一种抗体药物偶联物中间体及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种抗体药物偶联物中间体及其制备方法。该中间体为式(I)所示的化合物。采用本发明专利技术的制备方法提高了抗体药物偶联物中间体的收率，利用鸟氨酸作为合成胍氨酸的前体来减少和规避酰胺化步骤中胍氨酸差向异构化的问题，以及胍氨酸衍生物在有机溶剂中的低溶解性问题。

An antibody drug coupling intermediate and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种抗体药物偶联物中间体及其制备方法
本专利技术涉及药物化学领域，特别涉及一种可以与单克隆抗体偶联的抗体药物偶联物中间体及其制备方法。
技术介绍
抗体药物偶联物(ADC)是一类新的，很有前途的靶向性治疗各种恶性肿瘤的化疗药物。ADC包括三个不同的部分，即抗体、连接链和细胞毒素，实现了将细胞毒素向癌细胞的有效靶向递送。其机制是通过ADC中的抗体与肿瘤特异性过表达的细胞表面抗原结合后，经过内吞来实现运送细胞毒素到特定的肿瘤细胞内，从而提高了细胞毒素的功效和选择性。与传统的化疗药物相比，ADC以癌细胞作为靶向细胞并特定性地攻击癌细胞，对健康细胞较少造成严重的影响。由于可以运送到肿瘤细胞内的细胞毒素分子的数量有限，只有高度有效的细胞毒素才可被用作有效毒素使用。Duostatin5是一种基于有高度细胞毒性的天然产物Dolastatin10而设计的细胞毒素，它能满足在ADC中作为有效细胞毒素的需要。目前在ADC类药物的制备过程中，连接链采用缬氨酸-胍氨酸形成的可被肽酶裂解的二肽，并将Fmoc-缬氨酸-胍氨酸作为关键组分和毒素在酰胺化条件下反应。但是由于胍氨酸非常容易成环，所以反应收率一般。同时因为胍氨酸在肽偶合条件下容易发生异构化，产物的光学纯度低。合成过程中产生的不需要的非对映异构体需要通过繁琐的反相HPLC纯化分离。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种操作简单，容易纯化，能减少和规避酰胺化步骤中胍氨酸差向异构化，以及胍氨酸衍生物在有机溶剂中的低溶解性问题的工艺路线及采用本专利技术的路线制备的抗体药物偶联物中间体。因此，本专利技术的一个目的是提供一种抗体药物偶联物中间体。本专利技术的另一目的是提供一种制备上述抗体药物偶联物中间体的方法。实现本专利技术目的的技术方案如下：一方面，本专利技术提供一种抗体药物偶联物中间体，该中间体为式(I)所示的化合物、对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐：另一方面，本专利技术提供一种制备上述药物偶联物中间体的方法。该方法操作简单，产品容易纯化，并能减少和规避酰胺化步骤中胍氨酸差向异构化，同时解决了胍氨酸衍生物在有机溶剂中的低溶解性问题。为了达到这个目的，我们设计了以下技术方案：具体地，上述抗体药物偶联物中间体的制备方法包括以下步骤：1)将化合物1或其盐与化合物2溶解于溶剂中，在试剂A的作用下经缩合反应得到化合物3；2)将化合物3从步骤1)得到的反应液中分离；3)将步骤2)得到的化合物3溶解于溶剂中，在试剂B的作用下脱掉氨基保护基L，得到化合物4；4)将化合物4从步骤3)得到的反应液中分离；5)步骤4)得到的化合物4与化合物5在试剂C的作用下经缩合反应得到化合物6；6)将化合物6从步骤5)得到的反应液中分离；7)步骤6得到的化合物6溶解于溶剂中，在试剂D的作用下，脱去氨基保护基M，得到化合物7；8)将化合物7从步骤7)得到的反应液中分离；9)将步骤8)得到的化合物7溶解于溶剂中，调节溶液pH，在试剂E的作用下，得到化合物8；10)将步骤9)得到的化合物8与试剂F反应，得到化合物9；11)将化合物9从步骤10)得到的反应液中分离；12)将步骤11)得到化合物9溶解于溶剂中，并与试剂G反应，得到式(I)所示的化合物；13)将式(I)所示的化合物从步骤12)得到的反应液中分离；其中化合物2、3、4、6中的M和L为氨基保护基，且M与L不同。优选地，在步骤1)中，所述溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环和2-甲基四氢呋喃中的一种或多种；更优选地，所述溶剂选自二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种。