用于产生嵌合多肽的方法和组合物技术
Methods and compositions for producing chimeric peptides
The present invention provides a method and a composition for converting the first polypeptide to the chimeric polypeptide. The invention includes two carriers: the first carrier including the sequence of the first polypeptide and the second carrier including the second polypeptide. The carrier includes complementary site-specific recombination motif makes two carriers between site-specific recombination leads to a chimeric polypeptide comprising at least a portion of the first polypeptide and at least a portion of the more than 2 peptide in the. The loci specific recombinant motif can be located within the intron or in the coding sequence on the first or second vectors.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生嵌合多肽的方法和组合物专利技术背景已利用不同的方法来鉴定能够结合特定抗原的结合部分。现有技术方法已被用于产生抗体或抗体片段，例如IgG、IgM、IgA、IgD、IgE、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、Feb、scFv或SMIP。因为这些类型的结合部分具有截然不同的性质，所以将第一类型的结合部分转化为第二类型的结合部分有时是有利的。用于将第一类型的多肽转化为第二类型的多肽的某些现有方法可能是无效率的。因此，本领域存在对用于将第一类型的多肽有效转化为第二类型的多肽(例如嵌合多肽)的组合物和方法的需要。专利技术概述本专利技术提供将第一类型的多肽转化至包括第一类型的多肽的至少一部分和优选其它多肽或其片段的嵌合多肽(例如不同类型的多肽)的方法和组合物。在一个实施方案中，本专利技术包括两种载体：包括第一多肽的序列(例如结合部分)的第一载体和包括第二多肽的序列(例如构架)的第二载体。要认识到，术语“第一载体”和“第二载体”和术语“第一多肽”和“第二多肽”可以是互换的。载体可进一步包括互补位点特异性重组基序，使得两种载体间的位点特异性重组导致包括第一多肽的至少一部分和第二载体的第二多肽的至少一部分的嵌合多肽的产生。第一个方面，本专利技术的特征在于将单链可变片段(scFv)转化至嵌合多肽的方法。所述方法包括：(a)提供以从5’到3’的顺序包括以下的第一载体，第一哺乳动物表达控制基序，第一大肠杆菌(E.coli)表达控制基序，编码scFv的重链可变区(VH)的序列，第一位点特异性重组基序，编码scFv的轻链可变区(VL)的序列，5’哺乳动物剪接位点(Mam...
【技术保护点】
一种将单链可变片段(scFv)转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括(a) 提供以从5’到3’的顺序包含以下的第一载体，第一哺乳动物表达控制基序，第一大肠杆菌表达控制基序，编码scFv的重链可变区(VH)的序列，第一位点特异性重组基序，编码scFv的轻链可变区(VL)的序列，5’哺乳动物剪接位点(Mam5’SS)，融合展示蛋白序列，3’哺乳动物剪接位点(Mam3’SS)，和编码轻链恒定区(CL)的序列，和(b) 提供以从5’到3’的顺序包含以下的第二载体，第二哺乳动物表达控制基序，第二位点特异性重组基序，和编码多肽的序列；和(c) 在重组酶存在下使第一载体和第二载体接触，其中所述重组酶使第一载体和第二载体以位点特异性方式组合形成整合载体，其中所述整合载体表达与CL融合的VL和与所述多肽融合的单独VH，从而在表达时将scFv转化至嵌合多肽。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.12 US 62/174994;2015.09.17 US 62/2200601.一种将单链可变片段(scFv)转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括(a)提供以从5’到3’的顺序包含以下的第一载体，第一哺乳动物表达控制基序，第一大肠杆菌表达控制基序，编码scFv的重链可变区(VH)的序列，第一位点特异性重组基序，编码scFv的轻链可变区(VL)的序列，5’哺乳动物剪接位点(Mam5’SS)，融合展示蛋白序列，3’哺乳动物剪接位点(Mam3’SS)，和编码轻链恒定区(CL)的序列，和(b)提供以从5’到3’的顺序包含以下的第二载体，第二哺乳动物表达控制基序，第二位点特异性重组基序，和编码多肽的序列；和(c)在重组酶存在下使第一载体和第二载体接触，其中所述重组酶使第一载体和第二载体以位点特异性方式组合形成整合载体，其中所述整合载体表达与CL融合的VL和与所述多肽融合的单独VH，从而在表达时将scFv转化至嵌合多肽。