专利权)人：浙江海隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33