【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于合成生物学、食品和微生物发酵领域，涉及一株无需抗生素高产乳糖-n-新四糖(lacto-n-neotetraose，lnnt)整合型工程菌的构建及其应用。
技术介绍
1、母乳寡糖(human milk oligosaccharides， hmos)是人类母乳中仅次于乳糖和脂肪的第三大固体组分。hmos可以被肠道中的有益微生物菌群利用，具有促进双歧杆菌的增殖、阻碍病原体的粘附、调节肠道上皮细胞应答、调节肠道菌群、增强人体免疫力等功能。
2、乳糖-n-新四糖(lacto-n-neotetraose，lnnt)是母乳中一种主要的中性非岩藻糖基hmos，约占总hmos的2～7%。分子式为c26h45no21。
3、2023年10月7日，正式批准lnnt作为食品营养强化剂应用于婴幼儿配方食品、儿童调制乳粉及特殊医学用途婴儿配方食品中。
4、lnnt的生产方法主要有以下4种：
5、（1）生物提取法。生物体中lnnt的天然含量很低，且从生物体中提取lnnt的工艺复杂。
6、（2）...
【技术保护点】
1.一种重组大肠杆菌，其含有编码β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的外源lgtA基因；
2. 根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其中，所述lgtA基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:19所示。
3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其中，所述重组大肠杆菌含有编码β-1,4-半乳糖基转移酶的galT基因和编码尿苷二磷酸葡萄糖-4-差向异构酶的galE基因中的一种以上；
4. 根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其中，所述galT基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:18所示；所述galE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。<...
【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其含有编码β-1,3-n-乙酰氨基葡萄糖转移酶的外源lgta基因；
2. 根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其中，所述lgta基因的核苷酸序列如seq idno:19所示。
3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其中，所述重组大肠杆菌含有编码β-1,4-半乳糖基转移酶的galt基因和编码尿苷二磷酸葡萄糖-4-差向异构酶的gale基因中的一种以上；
4. 根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其中，所述galt基因的核苷酸序列如seq idno:18所示；所述gale基因的核苷酸序列如seq id no:20所示。
5. 根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其中，所述lgta基因和所述gale基因采用t7启动子；所述galt基因采用t7启动子、tac启动子、lac uv5启动子或t23启动子，所述t23启动子的核苷酸序列如seq id no:22所示。
6.根据权利要求3所述的重组大肠杆菌，其中，所述gale基因、所述lgta基因和所述galt基因按照第一启动子-gale基因-rbs-lgta基因-第二启动子-galt基因的排列顺序构建于质粒载体中或者共同整合于所述重组大肠杆菌基因组一个或多个插入序列is1中；
7.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌，其中，第一启动子-gale基因-rbs-lgta基因-第二启动子-galt基因在所述重组大肠杆菌基因组中的拷贝数为20-30；或者，所述质粒载体选自于prsfduet1、pre57-ter或pet28a。
8.根据权利要求7所述的重组大肠杆菌，其中，第一启动子-gale基因-rbs-lgta基因-第二启动子-galt基因在所述重组大肠杆菌基因组中的拷贝数为20、21、22、23、24、25、26、27或28。
9. 根据权利要求1至8任意一项所述的重组大肠杆菌，其中，所述重组大肠杆菌为重组大肠杆菌bl21 (de3)菌株；
10. 根据权利要求9所述的重组大肠杆菌，其中，所述galf基因编码氨基酸序列如seqid no:5所示的葡萄糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶；
11.根据权利要求10所述的重组大肠杆菌，其中，所述galf基因插入所述重组大肠杆菌基因组中缺失所述wcaj基因的位置；
12. 一种重组大肠杆菌，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为cgmccno.：29790。
13. 一种重组大肠杆菌，其在大肠杆菌bl21 (de3)菌株的基础上进行了如下的基因改造：δlacz、δnagb、δaraa、δpfka::lacy、δasla::fbp、δwecb、δgltb::tet-glms-tet-glna、δugd、△wcaj::galf，并且t7启动子-gale基因-rbs-lgta基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴燕，马振锋，邢丽彤，王舒，田振华，姚斐，李妙，徐泓，黄辰曦，
申请(专利权)人：虹摹生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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