一种实现人的诱导多能干细胞来源的造血干祖细胞强效体内移植的方法技术

本发明专利技术涉及一种实现人的诱导多能干细胞来源的造血干祖细胞强效体内移植的方法，所述的方法通过MLL‑AF4单因子诱导。其优点表现在：本发明专利技术的方法简便、高效，能够诱导人的iPS细胞成为具有强效体内移植并重建多系造血的HSC，突破了该领域的诸多难点，并主要包括如下优点：(1)单个因子诱导，极大地减少了需要添加的因子数目，进而能显著地简化实验操作、提高实验效率；(2)采取质粒介导的诱导方法，避免了慢病毒介导时的基因组插入继而可能诱发基因突变的风险；(3)体内移植效率高达20％以上；(4)纠正了iPSC‑HSPC在体内的髓系偏倚现象，能在体内全面地重建髓系、淋系和红系。

【技术实现步骤摘要】
一种实现人的诱导多能干细胞来源的造血干祖细胞强效体内移植的方法
本专利技术涉及生物
，具体地说，是一种实现人的诱导多能干细胞来源的造血干祖细胞强效体内移植的方法。
技术介绍
诱导多能干细胞(iPSC)技术是将已分化的体细胞重编程为多能干细胞，而多能干细胞能分化为所有器官、组织，因而是再生医学领域的一项重要变革，并于2012年获得了诺贝尔生理医学奖。造血干细胞(HSC)是唯一能够分化为全部血液细胞的成体干细胞，HSC在临床上有重要的应用和巨大的需求。然而HSC的来源却十分有限，主要包括骨髓的捐赠，但一方面，这种方法获得的HSC远远无法满足临床的需求，另一方面，骨髓配型的限制使得许多患者无法获得能够用于移植的HSC供体。自从2007年，人的iPSC能够在体外制备以来，利用iPSC在体外分化为可以重建体内造血的人的HSC成为了近10年来的研究热点，但同样是研究难点。到目前为止，只有两篇报道成功地获得了人iPSC来源的具有体内移植能力的HSC，前者利用了五个由慢病毒介导的转录因子(ERG,HOXA9,RORA,SOX4,MYB)进行HSC分化的诱导，但是得到的HSC的移植能力低下，且在本文档来自技高网...

【技术保护点】
MLL‑AF4基因或蛋白在制备造血干祖细胞中的应用。

【技术特征摘要】
1.MLL-AF4基因或蛋白在制备造血干祖细胞中的应用。2.MLL-AF4基因或蛋白作为唯一转录因子在制备造血干祖细胞中的应用。3.包含MLL-AF4基因或其片段的质粒在制备造血干祖细胞中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包含MLL-AF4基因或其片段的质粒的构建方法为：用肽段T2A进行MLL-AF4与EGFP的连接，通过PCR克隆出MLL-AF4-EGFP的片段，然后将MLL-AF4-T2A-EGFP片段插入到pTRE-Tight质粒中的TRE启动子下游，进而构建得到。5.一种由诱导多能干细胞制备造血干祖细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)诱导多能干细胞体外诱导分化为包含了造血干祖细胞的血液细胞；(2)步骤(1)得到的血液细胞经过包含MLL-AF4基因的质粒的体外诱导。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)为单层培养法在体外将诱导多能干细胞诱导分化为血液细胞。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包含MLL-AF4基因的质粒通过如下方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晗，谭宇婷，叶林，简悦威，陈赛娟，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：上海,31