一种鉴定人体液的组织来源的方法及其专用miRNA组合技术

本发明专利技术公开了一种鉴定人体液的组织来源的方法。该方法包括检测体液中miRNA205、miRNA451、miRNA144、miRNA214、miRNA888和miRNA891六个miRNA的表达量，然后采用softmax回归模型和分类的one‑hot形式计算待测体液来自组织来源的概率值，概率值最大的即为该人体液的组织来源。采用本发明专利技术提供的方法可以有效的鉴定人体液的组织来源，大大简化了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的步骤，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人以及定罪量刑等提供准确的科学依据。

A method for identifying the tissue source of human body fluid and its special miRNA combination

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定人体液的组织来源的方法及其专用miRNA组合
本专利技术涉及法医技术学领域，具体涉及一种鉴定人体液的组织来源的方法及其专用miRNA组合。
技术介绍
鉴定犯罪现场遗留的人体液(如血液、精斑、唾液)的组织来源对于案件定性或重现案发现场意义重大，因此鉴定体液的组织来源一直是法医物证学重要的研究内容。传统体液的组织来源的鉴定方法主要基于酶促反应或免疫学的应用，但鉴定过程繁琐，并且对于刑事案件现场通常会出现的微量体液检材往往不能获得良好的鉴定结果。目前体液的组织来源的鉴定方法主要依赖分子生物学的手段，如mRNA(messengerRNA)、DNA甲基化和miRNA(MicroRNA)等等。miRNA是一类广泛存在于真核细胞中约由18-25个核酸组成的内源性非编码小分子RNA，具有组织特异性、分子小、拷贝数高且不易降解的特点，即使在极端温度、强酸、强碱条件下其含量和分子结构均无明显变化，满足检测降解检材的需求，成为继mRNA之后的用于解决法医学关注的热点；但其拷贝数高、分子量小的特点，使得其检测难度较大。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定人体液的组织来源。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种鉴定人体液的组织来源的系统，其可包括检测待测体液的miRNA组合中各个miRNA的表达量的试剂；所述miRNA组合可为a1)或a2)：a1)包括miR451、miR144、miR214、miR888、miR891和miR205；a2)由所述miR451、所述miR144、所述miR214、所述miR888、所述miR891和所述miR205组成；所述miR451的核苷酸序列可如序列表中序列1所示；所述miR144的核苷酸序列可如序列表中序列2所示；所述miR214的核苷酸序列可如序列表中序列3所示；所述miR888的核苷酸序列可如序列表中序列4所示；所述miR891的核苷酸序列可如序列表中序列5所示；所述miR205的核苷酸序列可如序列表中序列6所示。所述系统还可包括将“待测体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量”转换为待测体液来自组织来源的概率值的系统。所述将“待测体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量”转换为“待测体液来自组织来源的概率值”的系统具体可通过采用softmax回归模型和分类的one-hot形式实现。上述任一所述的系统中，所述组织来源可为外周血、唾液、月经血或精液。本专利技术还保护一种鉴定待测体液的组织来源的方法，依次可包括如下步骤：(1)检测待测体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量；(2)采用softmax回归模型和分类的one-hot形式计算待测体液来自组织来源的概率值，概率值最大的即为该人体液的组织来源。上述方法中，所述组织来源可为外周血、唾液、月经血或精液。本专利技术还保护一种鉴定待测体液属于哪一种组织来源的方法，依次可包括如下步骤：(1)检测待测体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量；检测标准体液群中的各个标准体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量；所述标准体液群由外周血、唾液、月经血和精液组成；(2)将待测体液中各个miRNA的表达量与每个标准体液中各个miRNA的表达量进行主成分分析，主成分分析中待测体液与哪个标准体液为同一类，该待测体液与该标准体液即属于同一种组织来源。上述任一所述miRNA组合也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述miRNA组合在鉴定人体液的组织来源中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述系统在鉴定人体液的组织来源中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述组织来源可为外周血、唾液、月经血或精液。上文中，检测所述miRNA组合中各个miRNA的表达量具体可为检测所述miRNA组合中各个miRNA的相对表达量。所述检测miRNA组合中各个miRNA的相对表达量具体可以RNU6b为内参。