一种寡肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种寡肽及其制备方法与应用。所述寡肽氨基酸序列为γ‑Glu‑γ‑Glu‑Arg，具有安全性高、无毒副作用，对勃起困难、早泄具有较好的改善作用。具体制备步骤为：将谷氨酰胺与精氨酸混合后溶于水中，添加溶液质量0.001‑0.4%（w/w）的谷氨酰胺酶或γ‑谷氨酰胺转肽酶，用10 mol/l的氢氧化钠溶液调节溶液的pH至7.0‑10.0，在25‑50℃反应3‑12小时，后用4 mol/L 盐酸回调pH 至 7~8之间，90℃灭酶10 min。

Oligopeptide and preparation method and application thereof

The invention discloses an oligopeptide and a preparation method and an application thereof. The peptide amino acid sequence of Glu Glu gamma gamma Arg, has high safety, no toxic side effect, has good effect on erectile dysfunction, premature ejaculation. The preparation method comprises the following steps: glutamine and arginine mixture dissolved in water, add 0.001 of the quality of solution 0.4% (w/w) of the enzyme glutamine or glutamine gamma transpeptidase, with 10 sodium hydroxide solution mol/l the pH of the solution was adjusted to 7 in 10, 25 reacting at 50 DEG C for 12 hours 3 after 4 mol/L, hydrochloride pH 7~8 callback to 90 DEG C, 10 min inactivation.