优选地，在步骤1)中，所述试剂A选自DCC、EDC、DIC、HATU、HBTU、HBPIPU、HBPyU、HSPyU、HCTU、HOTU、HOTT、HSTU、HDMA、TATU、TBTU、TCTU、TCFH、TDBTU、TOTU、TOTT、TPTU、TFFH、BTFFH、TNTU、TSTU、COMU、T3P、BOP、PyBOP、PyBrOP、PyClOP、BrOP、PyAOP、PyCIU、CDI、对甲基苯磺酰咪唑、TPSI、TSTU、DEPBT、DMTMM、EEDQ、CIP、CIB、HOAt、HOBt和DMC中的一种或多种；更优选地，所述试剂A选自EDC、DIC、HOAt和HOBt中的一种或多种；进一步优选地，所述试剂A为EDC或DIC与HOAt或HOBt的混合物；优选地，在步骤1)中，所述试剂A作为最后一个组分加入到反应液中。优选地，在步骤1)中，反应温度为-20℃-100℃，优选为15℃-30℃。优选地，在步骤1)中，所述氨基保护基M为Cbz、Boc(叔丁基氧羰基)、Troc或Tr，优选为Boc。优选地，在步骤1)中，所述氨基保护基L为Fmoc或SEM，优选为Fmoc。优选地，在步骤2)中，所述分离包括将所述反应液用等体积的水或饱和食盐水洗涤，并蒸去溶剂，以得到化合物3。优选地，在步骤3)中，所述溶剂选自DMF、DMSO、二氯甲烷和乙腈中的一种或多种；更优选地，所述溶剂为乙腈。优选地，在步骤3)中，所述试剂B选自但不限于DBU、哌啶、乙二胺、二异丙胺、吗啉、N-甲基哌嗪和吡咯烷中的一种或多种；更优选地，所述试剂B选自哌啶和二异丙胺中的一种或多种，最优选为哌啶。优选地，在步骤3)中，反应温度为0℃-100℃，更优选为15℃-30℃。优选地，在步骤4)中，所述分离包括将步骤3)得到的反应液蒸发和干燥，剩余的粗品再溶解在二氯甲烷；化合物4的二氯甲烷溶液用0.1-0.5MHCl水溶液洗涤到为水相且最终水相的pH为2-5；水溶液再用二氯甲烷洗涤；然后水溶液用碳酸氢钠或其它无机碱中和到pH为8-10。碱化后的水溶液用二氯甲烷萃取，得到化合物4的二氯甲烷的溶液；二氯甲烷萃取液再用水或饱和食盐水洗涤，干燥后蒸发得到化合物4。优选地，在步骤5)中，所述试剂C选自DCC、EDC、DIC、HATU、HBTU、HBPIPU、HBPyU、HSPyU、HCTU、HOTU、HOTT、HSTU、HDMA、TATU、TBTU、TCTU、TCFH、TDBTU、TOTU、TOTT、TPTU、TFFH、BTFFH、TNTU、TSTU、COMU、T3P、BOP、PyBOP、PyBrOP、PyClOP、BrOP、PyAOP、PyCIU、CDI、对甲基苯磺酰咪唑、TPSI、TSTU、DEPBT、DMTMM、EEDQ、CIP、CIB、HOAt、HOBt、HATU、DIPEA和DMC中的一种或多种；更优选地，所述试剂C选自EDC、DIC、HOAt和HOBt中的一种或多种；进一步优选地，所述试剂C为EDC或DIC与HOAt或HOBt的混合物；优选地，在步骤5)中，所述试剂C作为最后一个组分加入到反应液中。优选地，在步骤5)中，反应温度为-20℃-100℃，优选为15℃-30℃。优选地，在步骤6)中，所述反应液用等体积的水或饱和食盐水洗涤，并蒸去溶剂，得到化合物6。优选地，在步骤7)中，所述溶剂选自1,4-二氧六环、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种；更优选地，所述溶剂为1,4-二氧六环。优选地，在步骤7)中，所述试剂D选自H2SO4、HCl和TFA中的一种或多种；更优选地，所述试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体药物偶联物中间体，该中间体为式(I)所示的化合物、对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐：

【技术特征摘要】