以所述miR451为例，检测miR451的相对表达量步骤如下：1)以待测体液的TotalRNA为模板，以miR451的RT引物：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAACTCA-3’进行逆转录，得到的cDNA；2)以步骤1)得到cDNA为模板，采用miR451的上游引物(F)：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’和下游引物(R)：5’-CGGAAACCGTTACCATTACTGAG-3’组成的引物对进行实时荧光定量PCR，然后输出待测体液的Ct值(即每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数)，即为CtmiR451；3)以待测体液的TotalRNA为模板，以RNU6b的RT引物：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’进行逆转录，得到的cDNA；4)以步骤3)得到cDNA为模板，采用5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’和5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’组成的引物对进行实时荧光定量PCR，然后输出待测体液的Ct值(C：Cycle，t：threshold，即每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数)，即为CtRNU6b；5)计算miR451的ΔCt，ΔCt＝CtmiR451-CtRNU6b，ΔCt即为miR451的相对表达量(以RNU6b为内参)。各个miRNA的RT引物的核苷酸序列具体见表2。各个miRNA的上游引物(F)和下游引物(R)的核苷酸序列具体见表4。实验证明，采用本专利技术提供的方法可以有效的鉴定人体液的组织来源，大大提高了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的科学性和准确性，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人以及定罪量刑等提供准确的科学依据。附图说明图1为miRNA451的标准曲线。图2为miRNA451的扩增曲线和熔解曲线。图3为实施例1步骤四中2的实验结果。图4为实施例1步骤四中4的实验结果。图5为实施例1步骤四中5的实验结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中，所有引物均有sangon公司合成。miRNeasyMiniKit为德国Qiagen公司的产品。TurboDNA-freeTMkit为美国Ambion的产品。Nanodrop2000c为美国ThermoScientific公司的产品。QuantStudioTM7为美国ThermoFisher公司的产品。PowerSYBRGreenPCRMasterMix(2×)为AppliedBiosystems公司的产品。Nuclease-FreeWater为TaKaRa公司的产品。5×First-StrandBuffer、DTT(0.1M)和M-MLVReverseTranscriptase(200U/μL)均为invitrogen公司的产品。dNTPMixture(10mM)和Nuclease-FreeWater为TaKaRa公司的产品。RecombinantRNaseInhibitor(40U/μL)为Pr本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定人体液的组织来源的系统，包括检测待测体液的miRNA组合中各个miRNA的表达量的试剂；所述miRNA组合为a1)或a2)：a1)包括miR451、miR144、miR214、miR888、miR891和miR205；a2)由所述miR451、所述miR144、所述miR214、所述miR888、所述miR891和所述miR205组成；所述miR451的核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述miR144的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述miR214的核苷酸序列如序列表中序列3所示；所述miR888的核苷酸序列如序列表中序列4所示；所述miR891的核苷酸序列如序列表中序列5所示；所述miR205的核苷酸序列如序列表中序列6所示。

【技术特征摘要】
1.鉴定人体液的组织来源的系统，包括检测待测体液的miRNA组合中各个miRNA的表达量的试剂；所述miRNA组合为a1)或a2)：a1)包括miR451、miR144、miR214、miR888、miR891和miR205；a2)由所述miR451、所述miR144、所述miR214、所述miR888、所述miR891和所述miR205组成；所述miR451的核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述miR144的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述miR214的核苷酸序列如序列表中序列3所示；所述miR888的核苷酸序列如序列表中序列4所示；所述miR891的核苷酸序列如序列表中序列5所示；所述miR205的核苷酸序列如序列表中序列6所示。2.如权利要求1所述的系统，其特征在于：所述系统还包括将“待测体液的所述miRNA组合中各个miRNA的表达量”转换为待测体液来自组织来源的概率值的系统。3.如权利要求1或2所述的系统，其特征在于：所述组织来源为外周血、唾液、月经血或精液。4.一种鉴定待测体液的组织来源的方法，依次包括如下步骤：(1)检测待测体液的权...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙启凡，季安全，胡胜，李冉冉，江丽，李彩霞，王乐，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11