【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及基因编辑方法，其包括使用电穿孔增强病毒转导至细胞中，具体地涉及编辑基因的方法，其包括敲除感兴趣的基因并经由共电穿孔插入新基因和/或病毒载体。本公开还涉及使用该方法制备的修饰细胞，以及将治疗剂递送至包含修饰细胞的患者的方法。
技术介绍
1、电穿孔是将核酸加载到细胞中以实现加载细胞的转染的方法。电穿孔、电转染和电加载的术语在文献中可以互换使用，分别强调该技术的一般含义、转基因表达和分子转移到细胞质中。以下将这种转染细胞的方法称为电加载，即使用电穿孔，不使用转染试剂或所装载的核酸的基于生物学的包装，例如病毒载体或病毒样颗粒，仅依靠施加在细胞上的瞬态电场来促进细胞的加载的方法。
2、在电穿孔中，核转染是一种特殊的转染试剂，可帮助将细胞质中的dna转移至细胞核。据报道，核转染可使用经过专有核转染剂处理的质粒dna转染静息t细胞和nk细胞(maasho et al.,2004)。还表明了嵌合受体的静息t细胞核转染可以导致特异性靶细胞杀伤(finney,et al,2004)。
3、此外，还可以向细胞加载mrn...
【技术保护点】
1.使用电穿孔增强病毒转导至细胞的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中所述病毒、病毒载体或病毒样颗粒与基因编辑剂共电穿孔。
3.权利要求2所述的方法，其中所述基因编辑剂选自CRISPR CAS-9、RNA、质粒、mega-TALS、基因写入、DNaseI、Benzonase、核酸外切酶I、核酸外切酶III、绿豆核酸酶、核酸酶BAL31、RNase I、51核酸酶、Lambda核酸外切酶、RecJ、T7核酸外切酶、锌指核酸酶、大范围核酸酶、转录活化剂样效应核酸酶和位点特异性核酸酶。
4.权利要求1所述的方法，其中大于2...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.使用电穿孔增强病毒转导至细胞的方法，所述方法包括：
2.权利要求1所述的方法，其中所述病毒、病毒载体或病毒样颗粒与基因编辑剂共电穿孔。
3.权利要求2所述的方法，其中所述基因编辑剂选自crispr cas-9、rna、质粒、mega-tals、基因写入、dnasei、benzonase、核酸外切酶i、核酸外切酶iii、绿豆核酸酶、核酸酶bal31、rnase i、51核酸酶、lambda核酸外切酶、recj、t7核酸外切酶、锌指核酸酶、大范围核酸酶、转录活化剂样效应核酸酶和位点特异性核酸酶。
4.权利要求1所述的方法，其中大于20％的所述共电穿孔的细胞表达期望的蛋白质或肽。
5.权利要求4所述的方法，其中25％-35％的所述共电穿孔细胞表达所述期望的蛋白质或肽。
6.权利要求1所述的方法，其中与所述待修饰的细胞相比，所述共电穿孔的细胞的活力下降范围为25％-50％。
7.权利要求1所述的方法，其中与所述待修饰的细胞相比，所述共电穿孔的细胞的活力下降不超过20％。
8.权利要求1所述的方法，其中与所述待修饰的细胞相比，所述共电穿孔的细胞的活力下降不超过10％。
9.权利要求1所述的方法，其中与所述待修饰的细胞相比，所述共电穿孔的细胞的活力下降不超过5％。
10.权利要求1所述的方法，其中所述待修饰的细胞在1×105至1×1011范围的细胞群内。
11.权利要求1所述的方法，其中所述待修饰的细胞被浓缩至10μl至1l范围的体积。
12.权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述共电穿孔的细胞施用于患者的步骤。
13.权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·H·佛斯特，J·布拉迪，
申请(专利权)人：美克斯细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：
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