2.权利要求1的方法，其中所述第一载体是噬菌粒载体。3.权利要求1或2的方法，其中所述第二载体是噬菌粒载体。4.权利要求1的方法，其中所述第一载体是噬菌粒载体，所述第二载体不是噬菌粒载体。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述第一载体另包含：位于所述第一哺乳动物表达控制基序和所述第一大肠杆菌表达控制基序之间的第二5’哺乳动物剪接位点(Mam5’SS)，和位于所述第一大肠杆菌表达控制基序和编码scFv的所述VH的所述序列之间的第二3’哺乳动物剪接位点(Mam3’SS)。6.权利要求5的方法，其中所述第一载体另包含位于所述第二3’哺乳动物剪接位点和编码scFv的所述VH的所述序列之间的前导序列。7.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述第一载体另包含位于所述第一大肠杆菌表达控制基序和编码scFv的所述VH的所述序列之间的前导序列。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述第一载体另包含：位于编码scFv的所述VH的所述序列和所述第一位点特异性重组基序之间的其它5’哺乳动物剪接位点(Mam5’SS)，和位于所述第一位点特异性重组基序和编码scFv的所述VL的所述序列之间的其它3’哺乳动物剪接位点(Mam3’SS)。9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述第二载体另包含：位于所述第二哺乳动物表达控制基序和所述第二位点特异性重组基序之间的另外的5’哺乳动物剪接位点(Mam5’SS)，和位于所述第二位点特异性重组基序和编码所述多肽的所述序列之间的另外的3’哺乳动物剪接位点(Mam3’SS)。10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述多肽包含重链恒定区。11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述整合载体表达IgG抗体。12.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述多肽包含融合蛋白。13.权利要求12的方法，其中所述融合蛋白包含标签。14.权利要求13的方法，其中所述标签是FLAG、HA、Myc、V5、His、GST、MBP、AviTag或链霉抗生物素标签。15.权利要求12-14中任一项的方法，其中所述融合蛋白包含荧光蛋白。16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供包含编码所述重组酶的多核苷酸的其它载体。17.一种将第一多肽转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括：(a)提供：i.包含编码第一多肽的第一多核苷酸的第一载体，其中所述第一多核苷酸的第一多肽编码区包含第一位点特异性重组基序；ii.包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸的第二载体；和iii.能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组的重组酶；和(b)用所述重组酶使所述第一载体和所述第二载体重组，从而形成编码包含以下的嵌合多肽的重组载体：i.所述第一多肽或其部分，和ii.所述第二多肽或其部分。18.权利要求17的方法，其中所述第一多肽包含接头，编码所述接头的所述多核苷酸的部分包含所述第一位点特异性重组基序。19.权利要求17或18的方法，其中所述第一载体或所述第二载体包含编码所述重组酶的多核苷酸。20.权利要求17或18的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供包含编码所述重组酶的多核苷酸的其它载体。21.一种将第一多肽转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括：(a)提供：i.包含编码第一多肽的第一多核苷酸的第一载体，所述第一多核苷酸含有包含第一位点特异性重组基序的内含子；ii.包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸的第二载体；和iii.能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组的重组酶；和(b)用所述重组酶使所述第一载体和所述第二载体重组，从而形成编码包含以下的嵌合多肽的重组载体：i.所述第一多肽或其部分，和ii.所述第二多肽或其部分。22.权利要求21的方法，其中编码所述第一多肽的所述第一多核苷酸的部分包含所述内含子。23.权利要求21的方法，其中编码所述第一多肽的所述第一多核苷酸的部分不含所述内含子。24.权利要求21-23中任一项的方法，其中所述第一载体或所述第二载体包含编码所述重组酶的多核苷酸。