一种用于分析肠道微生物的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，涉及一种用于分析肠道微生物的试剂盒及其应用，具体涉及通过两轮PCR构建文库，分析分类肠道微生物的试剂盒及应用，本发明专利技术引物组合物采用两步法扩增获得测序文库，其中包含了随机碱基序列，增加了文库序列的复杂度，降低了phix的比例，保证更多测序质量，提高了文库的覆盖度。

A kit for the analysis of intestinal microbes and its application

The invention belongs to the field of molecular biology, relates to a method for the analysis of intestinal microflora and its application kit, in particular through two rounds of PCR library construction, classification of intestinal microflora analysis reagent box and application, the invention of primer composition by two step amplification sequencing library which contains a random sequence, and increase the complexity of the sequence library and reduce the proportion of phix to ensure more sequencing quality, improve the coverage of the library.

【技术实现步骤摘要】
一种用于分析肠道微生物的试剂盒及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种用于分析肠道微生物的试剂盒及其应用，具体涉及通过两轮PCR构建文库，包括分析分类肠道微生物的引物组合物的试剂盒及应用。
技术介绍
动物胃肠道内庞大多样的微生物群落与动物的食性、机体的免疫功能、疾病与健康等有着密切联系，越来越引起重视并成为研究热点。然而采用传统方法破环性的采集胃肠道样品对其进行研究受到很大制约，且对于野生保护动物并不可取，因此很多研究都以动物的粪便作为研究样品。科学家们还发现，不同国家人群中的肠道微生物存在很多差异，差异最显著的是微生物的多样性程度。例如：印第安人和马拉维人的肠道微生物组比美国人的肠道微生物具有更大的多样性。有观点认为，微生物多样性程度越高，人体越健康。该研究还发现，尽管来自三种不同地域人群的肠道微生物组存在很多差异，但它们之间也存在惊人的相似性。如，三个不同国家的婴儿微生物组形成过程具有共同的模式，即婴儿需要6-9个月的时间来获得第一组6-700个细菌，然后再经过几年的时间才能获得成人的微生物组。该研究还发现了一个非常有趣的现象，即肠道微生物组的构成会随年龄增长而发生改变，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分析肠道微生物的试剂盒，其包含用于构建肠道微生物文库的引物组合物，所述引物组合物包括两组引物，具体如下：第一组引物，所述第一组引物包含第一正向引物和第一反向引物，其中，所述第一正向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：第一测序通用引物、1‑7bp的随机碱基序列和肠道微生物16S rRNA V3‑V4区特异性正向引物；所述第一反向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：第二测序通用引物、1‑7bp的随机碱基序列和肠道微生物16S rRNA V3‑V4区特异性反向引物；第二组引物，所述第二组引物包含第二正向引物和第二反向引物，其中，所述第二正向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分...

【技术特征摘要】
1.一种用于分析肠道微生物的试剂盒，其包含用于构建肠道微生物文库的引物组合物，所述引物组合物包括两组引物，具体如下：第一组引物，所述第一组引物包含第一正向引物和第一反向引物，其中，所述第一正向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：第一测序通用引物、1-7bp的随机碱基序列和肠道微生物16SrRNAV3-V4区特异性正向引物；所述第一反向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：第二测序通用引物、1-7bp的随机碱基序列和肠道微生物16SrRNAV3-V4区特异性反向引物；第二组引物，所述第二组引物包含第二正向引物和第二反向引物，其中，所述第二正向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：P5端接头序列、第一标签序列和第一测序通用引物的部分序列；所述第二反向引物从5’到3’端包括依次相连的三个部分：P7端接头序列、第二标签序列和第二测序通用引物的部分序列。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一测序通用引物和所述第二测序通用引物独立地选自任意一种二代测序平台的测序通用引物；优选地，所述第一测序通用引物的核酸序列如SEQIDNO.1所示，所述第二测序通用引物的核酸序列如SEQIDNO.2所示；优选地，所述随机碱基的碱基个数为3-5个；优选地，所述肠道微生物16SrRNAV3-V4区特异性正向引物的核酸序列如SEQIDNO.3所示，所述肠道微生物16SrRNAV3-V4区特异性反向引物的核酸序列如SEQIDNO.4所示。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述P5端接头序列的核酸序列如SEQIDNO.5所示，所述P7端接头序列的核酸序列如SEQIDNO.6所示；优选地，所述第一标签序列如SEQIDNO.7-16所示，所述第二标签序列如SEQIDNO.17-26所示；优选地，所述第一测序通用引物的部分序列如SEQIDNO.27所示，所述第二测序通用引物的部分序列如SEQIDNO.28所示。4.一种肠道微生物的分析方法，其特征在于，采用如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，包括如下步骤：(1)样本基因组DNA的提取；(2)扩增子文库的构建：进行两轮PCR扩增，第一轮PCR扩增采用第一组引物组，第二轮PCR扩增采用第二组引物组，构建高通量测序文库；(3)数据分析。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述样本来源于粪便、土壤、尿液或唾液中的任意一种或至少两种的组合，优选为来源于粪...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永亮，穆延召，周燕，
申请(专利权)人：苏州普瑞森基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32