【技术实现步骤摘要】
一种寡肽及其制备方法与应用
本专利技术涉及具有生理活性的肽及其制备方法，具体涉及具有壮阳效果的γ-谷氨酰肽混合物及其制备方法。
技术介绍
勃起功能障碍(ED)又称阳痿。一般指在多数情况下阴茎不能勃起，或虽能勃起但不能维持勃起并进行性交，是临床上最常见的男子性功能障碍，其不仅发病率高，严重影响男性健康，而且有向年轻化发展的趋势。特别是在现代生活中，人们的生活节奏快，精神压力大，暴饮暴食，偏食酗酒等，都极易造成男性性功能障碍，出现阳痿症状。据统计40～70岁男子中有52％患有不同程度的ED。其治疗可分为非侵入性和侵入性治疗两类，非侵入性治疗系指心理治疗、药物治疗和真空负压勃起治疗。侵入性治疗包括尿道给药、海绵体活性药物注射、阴茎假体植入和血管性阳痿的手术治疗。侵入性治疗带有一定的创伤性，并发症多，患者不易接受；药物治疗目前主要是以西药为主，多为磷酸二酯酶-5(PDE-5)抑制剂：如西地那非(伟哥，辉瑞公司)、伐地那非(艾力达，拜耳公司)等虽然疗效肯定，但价格昂贵，一般患者难以承受，并可引起如头痛、低血压、心血管不良反应等令人不能接受的副作用。广州善康生物科技有限公司公开了一种迅速、安全、持久壮阳的补肾壮阳药物(201510035437.3)。为了解决上述问题，该专利技术所提供的技术方案是：一种补肾壮阳的药物，所述药物的组分为鳄鱼鞭干粉、覆盆子牡蛎、枸杞子，所述各组分的重量百分比为：鳄鱼鞭干粉1％～50％、覆盆子1％～40％、牡蛎1％～30％、枸杞子1％～18％。专利技术人认为这一专利技术的有益效果在于：采用鳄鱼鞭粉为主要原料，配以覆盆子、牡蛎、枸杞子，可以实现迅速、安全、持久壮阳。山西金源酒业有限公司提供了一种治疗范围广、易吸收、无毒副作用的治疗阳痿、早泄、遗精、滑精等性功能衰退的壮阳药酒(201010573974.0)。其由下列原料制成:65°原浆酒、锁阳、冬虫夏草、人参、川穹、当归、红花、紫草,蜂蜜,将上述中药药材洗净晾干,用65°原浆酒浸泡,将酒滤出,加入蒸馏水调配成所需要的酒精度,然后加入蜂蜜调味制成。专利技术人认为这一专利技术活血化瘀、排毒利尿及滋补保健壮阳、健脾益气、涩精固脱、抗衰益寿的功能，总有效率达87％。青岛联合创新技术服务平台有限公司提供了一种滋阴壮阳的药酒(申请号201310265827.0)，由以下组分按照重量份数组成：鹿茸20-30份、肉苁蓉20-30份、山药20-30份、仙茅15-18份、熟地黄10-15份、白芍10-15份、当归10-15份、百合5-8份、桑葚5-8份、银耳5-8份、女贞子5-8份、黄精20-30份、饴糖60-80份，高粱酒2-4斤。专利技术人认为这一专利技术所提供药酒，组方配伍科学，具有滋阴壮阳，壮肾阳，益精血，有效防治男性阴亏阳虚、阳痿、早泄，女性月经不调，性冷淡等症状。黑龙江江恒医药科技有限公司公开了一种壮阳春胶囊及其制备方法(申请号201410731929.1)，其特征在于取甘松150g,肉苁蓉300g，锁阳200g，菟丝子300g，车前子300g，制何首乌200g,采用二氧化碳超临界萃取法提取，减压干燥，用高能纳米冲击磨粉碎成纳米干膏，加入功能性辅料，制成壮阳春胶囊，崩解时间显著缩短，疗效显著优于市售壮阳春胶囊，取得了积极效果。目前尚未见具有壮阳效果的肽类物质的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述不足，提供一种利用谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶合成具有壮阳效果的γ-谷氨酰肽的制备方法。本专利技术的目的通过以下技术方案实现。一种寡肽，其氨基酸序列为γ-Glu-γ-Glu-Arg。所述一种寡肽在制备食品或药品中的应用，具体是在食品或药品中添加占食品或药品的总重量60mg/kg以上的所述寡肽。所述一种寡肽在制备食品或药品中的应用，具体是在在食品或药品中添加占食品或药品的总重量500mg/kg以上的所述寡肽。制备所述一种寡肽的方法，具体是：L-谷氨酰胺与精氨酸，摩尔比为1-2:1，溶于水中得溶液，调节反应pH为7.0-10.0，添加谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶0.02-1％(w/w)，在25-50℃反应3-12小时，后用4mol/L盐酸回调pH至7～8之间，90℃灭酶10min，对酶促反应产物进行浓缩，冷冻干燥，得到寡肽含γ-Glu-γ-Glu-Arg反应液。采用XSelectHSST35μm4.6x250mm分析柱，流动相A液为0.1％(V/V)甲酸-水溶液；流动相B液为0.1％(V/V)甲酸-乙腈溶液，柱温为40℃，流速为1mL/min，反应液的进样量10μL，对反应液进行梯度洗脱，第3个峰即为寡肽γ-Glu-γ-Glu-Arg。上述制备方法中，所述溶液中L-谷氨酰胺和L-精氨酸的浓度为400-1200mmol/L。本专利技术与现有技术相比，具有如下优点：1)本专利技术首次公开了寡肽γ-Glu-γ-Glu-Arg对勃起困难、早泄具有较好的改善作用。2)首次公开了利用谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶催化制备寡肽γ-Glu-γ-Glu-Arg。附图说明图1为γ-Glu-γ-Glu-Arg的二级质谱图。具体实施方式以下结合附图和实例对本专利技术的具体是实施作进一步举例，但本专利技术的实施和保护不限于此。实施例1将解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)SWJS22(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.8425)以1％的接种量接种于发酵培养基(发酵培养基的组成为：4％豆粕、2％麸皮、2％玉米粉，92％水)中，37～39℃发酵培养30h。将发酵液于4℃，10000r/min条件下高速离心10min，过滤得上清液，即谷氨酰胺酶粗酶液。将400mM谷氨酰胺与400mM精氨酸溶于100g水中，调节溶液的pH值至10.0，加入1g谷氨酰胺酶粗酶液，在25℃分别反应12h，后用4mol/L盐酸回调pH至7.0后，90℃灭酶10min，对酶促反应产物进行浓缩，冷冻干燥，得到含寡肽γ-Glu-γ-Glu-Arg反应液。采用XSelectHSST35μm4.6x250mm分析柱，流动相A液为0.1％(V/V)甲酸-水溶液；流动相B液为0.1％(V/V)甲酸-乙腈溶液，柱温为40℃，流速为1mL/min，反应液的进样量10μL，对反应液进行梯度洗脱，第3个峰即为寡肽γ-Glu-γ-Glu-Arg。UPLC-MS/MS对反应产物进行定性分析：包括：AnAgilent1290seriesUPLCsystem(AgilentTechnologies)用于分离各γ-Glu-peptides,带有anelec-trosprayionization(ESI)的质谱系统(Q-TOFMS/MS，BrukerDaltonics)进行定性分析。色谱柱为：AgilentZORBAXRRHDSB-C18(2.1x50mm,1.8μm)。进样量为5μL。液相条件为：溶液A为0.1％甲酸-水溶液，和溶液B为0.1％甲酸-乙腈溶液，梯度洗脱程序为：0–10％B,0-5.0min；10-15％B,5.0-10.0min；然后100％B,10.0-12.0min。MS条件：Ionization(离子化)：正离子模式；Dryinggas(干燥气体)：350℃下10L/min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寡肽，其特征在于氨基酸序列为γ‑Glu‑γ‑Glu‑Arg。

【技术特征摘要】
1.一种寡肽，其特征在于氨基酸序列为γ-Glu-γ-Glu-Arg。2.权利要求1所述一种寡肽在制备食品或药品中的应用，其特征在于在食品或药品中添加占食品或药品的总重量60mg/kg以上的所述寡肽。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于在食品或药品中添加占食品或药品的总重量500mg/kg以上的所述寡肽。4.制备权利要求1所述一种寡肽的方法，其特征在于：L-谷氨酰胺与精氨酸，摩尔比为1-2:1，溶于水中得溶液，调节反应pH为7.0-10.0，添加谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶0.02-1%（w/w），在25-50℃反应3-12小时，后用4mol/L盐酸回调pH至7~...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔春，杨娟，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44