25.权利要求21-24中任一项的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供包含编码所述重组酶的多核苷酸的其它载体。26.一种将第一多肽转化至至少两种嵌合多肽之一的方法，所述方法包括：(a)提供第一载体，其包含编码包含第一位点特异性重组基序和备选位点特异性重组基序的第一多肽的第一多核苷酸，和i.第二载体，其包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸；和能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组的重组酶；或ii.第三载体，其包含不同于所述第一位点特异性重组基序的第三位点特异性重组基序和编码备选多肽的备选多核苷酸；和能够使所述备选位点特异性重组基序与所述第三位点特异性重组基序重组的备选重组酶；和(b)使所述第一载体i.与所述第二载体用所述重组酶进行重组，从而形成编码包含所述第一多肽或其部分和所述第二多肽或其部分的嵌合多肽的重组载体；和/或ii.与所述第三载体用所述备选重组酶进行重组，从而形成编码包含所述第一多肽或其部分和所述备选多肽或其部分的嵌合多肽的重组载体。27.权利要求26的方法，其中所述第一多核苷酸包含所述第一位点特异性重组基序。28.权利要求26或27的方法，其中所述第一多核苷酸含有包含所述第一位点特异性重组基序的内含子。29.权利要求26-28中任一项的方法，其中所述第一载体或所述第二载体包含编码所述重组酶的多核苷酸，和/或所述第一载体或所述第三载体包含编码所述备选重组酶的多核苷酸。30.一种将scFv转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括：(a)提供：i.第一载体，其包含编码包含scFv的第一多肽的第一多核苷酸，所述scFv包含轻链可变结构域、接头区和重链可变结构域，编码所述接头区的所述第一多核苷酸的部分包含第一位点特异性重组基序；ii.包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸的第二载体；和iii.重组酶，其能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组，和(b)用所述重组酶使所述第一载体和所述第二载体重组，从而形成编码包含以下的嵌合多肽的重组载体：i.所述轻链可变结构域和/或所述重链可变结构域，和ii.所述第二多肽或其部分；其中所述嵌合多肽不是scFv。31.权利要求17-30中任一项的方法，其中所述第一多肽包含抗体或抗体片段。32.权利要求31的方法，其中所述抗体或抗体片段是人、小鼠、山羊、绵羊、兔、鸡、豚鼠、仓鼠、马或大鼠抗体或抗体片段。33.权利要求31或32的方法，其中所述抗体是IgG、IgA、IgD、IgE、IgM或胞内抗体。34.权利要求33的方法，其中所述抗体是IgG。35.权利要求31或32的方法，其中所述抗体片段是scFv、单域抗体(sdAb)、dAb、Fab、Fab'、Fab'2、F(ab')2、Fd、Fv、Feb或SMIP。36.权利要求35的方法，其中所述抗体片段是scFv。37.权利要求36的方法，其中所述scFv是细胞溶胶稳定的scFv。38.权利要求36或37的方法，其中所述scFv是牛scFv。39.权利要求35的方法，其中所述sdAb是骆驼VHH。40.权利要求36-38中任一项的方法，其中所述scFv包含位于所述scFv的轻链可变结构域和重链可变结构域之间的接头，所述接头包含所述第一位点特异性重组基序。41.权利要求36-40中任一项的方法，其中所述嵌合多肽包含所述scFv的轻链可变结构域和/或所述scFv的重链可变结构域。42.权利要求17-41中任一项的方法，其中所述第一多肽包含嵌合抗原受体(CAR)。43.权利要求42的方法，其中所述第一多肽包含CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。44.权利要求43的方法，其中所述嵌合多肽包含所述第一多肽的所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。45.权利要求44的方法，其中所述嵌合多肽另包含位于以下之间的肽接头结构域：(i)所述第一多肽的所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域，和(ii)所述第一多肽或所述其部分。46.权利要求45的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约0-250个氨基酸。47.权利要求46的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-250个氨基酸。48.权利要求47的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-50个氨基酸。49.权利要求47的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-10、10-20、20-50或50-100个氨基酸。50.权利要求17-49中任一项的方法，其中所述嵌合多肽包含抗体或抗体片段。