1.一种抗体药物偶联物中间体，该中间体为式(I)所示的化合物、对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐：2.一种制备权利要求1所述中间体的方法，所述方法的反应路线如下：所述方法包括以下步骤：1)将化合物1或其盐与化合物2溶解于溶剂中，在试剂A的作用下经缩合反应得到化合物3；2)将化合物3从步骤1)得到的反应液中分离；3)步骤2)得到的化合物3溶解于溶剂中，在试剂B的作用下脱掉氨基保护基L，得到化合物4；4)将化合物4从步骤3)得到的反应液中分离；5)步骤4)得到的化合物4与化合物5在试剂C的作用下经缩合反应得到化合物6；6)将化合物6从步骤5)得到的反应液中分离；7)步骤6得到的化合物6溶解于溶剂中，在试剂D的作用下，脱去氨基保护基M，得到化合物7；8)将化合物7从步骤7)得到的反应液中分离；9)将步骤8)得到的化合物7溶解于溶剂中，调节溶液pH，在试剂E的作用下，得到化合物8；10)将步骤9)得到的化合物8与试剂F反应，得到化合物9；11)将化合物9从步骤10)得到的反应液中分离；12)将步骤11)得到化合物9溶解于溶剂中，并与试剂G反应，得到式(I)所示的化合物；13)将式(I)所示的化合物从步骤12)得到的反应液中分离；其中化合物2、3、4、6中的M和L为氨基保护基，且M与L不同。3.根据权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤1)中，所述溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环和2-甲基四氢呋喃中的一种或多种；优选地，所述溶剂选自二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种；优选地，在所述步骤1)中，所述试剂A选自DCC、EDC、DIC、HATU、HBTU、HBPIPU、HBPyU、HSPyU、HCTU、HOTU、HOTT、HSTU、HDMA、TATU、TBTU、TCTU、TCFH、TDBTU、TOTU、TOTT、TPTU、TFFH、BTFFH、TNTU、TSTU、COMU、T3P、BOP、PyBOP、PyBrOP、PyClOP、BrOP、PyAOP、PyCIU、CDI、对甲基苯磺酰咪唑、TPSI、TSTU、DEPBT、DMTMM、EEDQ、CIP、CIB、HOAt、HOBt和DMC中的一种或多种；更优选地，所述试剂A选自EDC、DIC、HOAt和HOBt中的一种或多种；进一步优选地，所述试剂A为EDC或DIC与HOAt或HOBt的混合物；优选地，在所述步骤1)中，所述试剂A作为最后一个组分加入到反应液中；优选地，在所述步骤1)中，所述氨基保护基M为Cbz、Boc、Troc或Tr，更优选为Boc；优选地，氨基保护基L为Fmoc或SEM，更优选为Fmoc。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，在所述步骤2)中，所述分离包括将所述反应液用等体积的水或饱和食盐水洗涤，并蒸去溶剂，以得到化合物3。5.根据权利要求2-4中任一项所述的方法，其中，在所述步骤3)中，所述溶剂选自DMF、DMSO、二氯甲烷和乙腈中的一种或多种；优选地，所述溶剂为乙腈；优选地，在所述步骤3)中，所述试剂B选自但不限于DBU、哌啶、乙二胺、二异丙胺、吗啉、N-甲基哌嗪和吡咯烷中的一种或多种；更优选地，所述试剂B选自哌啶和二异丙胺中的一种或多种；进一步优选为哌啶；优选地，在所述步骤3)中，反应温度为0℃-100℃，更优选为15℃-30℃。6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其中，在所述步骤4)中，所述分离包括将步骤3)得到的反应混合物蒸发和干燥，剩余的粗品再溶解在二氯甲烷；化合物4的二氯甲烷溶液用0.1-0.5MHCl水溶液洗涤到为水相且最终水相的pH为2-5；水溶液再用二氯甲烷洗涤；然后水溶液用碳酸氢钠或其它无机碱中和到pH为8-10；碱化后的水溶液用二氯甲烷萃取，得到化合物4的二氯甲烷的溶液；二氯甲烷萃取液再用水或饱和盐水洗涤，干燥后蒸发得到化合物4。7.根据权利要求2-6中任一项所述的方法，其中，在所述步骤5)中，所述试剂C选自DCC、EDC、DIC、HATU、HBT...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿力舍·卡山诺夫，朱同，苗振伟，贾忠全，庞彬彬，徐俊，李海泓，李辉，郭茂君，
申请(专利权)人：联宁苏州生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32