人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，所述试剂盒包含扩增如下25个基因座的特异性扩增引物；所述基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、D22S1045、Yindel、D2S441、D10S1248。本发明专利技术所述试剂盒具有以下优点：本发明专利技术所述试剂盒在基因座累积的鉴别能力增强的前提下，提高了灵敏度，做到DNA模板量在50pg下全部检出25个基因座，29个循环扩增，可获得完整分型；本发明专利技术基因座数量更加满足数据库建设不断扩容，并增加检测基因座的要求；试剂盒高效、稳定，提高了案件现场检材中的检出率，缩短扩增时间。

Human autosomal STR polymorphic loci complex amplification kit and its application

The invention discloses a human autosomal polymorphic STR loci multiplex PCR kit, the kit comprising the following specific amplified 25 loci primers; the loci: D3S1358, D13S317, D7S820, D16S539, D1S1656, PentaE, TPOX, TH01, D2S1338, CSF1PO, Penta, D, D19S433 D21S11, D18S51, vWA, D6S1043, Amelogenin, D8S1179, D5S818, D12S391, FGA, D22S1045, Yindel, D2S441, and D10S1248. The kit of the invention has the following advantages: the premise of the kit of the invention in the accumulated differential enhancement, improve the sensitivity, do the template DNA in 50pg are all detected 25 loci, 29 cycles of amplification, we can obtain the complete type; the invention loci number more satisfied the database construction continued expansion, and increase the detection of loci; kit is efficient and stable, improve the detection rate of the crime scene samples, shorten the time of amplification.

【技术实现步骤摘要】
人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及STR分子标记，具体为一种涵盖更多基因座、个体识别能力更高的人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
短串联重复序列基因座(STR)是由几个碱基对作为核心单位串联重复形成的一类DNA序列。串联重复的核心单位数目可变，因此STR具有很好的遗传多态性。关于STR，早在90年代初就已经发现。STR基因座片段小，能复合扩增，灵敏度高，可快速提供准确、丰富的信息，已被广泛应用于建立DNA数据库。在1997年，美国FBI选择了13个STR基因座：CSF1PO、D16S539、FGA、D18S51、TH01、D5S818、TPOX、VWA、D3S1358、D13S317、D7S820、D8S1179、D21S11；而在今年(2017年1月1日)FBI又公布了7个新增的STR基因座：D1S1656,D2S441,D2S1338,D10S1248,D12S391,D19S433,D22S1045和Amelogenin。这些基因座的个体识别率较高，一般被称为核心基因座。我国对STRDNA的数据库建设逐步标准化。根据中华人民共和国公共安全最新行业标准《法庭科学DNA数据库选用的基因座及其数据结构》，其中常染色体含有20个核心基因座即Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、D6S1043、PentaD、PentaE和D12S391，10个优选基因座D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248、D8S1132、D15S659、D3S3045、D19S253、D6S477、D10S1435。其中，Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01和TPOX这16个基因座DNA数据库中排序靠前，兼容性好；D6S1043、PentaD和PentaE在DNA数据库中排序靠前，中国人群遗传多态性高，识别率高；D12S391、D1S1656、D2S441、D22S1045和D10S1248是引入的NEWCODIS，由美国FBI在2017年新增的核心位点，同时在欧洲的标准(ESS)中也包含这5个基因座。商品化的试剂盒ABI的Identifiler，Promega(USA)的PowerPlex16，到现在AB公司的含有24个基因组的AmpFeSTRglobalfiler，和Promega包含27个STR的PowerPlexfusion。在国内，中德美联的17+1，EX20，EX27，公安部物证鉴定中心已经有了含有25个基因座的DNATyper25，基点认知的25A，海尔施的STRtyper26G等。但长期以来，国内厂商由于试剂盒的性能，比如灵敏度抗抑制能力，稳定性不如国外厂商，长期只应用于建库市场，而实际案件检材应用的均为国外厂商产品，在这块，国内试剂盒的应用一片空白。
技术实现思路
解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，获得一种具有更高个体识别能力，且能够同时达到更多基因座扩增、高效、快速的目的，本专利技术提供了人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用。技术方案：人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，所述试剂盒包含扩增如下25个基因座的特异性扩增引物；所述基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、PentaD、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、D22S1045、Yindel、D2S441、D10S1248。优选的，所述基因座中Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、D6S1043、PentaD、PentaE和D12S391为核心基因座，D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248为优选基因座，Yindel为辅助性别判断的基因座。优选的，所述特异性扩增引物的序列如下：D3S1358，SEQIDNO.1～2；D13S317，SEQIDNO.3～4；D7S820，SEQIDNO.5～6；D16S539，SEQIDNO.7～8；D1S1656，SEQIDNO.9～10；PentaE，SEQIDNO.11～12；TPOX，SEQIDNO.13～14；TH01，SEQIDNO.15～16；D2S1338，SEQIDNO.17～18；CSF1PO，SEQIDNO.19～20；PentaD，SEQIDNO.21～22；D19S433，SEQIDNO.23～24；vWA，SEQIDNO.25～26；D21S11，SEQIDNO.27～28；D18S51，SEQIDNO.29～30；D6S1043，SEQIDNO.31～32；Amelogenin，SEQIDNO.33～34；D8S1179，SEQIDNO.35～36；D5S818，SEQIDNO.37～38；D12S391，SEQIDNO.39～40；FGA，SEQIDNO.41～42；D22S1045，SEQIDNO.43～44；Yindel，SEQIDNO.45～46；D2S441，SEQIDNO.47～48；D10S1248，SEQIDNO.49～50。进一步的，所述特异性扩增引物在扩增体系中的终浓度为：D3S1358，0.5μM；D13S317，0.45μM；D7S820，0.6μM；D16S539，0.6μM；D1S1656，0.6μM；PentaE，1μM；TPOX，0.45μM；TH01，0.7μM；D2S1338，1μM；CSF1PO，0.65μM；PentaD，1μM；D19S433，0.45μM；vWA，0.4μM；D21S11，0.4μM；D18S51，0.4μM；D6S1043，0.45μM；Amelogenin，0.3μM；D8S1179，0.45μM；D5S818，0.45μM；D12S391，0.6μM；FGA，0.8μM；D22S1045，0.35μM；Yindel，0.5μM；D2S441，0.5μM；D10S1248，0.6μM。引物序列及其终浓度具体如下表所示：表1各基因座的引物序列及其终浓度优选的，每对特异性扩增引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。优选的，所述引物分为5组进行标记，具体为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE为第1组；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、PentaD为第2组；D19S本文档来自技高网...