51.权利要求50的方法，其中所述抗体或抗体片段是人、小鼠、山羊、绵羊、兔、鸡、豚鼠、仓鼠、马或大鼠抗体或抗体片段。52.权利要求50的方法，其中所述抗体是IgG、IgA、IgD、IgE、IgM或胞内抗体。53.权利要求52的方法，其中所述抗体是IgG。54.权利要求53的方法，其中所述第一多肽包含所述IgG的可变轻链和/或可变重链。55.权利要求53或54的方法，其中所述第一载体包含编码所述IgG的恒定结构域的多核苷酸。56.权利要求55的方法，其中所述恒定结构域包含CL结构域或Fc结构域。57.权利要求56的方法，其中所述恒定结构域含有包含所述Fc结构域的CH结构域。58.权利要求50的方法，其中所述抗体片段是scFv、dAb、Fab、Fab'、Fab'2、F(ab')2、Fd、Fv、Feb、VHH或SMIP。59.权利要求58的方法，其中所述抗体片段是scFv。60.权利要求59的方法，其中所述scFv是细胞溶胶稳定的scFv。61.权利要求59或60的方法，其中所述scFv是牛或骆驼scFv。62.权利要求17-61中任一项的方法，其中所述嵌合多肽包含嵌合抗原受体(CAR)。63.权利要求62的方法，其中所述第二多肽包含CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。64.权利要求63的方法，其中所述第一多肽包含scFv，所述嵌合多肽包含所述scFv的轻链可变结构域和所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。65.权利要求64的方法，其中所述嵌合多肽另包含位于以下之间的肽接头结构域：(i)所述scFv的所述轻链可变结构域，和(ii)所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。66.权利要求65的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约0-250个氨基酸。67.权利要求66的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-250个氨基酸。68.权利要求67的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-50个氨基酸。69.权利要求67的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-10、10-20、20-50或50-100个氨基酸。70.权利要求63的方法，其中所述第一多肽包含scFv，所述嵌合多肽包含所述scFv的重链可变结构域和所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。71.权利要求70的方法，其中所述嵌合多肽另包含位于以下之间的肽接头结构域：(i)所述scFv的所述重链可变结构域，和(ii)所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。72.权利要求71的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约0-250个氨基酸。73.权利要求72的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-250个氨基酸。74.权利要求73的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-50个氨基酸。75.权利要求63的方法，其中所述第一多肽包含scFv，所述嵌合多肽包含所述scFv的重链可变结构域和轻链可变结构域和所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。76.权利要求75的方法，其中所述嵌合多肽另包含位于以下之间的肽接头结构域：(i)所述scFv的所述重链可变结构域和所述轻链可变结构域，和(ii)所述CD8跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、4-1BB胞质域和/或CD28胞质域。77.权利要求76的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约0-250个氨基酸。78.权利要求77的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-250个氨基酸。79.权利要求78的方法，其中所述肽接头结构域的长度为约1-50个氨基酸。80.权利要求17-79中任一项的方法，其中所述嵌合多肽包含泛素连接酶结构域。81.权利要求80的方法，其中所述第二多肽包含所述泛素连接酶结构域。82.权利要求80或81的方法，其中所述泛素连接酶结构域包含CHIPΔTPR结构域。83.权利要求17-82中任一项的方法，其中所述嵌合多肽包含knocksideways捕食结构域。84.权利要求83的方法，其中所述第二多肽包含所述knocksideways捕食结构域。85.权利要求83或84的方法，其中所述knocksideways捕食结构域包含FKBP结构域。86.