用于修饰基因组DNA的方法和组合物技术

组合物和方法涉及对内源基因组DNA区域进行序列修饰。某些方面涉及对细胞中的靶基因组DNA区域进行位点特异性序列修饰的方法，其包括：使细胞与活化组合物接触；用包含(a)供体DNA和(b)DNA消化剂的转染组合物转染所述细胞；其中所述供体DNA包含：(i)包含与所述靶基因组DNA区域同源之核酸序列的同源区域；以及(ii)序列修饰区域；并且其中在所述靶基因组DNA区域处特异性修饰所述基因组DNA序列。

Methods and compositions for modifying genomic DNA

The composition and method involve sequence modification of the endogenous genomic DNA region. Some aspects involve the method of modifying the loci specific sequence of the target genome DNA region in the cell, which includes: contacting the cell with the activated composition; transfecting the cells with a transfection composition containing the (a) donor DNA and (b) DNA digestive agent; the donor DNA contains: (I) including the target genome DNA region of the target. The homologous region of the nucleic acid sequence of the source; and the modified region of the (II) sequence; and it specifically modifies the DNA sequence of the genome at the target genome DNA region.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于修饰基因组DNA的方法和组合物
技术介绍
1.
本专利技术一般地涉及生物
更特别地，其涉及用于修饰基因组DNA的新方法和组合物。2.相关领域的描述靶向基因组修饰具有治疗疾病的巨大潜力。在靶位点修饰DNA或位点特异性转基因整合可提供更有效的基因治疗方法。然而，目前的基因组工程方法提供非常低的修复或编辑效率，并且具有引入有害或不期望的DNA序列和后果的潜在可能。目前的基因治疗的治疗方法利用了病毒载体进行基因转移的用途。然而，涉及病毒载体的基因治疗方法具有以下缺点：将病毒序列引入人宿主中，这可能触发宿主免疫原性。尽管存在用于基因治疗的非病毒方法，但是由于这些方法的低效率、毒性或缺乏特异性，其在临床环境中的使用受到阻碍。用于基因组工程的更有效的方法还提供了离体治疗上的进步，因为其可以从患者中分离细胞，修饰基因组以校正突变或位点特异性地整合转基因，并将患者自己的细胞移植回体内以达到治疗效果。目前的方法过于无效或过于有毒而无法达到这些效果。在本领域中需要高效、无毒且稳定的允许定点基因组DNA修饰的技术。
技术实现思路
组合物和方法涉及对内源靶基因组DNA序列进行序列修饰。某些方面涉及对细本文档来自技高网...

【技术保护点】
对细胞中的靶基因组DNA区域进行位点特异性序列修饰的方法，其包括：使所述细胞与活化组合物接触；用包含(a)供体DNA和(b)DNA消化剂的非病毒转染组合物转染所述细胞；其中所述供体DNA包含：(i)包含与所述靶基因组DNA区域同源之核酸序列的同源区域；以及(ii)序列修饰区域；并且其中基因组DNA序列在所述靶基因组DNA区域处被特异性修饰。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.13 US 62/146,6181.对细胞中的靶基因组DNA区域进行位点特异性序列修饰的方法，其包括：使所述细胞与活化组合物接触；用包含(a)供体DNA和(b)DNA消化剂的非病毒转染组合物转染所述细胞；其中所述供体DNA包含：(i)包含与所述靶基因组DNA区域同源之核酸序列的同源区域；以及(ii)序列修饰区域；并且其中基因组DNA序列在所述靶基因组DNA区域处被特异性修饰。2.权利要求1所述的方法，其中所述细胞是免疫细胞。3.权利要求2所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞。4.权利要求3所述的方法，其中所述T细胞是原代T细胞。5.权利要求4所述的方法，其中所述活化组合物包含抗CD3和抗CD28抗体。6.权利要求5所述的方法，其中所述转染细胞包括对所述细胞进行流式电穿孔。7.对细胞中的靶基因组DNA区域进行位点特异性序列修饰的方法，其包括：使所述细胞与活化组合物接触；用包含(a)供体DNA和(b)DNA消化剂的转染组合物转染所述细胞；其中所述供体DNA包含：(i)包含与所述靶基因组DNA区域同源之核酸序列的同源区域；以及(ii)序列修饰区域；并且其中基因组DNA序列在所述靶基因组DNA区域处被特异性修饰。8.权利要求7所述的方法，其中所述转染细胞包括对所述细胞进行电穿孔。9.权利要求8所述的方法，其中所述电穿孔是使用流式电穿孔仪器的流式电穿孔。10.权利要求7至9中任一项所述的方法，其中在使所述细胞与活化组合物接触后少于7天的时间段时转染所述细胞。11.权利要求10所述的方法，其中在使所述细胞与活化组合物接触后少于3天的时间段时转染所述细胞。12.权利要求11所述的方法，其中在使所述细胞与活化组合物接触后2天或更短的时间段时转染所述细胞。13.权利要求12所述的方法，其中在使所述细胞与活化组合物接触后两天转染所述细胞。14.权利要求7至13中任一项所述的方法，其中所述DNA消化剂选自TALEN、转座酶、整合酶和核酸酶。15.权利要求7至14中任一项所述的方法，其中所述DNA消化剂被编码于一个或更多个RNA上。16.权利要求7至15中任一项所述的方法，其中所述DNA消化剂是核酸酶。17.权利要求16所述的方法，其中所述DNA消化剂是Cas9。18.权利要求7至17中任一项所述的方法，其中所述转染组合物还包含引导RNA。19.权利要求16所述的方法，其中所述核酸酶是位点特异性核酸酶。20.权利要求7至19中任一项所述的方法，其中所述供体DNA是质粒。21.权利要求7至19中任一项所述的方法，其中所述供体DNA包含转基因。22.权利要求7至19中任一项所述的方法，其中所述供体DNA是寡核苷酸。23.权利要求7至19中任一项所述的方法，其中所述供体DNA是单链寡核苷酸。24.权利要求7至23中任一项所述的方法，其中所述转染组合物中供体DNA的浓度为约10至约500μg/mL。25.权利要求7至24中任一项所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。26.权利要求25所述的方法，其中所述细胞是人细胞。27.权利要求25所述的方法，其中所述细胞是成纤维细胞。28.权利要求25所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是外周血淋巴细胞。29.权利要求25所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是原代T细胞。30.权利要求25所述的方法，其中所述细胞是自然杀伤(NK)细胞。31.权利要求29或30所述的方法，其中所述活化组合物包含抗CD3和抗CD28抗体。32.权利要求25所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是干细胞。33.权利要求32所述的方法，其中所述干细胞是造血干细胞。34.权利要求32所述的方法，其中所述细胞是间充质干细胞。35.权利要求25所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是原代细胞。36.权利要求7至35中任一项所述的方法，其中所述靶基因组DNA序列包含疾病相关基因。37.权利要求7至36中任一项所述的方法，其中所述供体DNA包含疾病相关基因。38.权利要求7至37中任一项所述的方法，其中所述供体DNA包含嵌合抗原受体(CAR)。39.权利要求38所述的方法，其中所述供体DNA的序列修饰区域包含CAR。40.权利要求7至36中任一项所述的方法，其中所述供体DNA包含具有至少10个核酸的同源序列的同源区域。41.权利要求40所述的方法，其中所述供...

【专利技术属性】
技术研发人员：李林鸿，马杜苏登·佩什瓦，
申请(专利权)人：美克斯细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US