【技术保护点】
人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含扩增如下25个基因座的特异性扩增引物；所述基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、D22S1045、Yindel、D2S441、D10S1248。

【技术特征摘要】
1.人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含扩增如下25个基因座的特异性扩增引物；所述基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、PentaD、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、D22S1045、Yindel、D2S441、D10S1248。2.根据权利要求1所述的人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述基因座中Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、D6S1043、PentaD、PentaE和D12S391为核心基因座，D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248为优选基因座，Yindel为辅助性别判断的基因座。3.根据权利要求1所述的人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性扩增引物的序列如下：D3S1358，SEQIDNO.1～2；D13S317，SEQIDNO.3～4；D7S820，SEQIDNO.5～6；D16S539，SEQIDNO.7～8；D1S1656，SEQIDNO.9～10；PentaE，SEQIDNO.11～12；TPOX，SEQIDNO.13～14；TH01，SEQIDNO.15～16；D2S1338，SEQIDNO.17～18；CSF1PO，SEQIDNO.19～20；PentaD，SEQIDNO.21～22；D19S433，SEQIDNO.23～24；vWA，SEQIDNO.25～26；D21S11，SEQIDNO.27～28；D18S51，SEQIDNO.29～30；D6S1043，SEQIDNO.31～32；Amelogenin，SEQIDNO.33～34；D8S1179，SEQIDNO.35～36；D5S818，SEQIDNO.37～38；D12S391，SEQIDNO.39～40；FGA，SEQIDNO.41～42；D22S1045，SEQIDNO.43～44；Yindel，SEQIDNO.45～46；D2S441，SEQIDNO.47～48；D10S1248，SEQIDNO.49～50。4.根据权利要求1、2或3所述的人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：石美琳，姜颖晔，范晓芸，王伟，陈林丽，邵泽香，郭育林，夏子芳，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32