权利要求83-85中任一项的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供knocksideways诱饵蛋白。87.权利要求86的方法，其中所述knocksideways诱饵蛋白包含FRB结构域。88.权利要求86或87的方法，其中所述knocksideways诱饵蛋白包含线粒体外膜引导信号。89.权利要求87或88的方法，其中所述knocksideways诱饵蛋白是Mitotrap蛋白。90.权利要求83-89中任一项的方法，其中所述嵌合多肽另包含泛素连接酶结构域。91.权利要求90的方法，其中所述第二多肽包含所述泛素连接酶结构域。92.权利要求90或91的方法，其中所述泛素连接酶结构域包含CHIPΔTPR结构域。93.权利要求17-92中任一项的方法，其中所述重组酶是丝氨酸家族重组酶或酪氨酸家族重组酶。94.权利要求93的方法，其中所述丝氨酸家族重组酶是phiC31、BxB1、HIN转化酶或TN3解离酶。95.权利要求94的方法，其中所述丝氨酸家族重组酶是phiC31。96.权利要求95的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供辅助因子。97.权利要求96的方法，其中所述辅助因子包含Xis。98.权利要求93的方法，其中所述酪氨酸家族重组酶是噬菌体λ整合酶、Cre或Flp。99.权利要求17-98中任一项的方法，其中所述重组步骤发生在细胞中，任选其中所述细胞包含在乳滴中。100.权利要求99的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供所述细胞，所述细胞包含所述载体和所述重组酶。101.权利要求99或100的方法，其中所述第一载体是质粒或噬菌粒。102.权利要求101的方法，其中所述第一载体包含编码展示蛋白的多核苷酸。103.权利要求102的方法，其中所述展示蛋白能够在细胞的胞外表面展示所述第一多肽或其部分。104.权利要求103的方法，其中所述展示蛋白包含ompA或bclA。105.权利要求99-104中任一项的方法，其中所述细胞是细菌细胞。106.权利要求105的方法，其中所述细菌细胞是大肠杆菌。107.权利要求99-106中任一项的方法，其中所述细胞是真核细胞。108.权利要求107的方法，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞或昆虫细胞。109.权利要求99-108中任一项的方法，其中所述细胞另含有包含编码所述重组酶的多核苷酸的载体。110.权利要求99-109中任一项的方法，其中所述细胞另含有包含编码所述重组酶的多核苷酸的染色体。111.权利要求17-110中任一项的方法，其中所述重组步骤发生在无细胞系统中。112.权利要求111的方法，其中所述无细胞系统是包含所述载体和所述重组酶的溶液。113.权利要求111或112的方法，其中所述重组酶是噬菌体λ整合酶。114.权利要求111-113中任一项的方法，其中所述无细胞系统包含在乳滴中。115.权利要求17-114中任一项的方法，其中所述第一载体包含彼此相邻定位的多个不同的调节元件。116.权利要求115的方法，其中所述调节元件之一在第一细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达，所述调节元件的另一个在第二细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达。117.权利要求116的方法，其中当在所述第一细胞类型中表达时所述第一多肽或其部分与蛋白质片段融合。118.权利要求117的方法，其中所述蛋白质片段包含病毒外被蛋白。119.权利要求118的方法，其中所述病毒外被蛋白是M13gpIII。120.权利要求117-119中任一项的方法，其中所述蛋白质片段另包含细菌信号肽。121.权利要求17-120中任一项的方法，其中所述重组载体包含彼此相邻定位的多个不同的调节元件。122.权利要求121的方法，其中所述调节元件之一在第一细胞类型中控制所述嵌合多肽的表达，所述调节元件的另一个在第二细胞类型中控制所述嵌合多肽的表达。123.权利要求115-122中任一项的方法，其中所述第一细胞类型是细菌细胞，所述第二细胞类型是真核细胞。124.权利要求123的方法，其中所述细菌细胞是大肠杆菌细胞。125.权利要求123或124的方法，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或真菌细胞。126.权利要求125的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。127.权利要求125的方法，其中所述真菌细胞是酵母细胞。128.权利要求17-127中任一项的方法，其中所述第一多核苷酸含有包含内含子调节元件的内含子。129.权利要求128的方法，其中所述内含子调节元件在原核细胞中控制所述第一多肽或其部分的表达。130.权利要求129的方法，其中所述原核细胞是细菌细胞。131.权利要求130的方法，其中所述细菌细胞是大肠杆菌。132.权利要求129-131中任一项的方法，其中当在所述原核细胞中表达时所述第一多肽或其部分与蛋白质片段融合。133.权利要求132的方法，其中所述蛋白质片段包含病毒外被蛋白。134.权利要求133的方法，其中所述病毒外被蛋白是M13gpIII。