稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的细胞系及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供一种稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的Vero细胞系，其保藏号为CGMCC No.14316。该细胞系不仅能识别非洲猪瘟的多克隆抗体，而且还能与非洲猪瘟感染猪的阳性血清发生特异性反应。本发明专利技术的非洲猪瘟P54抗原的单克隆Vero细胞系可用于稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白，可作为细胞模型或病毒感染模型进行应用，细胞传代稳定性好，生长速度快，培养条件简单，能保证大量供应，对于非洲猪瘟的检测及致病机理研究具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的细胞系及其制备与应用
本专利技术涉及基因工程及免疫
，具体地说，涉及一种稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的细胞系及其制备方法与应用。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一种猪的烈性、高度接触性传染病。1921年，肯尼亚首次记录了非洲猪瘟的爆发，目前非洲大陆次撒哈拉地区的大多数非洲国家均有流行。该病于1957年传入欧洲南部地区，1971年传入加勒比海地区和南美洲，2007年传入高加索地区和俄罗斯，现在仍在非洲、南撒丁岛、高加索地区以及俄罗斯流行。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将非洲猪瘟列为一类动物疫病，在《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中，ASF被列为优先防范的13种重大外来动物疫病之一。目前我国还未发现有该病，但2007年,非洲猪瘟传播至欧亚接壤的高加索地区并很快传至格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆以及俄罗斯地区,且呈现出继续蔓延的趋势，这使得我国对该病的防控形势十分严峻。ASFV属于非洲猪瘟病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的Vero细胞系，其特征在于，所述细胞系为P54稳定克隆细胞系，保藏号为CGMCC No.14316。

【技术特征摘要】
1.一种稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的Vero细胞系，其特征在于，所述细胞系为P54稳定克隆细胞系，保藏号为CGMCCNo.14316。2.一种重组慢病毒表达载体pLV-ASFV-P54-AG，其特征在于，所述表达载体按如下方法构建得到：(1)以人工合成的非洲猪瘟病毒全长基因序列为模板，利用overlapPCR扩增出P54基因序列与AzamiGreen基因序列的融合片段，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后进行胶回收；(2)用限制性内切酶MluI和NotI双酶切PCR胶回收产物以及慢病毒载体pLV-puro，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后进行胶回收，并利用T4DNA连接酶连接回收的P54-AG基因片段与pLV-puro载体回收片段，构建重组慢病毒表达载体pLV-ASFV-P54-AG；其中，步骤(1)中，用于扩增非洲猪瘟病毒P54基因的特异性引物对为：上游引物序列P54-F为：5’-CGACGCGTCGATGGATTCTGAATTTTTTCAAC-3’；下游引物序列P54-R为：5’-CACGCTCACCATTCCTTGGGTCGATCCTCCTCCTGAACCACCACTACCACCCGATCCTCCGCCGCCCAAGGAGTTTTC-3’；用于扩增AzamiGreen基因序列的特异性引物对为：上游引物序列AG-F为：5’-GAAAACTCCTTGGGCGGCGGAGGATCGGGTGGTAGTGGTGGTTCAGGAGGAGGATCGACCCAAGGAATGGTGAGCGTG-3’，下游引物序列AG-R为...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯春燕，杜方原，王彩霞，方志强，张永宁，吴绍强，林祥梅，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11