135.权利要求132-134中任一项的方法，其中所述蛋白质片段另包含细菌信号肽。136.权利要求132-135中任一项的方法，其中所述内含子另包含编码所述蛋白质片段的多核苷酸。137.权利要求136的方法，其中所述内含子调节元件控制所述蛋白质片段的表达。138.权利要求128-137中任一项的方法，其中所述内含子调节元件在真核细胞中通过RNA剪接从所述第一多核苷酸的转录物中除去。139.权利要求138的方法，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或真菌细胞。140.权利要求17-139中任一项的方法，其中所述第一载体另包含一对互补位点特异性重组基序。141.权利要求140的方法，其中所述第一多核苷酸、其片段和/或所述第一位点特异性重组基序位于所述互补位点特异性重组基序对之间。142.权利要求17-141中任一项的方法，其中所述第二载体另包含一对互补位点特异性重组基序。143.权利要求140的方法，其中所述第二多核苷酸、其片段和/或所述第二位点特异性重组基序位于所述互补位点特异性重组基序对之间。144.权利要求140-143中任一项的方法，其中使所述互补位点特异性重组基序对定位使得所述互补位点特异性重组基序对的重组导致间插序列的倒位。145.权利要求140-143中任一项的方法，其中使所述互补位点特异性重组基序对定位使得所述互补位点特异性重组基序对的重组导致间插序列的缺失。146.权利要求140-145中任一项的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供能够使所述互补位点特异性重组基序对重组的重组酶。147.权利要求146的方法，所述方法进一步包括使所述互补位点特异性重组基序对重组的步骤。148.权利要求140-147中任一项的方法，其中所述互补位点特异性重组基序对包含一对loxP位点。149.权利要求148的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供Cre重组酶。150.权利要求140-147中任一项的方法，其中所述互补位点特异性重组基序对包含一对FRT位点。151.权利要求150的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供Flp重组酶。152.权利要求140-147中任一项的方法，其中所述互补位点特异性重组基序对包含attB位点和attP位点。153.权利要求152的方法，其中所述提供步骤进一步包括提供适于使所述互补位点特异性重组基序对的所述attB位点和所述attP位点重组的phiC31或BxB1重组酶。154.权利要求17-153中任一项的方法，其中所述第一载体是病毒载体。155.权利要求154的方法，其中所述第一载体是腺病毒、慢病毒或杆状病毒载体。156.权利要求17-155中任一项的方法，其中所述第二载体是病毒载体。157.权利要求156的方法，其中所述第二载体是腺病毒、慢病毒或杆状病毒载体。158.权利要求154-157中任一项的方法，其中一个或多个病毒元件位于内含子之内。159.权利要求17-158中任一项的方法，其中所述第一载体是噬菌粒载体。160.权利要求17-159中任一项的方法，其中所述第二载体是噬菌粒载体。161.权利要求17-160中任一项的方法，其中：所述第一载体另包含第一重组基序片段，所述第二载体包含第二重组基序片段，和所述重组载体含有包含所述第一重组基序片段和所述第二重组基序片段的隐蔽位点特异性重组基序，所述方法进一步包括：(c)用能够使所述隐蔽位点特异性重组基序与所述另外的位点特异性重组基序重组的另外的重组酶，使所述重组载体和包含以下的另外的载体重组(i)另外的位点特异性重组基序，和(ii)编码另外的多肽的多核苷酸；从而形成编码包含以下的第二嵌合多肽的第二重组载体：(i)所述嵌合多肽或其部分，和(ii)所述另外的多肽或其部分。162.权利要求161的方法，其中所述第一位点特异性重组基序和所述隐蔽位点特异性重组基序是相同的。163.权利要求161的方法，其中所述第一位点特异性重组基序和所述隐蔽位点特异性重组基序是不同的。164.权利要求161-163中任一项的方法，其中所述另外的重组酶是丝氨酸家族重组酶或酪氨酸家族重组酶。165.权利要求164的方法，其中所述丝氨酸家族重组酶是phiC31、BxB1、HIN转化酶或TN3解离酶。166.权利要求165的方法，其中所述丝氨酸家族重组酶是BxB1。167.权利要求164的方法，其中所述酪氨酸家族重组酶是噬菌体λ整合酶、Cre或Flp。168.权利要求161-167中任一项的方法，其中所述第二嵌合多肽包含抗体或抗体片段。169.权利要求168的方法，其中所述抗体是IgG。170.权利要求161-169中任一项的方法，其中所述第二嵌合多肽包含CAR。171.权利要求170的方法，其中所述另外的多肽包含CD3-ζ跨膜结构域、CD28跨膜结构域、CD3-ζ胞质域、CD...
【专利技术属性】
技术研发人员：M维纳，M基斯，M巴托尼克，
申请(专利权)人：艾希奥美公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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